本发明专利技术涉及VAP-1的抑制剂，及其作为药物在治疗纤维变性疾病中的用途。此外，本发明专利技术涉及基于在体液中可溶性VAP-1或SSAO活性的升高水平诊断纤维变性疾病的方法，并涉及用于所述诊断方法的试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及VAP-I的抑制剂及其作为抗纤维变性剂的用途。此外，本专利技术涉及诊断纤维变性疾病的方法以及用于所述诊断方法的试剂盒。
技术介绍
纤维变性疾病通常在创伤或慢性炎症后作为受干扰的伤口愈合过程的结果存在。纤维变性病理在定期暴露于化学和生物损害的器官，例如肝、肺、皮肤和肾中特别常见。无论病症是急性的还是慢性的，它们都具有共同的特征，即异常的成纤维细胞活化和胞外基质(ECM)的积累，导致器官功能的丧失，因为瘢痕组织替代了正常组织。该疾病是渐进的，常常是不可逆，具有差的预后和存活率。不考虑损伤的原因，纤维变性瘢痕的组成与损伤非常类似。纤维变性严重程度的诊断和验证从预后观点看极其重要。治疗的决策过程高度取决于对纤维变性的评估、其进 程以及并发症的发作。在肝纤维变性中，经皮的肝活组织检查是分级和分期肝病的金标准。然而，这是侵入性操作，通常具有与疼痛和不适相关的某些不可避免的风险和并发症。死亡率(归因于该操作的并发症)为1:1000至1:10000 (Crockett等人，2006)。发现血清单胺氧化酶活性水平在患与纤维变性相关的肝硬化、慢性肝炎和肝癌的患者中升高，但发现在患炎性结缔组织疾病例如类风湿性关节炎或系统性红斑狼疮的患者中是正常的(McEwen 和 Castell 1967，J Lab Clin Med. 70 :36-47 ;Ito 等人1971Digestion. 4 :49-58 ;Ma Lin 等人，1976，Proc Soc Exp Biol Med. 151:40-3)。然而，已经考虑将升高的血清单胺氧化酶活性仅作为标志物或者作为对组织损伤的应答，并且其在纤维变性的发病机理中的作用还未知。常规的治疗方法使用皮质类固醇和免疫抑制药物，主要靶向纤维变性的炎症过程。然而，不幸的是这些药剂具有很少的临床效果或者没有临床效果，并且存在治疗纤维变性疾病的新药物的明显需求。专利技术简述本专利技术的一些目的涉及作为抗纤维变性剂的VAP-I抑制剂、VAP-I抑制剂用于生产治疗纤维变性疾病的药物的用途，以及在需要其的人类受试者中预防、治疗或者减轻纤维变性疾病的方法，所述方法包括将有效量的VAP-I抑制剂施用给所述患者。本专利技术另外的目的是提供在受试者中诊断纤维变性疾病的方法。该方法包括a)提供来自所述受试者的体液样品，b)在所述样品中测定可溶性VAP-I (sVAP-1)的量或者SSAO活性，c)基于sVAP-1的所述量或者SSAO活性诊断纤维变性。根据需要，可以将sVAP_l的量或者SSAO活性与参照体液中sVAP-1的量或者SSAO活性比较。本专利技术另外的目的是提供在诊断纤维变性疾病的方法中使用的试剂盒。在上述目的的一些实施方案中，VAP-I抑制剂是抗VAP-I抗体，例如包含选自SEQID NO 1-3的1-3个⑶R共有序列的完全人的抗VAP-I抗体和/或包含选自SEQ ID NO24-26的1-3个CDR共有序列的轻链多肽。在一些其他的实施方案中，所述抗VAP-I抗体具有包含选自SEQ ID N04-8的第一⑶R序列、选自SEQ ID NO 9-13的第二⑶R序列和选自SEQID NO 14-18的第三CDR序列的重链多肽和/或包含选自SEQ ID N027-31的第一 CDR序列、选自SEQ ID NO 32-36的第二 CDR序列和选自SEQ ID NO 37-41的第三CDR序列的轻链多肽。在一些另外的实施方案中，所述抗VAP-I抗体具有包含选自SEQ IDNO 19_23的氨基酸序列的重链可变区和包含选自SEQ ID NO 42-46的氨基酸序列的轻链可变区。又在一些另外的实施方案中，所述抗体是重组的完全人重组抗体，其包含在SEQ ID NO 47中所述的重链多肽和在SEQ IDNO 48中所述的轻链多肽。在上述目的的一些其他实施方案中，VAP-I抑制剂是SSAO抑制剂，例如选自肼衍生物、丙烯基胺和炔丙基胺、4-取代的-2- 丁炔基胺、卤代烯丙基胺、吡咯啉衍生物、炔丙基二胺、烯丙基胺、二胺、4，5，6，7-四氢咪唑并吡啶衍生物、氨基硫羰基衍生物、羧 酰胺、磺酰胺、噻唑和/或胍衍生物、肟衍生物、二肼、芳基烷基胺(arylalkylamine)恶唑烷酮、卤代烷基胺、苯磷硫胺和咪唑并吡啶衍生物。在上述目的的一些另外的实施方案中，纤维变性疾病选自肝纤维变性和诱发其的炎症疾病，即急性和慢性肝炎、胆道疾病和中毒性肝损伤、肺纤维变性、肾纤维变性，包括糖尿病性肾病导致的肾纤维变性，骨髓纤维变性、胰纤维变性、硬皮病、结缔组织疾病、瘢痕、皮肤纤维变性、心脏纤维变性、器官移植、血管狭窄、再狭窄、动脉纤维变性、关节纤维变性(arthrofibrosis)、乳房纤维变性、肌肉纤维变性、腹膜后纤维变性、甲状腺纤维变性、淋巴结纤维变性、膀胱纤维变性、胸膜纤维变性和C0PD，所述COPD是这样的疾病，其中气管壁随成肌纤维细胞和胶原的积累而纤维变性，并且与所有纤维变性组织一样，是收缩的。本专利技术的其他特定实施方案描述于所附权利要求中。本专利技术的其他目的、细节和优点从以下附图、详细说明和实施例中看是显而易见的。附图简述以下，本专利技术将参照附图通过优选的实施方案更加详细地描述，附图中图I显示施用VAP-I抗体BTT-1029导致了对CCI4诱导的肝纤维变性的几乎完全保护。来自用矿物油(MO，对照组)、CCI4或CCI4与VAP-I抗体平行注射的WT和VAP-1敲除小鼠的Sirus red染色。使用Image J阈值分析进行纤维变性瘢痕的定量测量。显示了3组实验的平均值土SEM。放大倍数X 10。图2显示尽管进行了 CC14-纤维变性诱导，但VAP-I抗体处理的肝和VAP-I敲除肝都显示明显缺少肝炎和坏死区域。显示了在X20放大倍数下，突出坏死肝细胞(箭头)和正在进行的肝炎(箭头)的苏木精和伊红染色。图3显示VAP-I抗体阻止了在纤维变性组织中胶原蛋白IV和弹性蛋白表达的增力口。使用Image J阈值分析进行胶原蛋白IV、弹性蛋白和层粘连蛋白染色的定量测量。显示了 3组实验的平均值土SEM。图4图解了 mRNA水平表明VAP-1对肝星形细胞和成纤维细胞的调节作用。显示了弹性蛋白、aSMA、VAP-I和TMPl的定量RT-PCR分析。数据显示为来自测量了 3次的3只小鼠的平均值 +SEM0 *p < 0. 05、**< 0. 01、…< 0. OOl(ANOVA)。图5显示应答CCI4诱导的肝纤维变性增加的血清中可溶性VAP-I和SSAO活性。图5A图解了用时间分辨荧光DELFIA测定法分析的血清中CCI4诱导的肝纤维变性对可溶性VAP-I水平的影响。图5B显示用放射化学测定法，在来自CCI4诱导的WT肝的血清中发现的SSAO活性的增加水平。图6显示了在VAP-I敲除小鼠和VAP-I抗体处理的C57BL/6小鼠中拯救的由CCI4诱导的肾小球病变。显示了在X40放大倍数下，突出肾小球的苏木精和伊红染色。图7图解了在VAP-I敲除小鼠和VAP-I抗体处理的小鼠中胶原蛋白积累显著降低(由于CCI4诱导的肾小球纤维变性)。显示了来自用矿物油(MO，对照组)、CCI4或CCI4与VAP-I抗体平行注射的WT和VAP-I敲除小鼠本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·韦斯顿，L·C·克拉里德格，D·亚当斯，D·史密斯，N·韦斯特伦德，M·皮赫拉维斯托，T·厄斯特曼，
申请(专利权)人：生物结治疗公司，伯明翰大学，
类型：发明
国别省市：
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