比率性的、在红光谱中发射的荧光钙指示剂制造技术

用于测量胞质钙浓度的新一代荧光离子指示剂。这些新的指示剂在可见光谱的红光部分发射并且是比率性的。当用氩激光器在488nm处激发时，这种比率性包括在结合钙时发射中的位移。当用可见光在更长的波长处激发时，这些指示剂还显示出红色荧光的显著增强。像所有钙指示剂一样，它们包含基于BAPATA（二氨基苯基四乙酸）的常规螯合部分以及一个荧光基团部分，该荧光基团部分是能够实现比率性的半萘并荧光素/半萘并罗丹明或者二萘并荧光素。与其他萘并荧光素不同，已对萘并部分进行了pKa调节，以使其适合于生物学上的钙测定。本发明专利技术涉及这些指示剂的结构，并且还涉及合成这些指示剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】比率性的、在红光谱中发射的荧光钙指示剂专利技术人阿夸西 敏塔(AKWASI MINTA)和佩德罗 洛格里奥 艾斯凯米拉(PEDR0R0GELI0 ESC AMILLA)相关申请本申请涉及申请人于2010年10月17日提交的美国临时专利申请号61/252，654，并要求该申请的优先权日。背景-专利
本申请涉及长波长的荧光离子指示剂的设计以及合成。背景-现有技术 最常见的比率性荧光钙指示剂包括Fura-2 (激发位移)并且Indo-I (发射位移)iO比率法具有的独特优点是消除钙测量中的可变的影响，比如指示剂浓度、细胞负载的程度、光漂白作用、检测器灵敏度、细胞厚度和光路。这实质上是一个允许进行校准和定量测定的理想特性。然而，这些常见的比率性染料在紫外光下起作用。UV光学昂贵，并因此限制了这些染料的普遍应用。这种高能量UV光还可能会伤害细胞。当用UV光激发时，归因于核苷酸和一些氨基酸的内源荧光也会在测定中引起干扰，尽管比率法确实会缓解这个问题。常见的可见波长荧光离子指示剂，Fluo染料n，并不显示出比率性。它们只是在结合钙时显著地增强发射强度。基线并不容易划定，但是利用锰或镍可以有效估测实验中的基线或背景。存在两种比率性的长波长指示剂。第一种，BTCm，具有非常高的解离常数Kd，这解离常数一不允许测量胞质钙浓度(纳摩尔)微小改变的。第二种，Fura-Rediv,由于其疏水性，在水中具有低量子产率，并且因此在细胞研究中没有发现太多应用。专利技术概述本专利技术是一个新的钙指示剂家族，这些钙指示剂在红光或可见光谱的近红外光中发射，并且根据激发波长，这些钙指示剂在结合钙时使发射波长发生位移。结合钙时，在它们的最大吸收波长处激发会产生荧光大量增强，而波长没有发生位移。这一新的钙指示剂家族由四种不同的化合物及其变体来代表。这些化合物中的第一种包含一个通过碳-碳键与一个荧光基团(假定的半萘并荧光素或半萘并罗丹明)共轭的BAPTA主链。这些染料的最大发射在红光650nm处。该半萘并荧光素和半萘并罗丹明的pKa通过氟和氯对萘酚部分的卤化作用而降低。因此，非卤化的半萘并荧光素的PKa通过2-邻位卤化作用从7. 8降至5. 5，从而使得这些染料对细胞中小的PH变化没有反应。化合物I :权利要求1.一种化学化合物，具有以下通式2.一种化学化合物，具有以下通式全文摘要用于测量胞质钙浓度的新一代荧光离子指示剂。这些新的指示剂在可见光谱的红光部分发射并且是比率性的。当用氩激光器在488nm处激发时，这种比率性包括在结合钙时发射中的位移。当用可见光在更长的波长处激发时，这些指示剂还显示出红色荧光的显著增强。像所有钙指示剂一样，它们包含基于BAPATA(二氨基苯基四乙酸)的常规螯合部分以及一个荧光基团部分，该荧光基团部分是能够实现比率性的半萘并荧光素/半萘并罗丹明或者二萘并荧光素。与其他萘并荧光素不同，已对萘并部分进行了pKa调节，以使其适合于生物学上的钙测定。本专利技术涉及这些指示剂的结构，并且还涉及合成这些指示剂的方法。文档编号C07D279/00GK102770417SQ201080052796 公开日2012年11月7日 申请日期2010年10月18日 优先权日2009年10月17日专利技术者佩德罗·罗杰利奥·埃斯卡米利亚, 阿夸西·敏塔 申请人:阿桑特研究公司本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿夸西·敏塔，佩德罗·罗杰利奥·埃斯卡米利亚，
申请(专利权)人：阿桑特研究公司，
类型：发明
国别省市：