本发明专利技术红藤活性部位、在制备抗炎免疫和抗衰老药物中的应用，属于医药技术领域。本发明专利技术中红藤用水回流提取，经乙醇沉淀得红藤多糖和水溶性部位。红藤50%-80%乙醇回流提取液依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分级萃取，制得石油醚部位、二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位，剩余水相经大孔吸附树脂HP-20处理，得水溶性部位。经药效学实验研究表明，四个部位对二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致大鼠足肿胀具有显著的抑制作用，并且能够降低足跖炎症组织中MDA和PGE2含量。上述四种部位具有较好的体外抗氧化活性，能够有效降低血清和肝脏组织中MDA含量，增强SOD活性。因此可以用于制备抗炎免疫药物和抗衰老药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体涉及从中药材红藤中制备具有抗炎免疫活性和抗衰老活性的部位，及在制备抗炎免疫药物和抗衰老药物方面的应用。
技术介绍
红藤为大血藤科植物大血藤Sargentodoxa cuneata(Oliv. )Rehd. et ffils.的藤茎。具有解毒消痈、活血止痛、祛风除湿等功效，临床上单独或组方用以治疗跌打损伤、风湿性关节炎等病症。近年来研究发现，红藤主要含有酚类、有机酸、木脂素、三萜皂苷、黄酮、蒽醌等化学成分。现代药理学研究表明红藤提取物或化合物具有保护心血管系统、抗病毒、抗 肿瘤、抗菌、抗氧化等生物活性。红藤水煎剂在小鼠模型中表现出免疫抑制作用，能够降低小鼠的吞噬指数、IgM生成量、外周血T淋巴细胞数目和T、B淋巴细胞转化率，对小鼠的T淋巴细胞介导的细胞免疫和B淋巴细胞介导的体液免疫均具有抑制作用(李莉，等.中国免疫学杂志.2009, 25(3)，223-224)。红藤水煎液明显降低大鼠滑膜基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达(付钰，等.贵州医药.2009，33 (12)，1097-1099)。红藤中的两种酚性糖苷有明显抑制绵羊生殖腺前列腺素合成酶的活性，并且具有明显的抗炎活性(Sakakibara I, etal.，JP 06199885.)。红藤作为一种常用中药，无明显毒副作用，临床使用安全，适于做进一步的研究开发。目前该药材在抗炎免疫方面的研究以药材水煎剂和个别化合物为主，尚无红藤提取物进一步精制至活性部位并用于制备抗炎免疫药物的报道。红藤提取物和活性部位在抗衰老方面的研究和应用也未见报道。为了测试和评估本专利技术红藤活性部位的抗炎免疫活性和抗衰老方面的应用潜力，已使用本领域技术人员所熟知的方法测试药材各部位的生物活性。这些已知的测试方法包括二甲苯致小鼠耳肿胀测试法、角叉菜胶致大鼠足肿胀测试法，以及体内外抗氧化模型等，结果表明选定的红藤活性部位具有较好的抗炎免疫活性，在体内外抗氧化模型中都有较好活性，表现出良好的抗衰老应用潜力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供红藤具有抗炎免疫活性和抗衰老应用潜力的有效部位。红藤提取物的各部位经过广泛的抗炎活性筛选，确认红藤多糖、水溶性部位W1和红藤50%-80%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位和水溶性部位W2具有显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致大鼠足肿胀作用，显示出良好的抗炎免疫活性，并且在清除DPPH 自由基和还原力实验中表现出较好的体外抗氧化活性，能够显著降低血清和肝脏组织中丙二醛(MDA)含量，并且增加超氧化物歧化酶(SOD)活性，表明红藤的提取物具有良好的体内外抗氧化作用，具有抗衰老的潜力。因此，本专利技术的第一个方面涉及提供红藤四种活性部位及其制备方法红藤多糖(HTps)及水溶性部位W1 (HTffl)的制备方法，按照下述步骤进行干燥红藤药材，粉碎至20目粗粉，粉末在100°C下用水回流提取两次，每次3小时，提取液减压浓缩后，加无水乙醇，4°C -20°C下过夜沉淀，优选5-15°C ;3000r/min离心10_30min，优选15-20min ;干燥沉淀部分得红藤多糖(HTps);浓缩上清液至原体积的1/30-1/5，优选浓缩至原体积的1/20-1/10 ;过即-20大孔吸附树脂，先用水洗至近无色，再用2BV-10BV 80%(v/v)乙醇洗脱，优选4BV-6BV ;流速为10-60mL/min，优选20_30mL/min ;收集80%乙醇(v/v)洗脱液，浓缩，冷冻干燥得水溶性部位W1 (HTffl)。红藤乙酸 乙酯部位(HTae)和水溶性部位W2(HTw2)的制备方法，按照下述步骤进行红藤药材粉末中加入8-12倍的50%-80%乙醇回流提取，并过滤回收乙醇。红藤乙醇提取物用水分散，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分级萃取，减压浓缩回收溶剂，分别得到石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位(HTAE)、水部位。水部位浓缩至原体积的1/30-1/10，优选浓缩至原体积的1/20-1/15 ;过即-20大孔吸附树脂，先用水洗至近无色，再用 2BV-10BV 95%(v/v)乙醇洗脱，优选 4BV-6BV ;流速为 10_60mL/min，优选 20_30mL/min ;收集95%乙醇洗脱液，浓缩得水溶性部位W2 (HTff2)。本专利技术第二个方面涉及对所述四个部位用于制备抗炎免疫和抗衰老药物的用途。分别观察样品在不同剂量下对二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀度、角叉菜胶致大鼠足跖炎性组织中前列腺素(PGE2)和丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明红藤的四个活性部位均具有显著的抗炎免疫活性，可用于制备治疗炎性病症如风湿或类风湿性关节炎等疾病的药物。同时在体外模型中具有显著的抗氧化活性，并能够显著降低血清和肝脏组织中MDA含量，并且增加SOD活性，表明红藤活性部位在制备抗衰老药物方面具有良好的潜力。本专利技术第三个方面涉及提供红藤活性部位与药学上可接受的辅料组成的药物组合物。红藤活性部位可单独或几种部位组合，再进一步与辅料组合，剂型包括片剂、胶囊、膏剂、贴剂、注射剂等。本专利技术所述的载体或赋形剂包括药剂学常规应用的载体和赋形剂，例如填充剂、粘合剂、防腐剂、矫味剂、稀释剂、着色剂等。下面的实施例和生物活性实验是对本专利技术的进一步详细说明，以下所列举的实施例不以任何方式构成限制。具体实施例方式实施例I红藤多糖(HTps)及水溶性部位W1 (HTffl)的制备取70g粉碎成20目左右的干燥红藤茎，100°C下用8倍量纯净水回流提取两次，每次3小时，合并提取液减压浓缩至200mL，加无水乙醇至IOOOmL,置4°C冰箱中过夜沉淀，离心，干燥沉淀得HTPS2. Sg ;浓缩上清液，过HP-20大孔吸附树脂，先用水洗至无糖类物质，再用80%乙醇洗至澄清，收集80%乙醇洗脱液浓缩，冷冻干燥得HTW13. 4g。实施例2乙酸乙酯部位(HTae)和水溶性部位W2 (HI12)的制备取80g粉碎成20目左右的干燥红藤茎，10倍量80%乙醇在85°C下水浴回流提取两次，每次2h，合并提取液，减压回收乙醇。红藤乙醇提取物用水分散，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，减压浓缩回收溶剂，分别得到石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、水部位。水部位浓缩后经HP-20大孔吸附树脂，先用水洗脱至无色，再用95%乙醇洗脱至无色，收集95%乙醇洗脱液浓缩得水溶性部位W2,冷冻干燥得HTae 2. 62g，HTW25. 96g。实施例3HTPS、HTffl, HTae和HTw2对二甲苯致小鼠耳肿胀反应的影响选取20±2g昆明种小鼠80只，随机分为10组，雌雄各半，每组8只。第I组1%吐温-80，空白对照组；第2组25mg/kg吲哚美辛，阳性对照组 ’第3、4组HTPS高低剂量组(200mg/kg, 100mg/kg);第5、6 组HTW1 高低剂量组(200mg/kg, 100mg/kg);第7、8 组HTAE 1 低剂量组(200mg/kg, 100mg/kg);第 9、10 组HTW2 高低剂量组(200mg/kg, 100mg/kg)。各组小鼠以20mL/kg灌胃给药Ih后，将小鼠右耳涂50 u L 二甲苯致炎，半小时后将小鼠颈椎脱 臼处死，用直径为本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.红藤多糖及水溶性部位的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行干燥红藤药材，粉碎至20目粗粉，粉末在100°C下用水回流提取两次，每次3小时，提取液减压浓缩后，加无水乙醇，4°C-20°C下过夜沉淀，3000 r/min离心10-30 min,干燥沉淀部分得红藤多糖；浓缩上清液至原体积的1/30-1/5 ;过即-20大孔吸附树脂，先用水洗至近无色，再用2BV-10BV体积比80%的乙醇洗脱，流速为10-60 mL/min，收集体积比80%乙醇洗脱液，浓缩，冷冻干燥得水溶性部位。2.根据权利要求I所述的红藤多糖及水溶性部位的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行干燥红藤药材，粉碎至20目粗粉，粉末在100°C下用水回流提取两次，每次3小时，提取液减压浓缩后，加无水乙醇，5-15°C下过夜沉淀；3000 r/min离心15-20 min ;干燥沉淀部分得红藤多糖；浓缩上清液至原体积的1/20-1/10 ;过即-20大孔吸附树脂，先用水洗至近无色，再用4BV-6BV体积比8...
【专利技术属性】
技术研发人员：汤建，马瑞丽，欧阳臻，张蓉，徐秀泉，于小凤，闻崇炜，赵神洲，许辉，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：
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