抑制RNA干扰脱靶效应的特异性修饰制造技术

本发明专利技术提供了一种化学修饰的双链小干扰RNA(siRNA)分子及其制备和应用方法。通过在siRNA分子正义链从5’端起第14位点或/和第16位点引入化学修饰的核苷酸，从而降低修饰的siRNA分子正义链引起的脱靶效应，增强修饰的siRNA分子对靶基因表达沉默的特异性。

Specific modification of off target effect of RNA interference suppression

The present invention provides a chemically modified double stranded small interfering RNA (siRNA) molecule and a method for making and using the same. By the end of 5 from the fourteenth 'nucleotide sites or / and sixteenth sites into the chemical modification of siRNA molecules in the justice chain, thereby reducing the target effects of siRNA molecular chain modification caused by justice, enhanced siRNA molecular modification of specific expression of target gene silencing.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及核酸
，具体涉及一种具有降低正义链脱靶效应的化学修饰的双链小干扰RNA (SiRNA)分子及其制备方法，以及该种修饰的SiRNA分子在制备药物组合物中的应用。
技术介绍
RNA 干扰(RNA interference, RNAi)是由双链 RNA 分子(double-stranded RNA,dsRNA)在mRNA水平降低同源基因表达的现象。RNA干扰技术又被形象地称为基因敲低(knock-down)或基因沉默(gene silencing),是一种转录后基因表达调控方法，因此又被称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)。最早有关RNA干扰的报道出现在1990年左右，由两个不同的研究小组同时报道了在转基因植物中发现的RNA 干扰现象，随后又在线虫、果蝇、斑马鱼以及小鼠等几乎所有后生生物中观察到RNA干扰现象。1999年，Hamilton和Baulcombe在发生RNA干扰现象的植物中检测到长度为21-25个核苷酸的双链RNA片段，这些双链RNA片断被证明是产生RNA干扰现象所必需的，被称作小干扰核酸(small interfering RNA, siRNA)。双链siRNA与细胞源性的相关酶和蛋白质形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex, RISC)是RNA干扰的效应分子。通常认为，在RNA干扰过程中，双链siRNA中的正义链(过客链)被RISC复合体排出，反义链指导RISC复合体结合到目标mRNA上的同源位点，然后由复合物中的核糖核酸酶111降解目标mRNA，从而关闭靶基因的表达。事实上，对于一个标准的双链siRNA，它的两条链均能参与RISC复合体的结合，也就是说，除了 siRNA的反义链(引导链)能够介导同源基因的表达沉默外，siRNA的正义链(过客链)也能介导其同源基因的表达沉默，引发由正义链介导的脱靶效应。在基因功能研究中，siRNA正义链的这种脱靶效应可能会导致错误解读siRNA的抑制活性；而在小核酸制药中，则有可能引发siRNA药物的毒副作用等一系列后果，这些都将严重影响RNA干扰技术的应用。因此，降低siRNA分子正义链的脱靶效应，提高RNA干扰的特异性是目前迫切需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术涉及以下按顺序编号的段落中定义的主题I、分离的化学修饰的双链小干扰RNA(SiRNA)分子，包含正义链(过客链)和反义链(引导链)，其特征在于所述修饰的siRNA分子的正义链自5’端起第14位点的核苷酸为化学修饰的核苷酸。2、分离的化学修饰的双链小干扰RNA (siRNA)分子，包含正义链(过客链)和反义链(引导链)，其特征在于所述修饰的siRNA分子的正义链自5’端起第16位点的核苷酸为化学修饰的核苷酸。3、分离的化学修饰的双链小干扰RNA (siRNA)分子，包含正义链(过客链)和反义链(引导链)，其特征在于所述修饰的siRNA分子的正义链自5’端起第14位点和第16位点的核苷酸为化学修饰的核苷酸。4、根据段落1-3任一项所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰选自以下修饰方式中的一种或几种(I)对核苷酸中核糖的化学修饰；(2)对核苷酸中碱基的化学修饰；(3)对核苷酸之间磷酸二酯键的化学修饰。5、根据段落4所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰为对核苷酸中核糖2’ -OH的修饰。 6、根据段落5所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰为核苷酸中核糖2’ -OH被甲氧基或氟取代。7、根据段落4所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰为核苷酸之间的磷酸二酯键被硫代磷酸酯键取代。8、根据段落4所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰为核苷酸的碱基被非RNA碱基取代。9、根据段落8所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述非RNA碱基选自胸腺卩密唳(thymine)、5_甲基胞卩密唳(5-methylcytosine)、异胞卩密唳(isocytosine)、假异胞卩密唳(pseudoisocytosine)、5_溴尿卩密卩定(5-bromouracil)、5_丙块基尿喃唳(5-propynyluracil)、5-丙块基-6-氟代尿卩密唳(5-propyny-6-fIuoroluracil)、5-甲基噻唑尿卩密唳(5-methylthiazoleuracil)、6_ 氨基嘌呤(6-aminopurine)、2_ 氨基嘌呤(2-aminopurine)、肌苷(inosine) >2,6- 二氨基嘌呤(2,6-diaminopurine)、7-丙炔基-7-脱氮腺嘌呤(7-propyne-7-deazaadenine)、7_丙炔基_7_脱氮鸟嘌呤(7-propyne-7-deazaguanine)、2-氯 _6_ 氨基嘌呤(2-chloro-6_aminopurine)。10、根据段落8所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰为核苷酸的碱基被DNA碱基取代。11、根据段落1-10任一项所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述siRNA分子的正义链和反义链的长度为15-35个核苷酸。12、根据段落11所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述siRNA分子的正义链和反义链的长度为19-23个核苷酸。13、根据段落12所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述siRNA分子的正义链和反义链的长度为21个核苷酸。14、根据段落1-14任一项所述的化学修饰的siRNA分子,其特征在于所述siRNA分子为平末端的siRNA分子。15、根据段落1-14任一项所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述siRNA分子为3’突出末端的siRNA分子。16、根据段落15所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述siRNA分子为具有1-6个3’突出末端的siRNA分子。17、根据段落16所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述siRNA分子为具有2-4个3’突出末端的siRNA分子。18、一种药物组合物，其特征在于含有段落1-17任一项所述的化学修饰的siRNA分子及药学上可接受的载体。19、段落1-17任一项所述的化学修饰的siRNA分子在制备药物组合物中的应用。20、一种降低siRNA分子正义链脱靶效应的方法，其特征在于对所述siRNA分子的正义链自5’端起第14位点的核苷酸进行化学修饰。21、一种降低siRNA分子正义链脱靶效应的方法，其特征在于对所述siRNA分子的正义链自5’端起第16位点的核苷酸进行化学修饰。22、一种降低siRNA分子正义链脱靶效应的方法，其特征在于对所述siRNA分子的正义链自5’端起第14位点和第16位点的核苷酸进行化学修饰。23、根据段落20-22任一项所述的降低siRNA分子正义链脱靶效应的方法，其特征 在于所述化学修饰选自以下修饰方式中的一种或几种(I)对核苷酸中核糖的化学修饰；(2)对核苷酸中碱基的化学修饰；(3)对核苷酸之间磷酸二酯键的化学修饰。24、根据段落23所述的降低siRNA分子正义链脱靶效应的方法，其特征在于所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分离的化学修饰的双链小干扰RNA(siRNA)分子，包含正义链(过客链)和反义链(引导链)，其特征在于所述修饰的siRNA分子的正义链自5’端起第14位点的核苷酸为化学修饰的核苷酸。2.分离的化学修饰的双链小干扰RNA(SiRNA)分子，包含正义链(过客链)和反义链(引导链)，其特征在于所述修饰的siRNA分子的正义链自5’端起第16位点的核苷酸为化学修饰的核苷酸。3.分离的化学修饰的双链小干扰RNA(SiRNA)分子，包含正义链(过客链)和反义链(引导链)，其特征在于所述修饰的siRNA分子的正义链自5’端起第14位点和第16位点的核苷酸为化学修饰的核苷酸。4.根据权利要求1-3任一项所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰选自以下修饰方式中的一种或几种 (1)对核苷酸中核糖的化学修饰； (2)对核苷酸中碱基的化学修饰； (3)对核苷酸之间磷酸二酯键的化学修饰。5.根据权利要求4所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰为对核苷酸中核糖2’ -OH的修饰。6.根据权利要求5所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰为核苷酸中核糖2’ -OH被甲氧基或氟取代。7.根据权利要求4所述的化学修饰的siRNA分子，其特征在于所述化学修饰为核苷酸之间的磷酸二酯键被硫代磷酸酯键取代。8...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜权，梁子才，
申请(专利权)人：百奥迈科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：