【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及了一种荧光纳米银簇探针检测microRNA的分析方法，属于检测分析领域。
技术介绍
microRNA是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约18 25个核苷酸。它参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等。近期研究发现，miCToRNA在肿瘤发生过程中起至关重要的作用，已成为一类理想的肿瘤标记物。所以定量检测miCToRNA对了解其生物功能，癌症的早期诊断以及新药的开发，都具有十分重要的意义。与传统的核酸检测相比，miCToRNA其独有的特点，如序列短，家族序列同源性高及低丰度表达，增加了其检测的难度。目前检测microRNA的方法主要有Northern印迹分析,微阵列芯片技术,聚合酶链式反应(PCR)等。虽然Northern印迹是当前microRNA分析的标准方法,但操作繁琐,耗时长，灵敏度低，分析检测时需要大量的样品及分离富集步骤，而且对污染非常敏感，实验中每一步操作不当都会影响分析结果。微阵列芯片技术虽然可实现高通量，多组分同时检测，但是其制作和检测费用高；芯片上可...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用恒温扩增反应合成荧光纳米银簇探针检测HiiCT0RNA的分析方法，其特征在于，利用IESmicroRNA与DNA扩增模板结合后,诱导恒温扩增反应和nicking核酸内切酶特异性的酶切反应得到大量单链DNA产物，该单链DNA产物与加入的硝酸银溶液在硼氢化钠还原作用下制备荧光纳米银簇探针，测定反应体系中的荧光信号并计算荧光信号改变值，与标准工作曲线比对，推算出祀标microRNA的浓度。2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述荧光纳米银簇探针粒径为I 10nm，激发波长为500 680nm，发射波长为510 900nm。3.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述的靶标microRNA检测包括以下操作步骤 步骤I将靶标microRNA加入到DNA扩增模板溶液中，进行孵育反应； 步骤2向步骤I中所得的反应液中加入恒温扩增混合液，孵育反应后，热失活酶，终止反应; 步骤3向步骤2中所得的反应液中加入硝酸银溶液，混匀后，离心取上清，然后加入硝酸银溶液和新鲜配制的硼氢化钠溶液，在黑暗中反应合成荧光纳米银簇； 步骤4测定步骤3中所得的荧光纳米银簇溶液的荧光信号。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤I中靶标microRNA来自于组织、血液或细胞的生物样本。5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤I中的孵育反应在37°C 55°C和反应缓冲溶液中，步骤I中的DNA扩增模板反应液和靶标microRNA的体积比为O. I 10，反应时间为5 50分钟，所述的DNA扩增模板浓度为10 800nM ;所述的靶标microRNA浓度为IaM IOOnM ;所述的DNA扩增模板和靶标microRNA所述的DNA扩增模板含有三种功能序列与靶标microRNA结合序列，nicking核酸内切酶酶切序列和合成荧光纳米簇的DNA互补序列，所述的反应缓冲溶液为25mM Tris-...
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