本发明专利技术提供了一种防治桃小食心虫的白僵菌制剂及其制备方法，步骤包括：将保藏号为CGMCC?No.4526的球孢白僵菌菌种接入装有含健康桃小食心虫虫尸浸出液的PDA斜面培养基的试管中培养，再经二级菌种培养、三级固体扩大培养，最后制备成菌粉制剂。本发明专利技术菌粉制剂用于防治桃小食心虫具有较好的效果，防治效果最高可达90.5%，当年果园蛀果率降低83.8%-93.6%。本发明专利技术菌粉制剂特别适用于北方干旱低温地区防治桃小食心虫使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物制剂，具体属于ー种用于防治桃小食心虫的球孢白僵菌制剂及其制备方法。
技术介绍
桃小食心虫(简称桃小)是危害严重的果树食心虫类害虫。在北方果园普遍发生，危害苹果、枣、梨、桃、杏、山楂等10多种果树的果实，给果农造成很大的经济损失。以往主要使用化学杀虫剂对桃小进行防治。不仅会引起环境污染、杀伤天敌昆虫、使害虫产生抗药性等一系列问题。而且还会造成农药残留，降低果实的品质。应用昆虫病原菌开展生物防治，是实现害虫可持续控制的重要途径。我国从20世纪70年代以来，就开始了利用白僵菌防治桃小食心虫的研究，取得了很大成绩。 但是，第一由于桃小食心虫是蛀果害虫，整个幼虫生长期都在果实内部。而现在常用的防治方法是先用监测预报方法查知越冬幼虫出土盛期及成虫出现期后，再施用化学或生物杀虫剂，一季需要喷施2 3次。需要较大的人力和物力进行监测和实施。第二，由于白僵菌生长繁殖一般需要较高的湿度和适当的温度。在北方成功应用白僵菌防治桃小食心虫就要求有适应北方干旱低温环境的本地优良菌种，即必须获得北方环境中自然生存的桃小食心虫病原白僵菌的菌种，开发出适应北方地区的应用技木。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种防治桃小食心虫的白僵菌制剂，特别是适用于北方干旱低温地区防治桃小食心虫的白僵菌制剂，以及制备该制剂的方法。本专利技术提供的一种防治桃小食心虫的白僵菌制剂，是采用保藏号为CGMCCNo. 4526的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌种,通过固体培养,将培养物与营养型填料配制而成。所述的菌种，是专利技术人2009年从采自山西省襄汾县苹果园自然罹病的桃小越冬幼虫上分离获得的，分类命名球孢白僵菌(Beauveria bassiana),该菌种的菌株已于2011年I月5日保藏在北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种保藏号为CGMCC No. 4526。本专利技术提供的一种防治桃小食心虫的白僵菌制剂的制备方法，包括如下步骤(I) ー级斜面菌种培养将保藏号为CGMCC No. 4526的球孢白僵菌菌种接入装有含健康桃小食心虫虫尸浸出液的PDA斜面培养基的试管中，放入培养箱,在温度为200C _28°C、相対湿度为70% -85%条件下培养，待菌丝长满斜面并产满孢子时备用；一般培养时间为8-12天。(2) ニ级菌种培养在无菌条件下，将培养好的ー级斜面菌种连同培养基一起刮下，放入含有液体培养基的三角瓶中培养，接种量为每ー试管菌种接种3瓶，将接种后的三角瓶放入恒温震荡培养箱，200C -280C、150-200r/min,培养至培养液中长满菌丝球时备用；一般培养时间为10-15天。(3)三级固体扩大培养在无菌条件下，将ニ级菌种，按体积比为I : 10-25的接种量接入灭过菌的固体培养基中，在温度为20°C _28°C、相対湿度为70% -85%条件下培养，至培养基上长满白色菌丝，即得三级培养物；一般培养时间为25-30天。(4)菌粉制剂制备将原料按重量百分比计麦麸60-80，谷壳20-40(优选麦麸70，谷壳30)混匀，并按原料总重量加水60% -80%搅拌均匀，灭菌，冷却至室温后，即得填料；将填料与三级培养物按1-3 I比例在无菌室内搅拌均匀，分装，即得白僵菌菌粉制剂；其中，所述的含健康桃小食心虫虫尸浸出液的PDA斜面培养基配比为马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，桃小食心虫幼虫干虫尸10g/L。所述的液体培养基为SDAY培养基，其成份及配比为蛋白胨10g/L，酵母膏2g/L， 葡萄糖40g/L ；所述的固体培养基通过如下方法制得按重量百分比计，将原料麦麸68-72，谷壳26-30，奶粉1-4 (优选麦麸70，谷壳28，奶粉2)混匀，并加入原料总重量60% -80%的水，搅拌均匀，灭菌制得。本专利技术白僵菌菌粉制剂，可用于防治桃小食心虫，特别是适用于北方干旱低温地区防治桃小食心虫，也可用于气候温暖湿润地区防治桃小食心虫使用。防治效果可达82. 1%-90. 5%ο当年果园蛀果率降低83. 8%-93. 6%。白僵菌制剂的林间施用方法在发生桃小食心虫的树根基部外围I米左右的l-2cm厚的表层土拨开，将白僵菌菌粉制剂与土壤按I : O. 5-1.5比例拌匀后均匀撒施，然后再将表层土盖好即可；用量为150-250g/株，施用时间为秋季8、9月份桃小食心虫将要脱果入土越冬前。可在春季3、4月桃小食心虫越冬幼虫出土前追施一次，提高防治效果，用量为 100-200g/株。我们选择在秋季8、9月桃小食心虫幼虫从果实中出来进入土壤中越冬前将制备好的白僵菌菌粉制剂施入土壌中，这样可以使感染机会増加到幼虫入土结越冬茧前及脱茧后出土两次。由于白僵菌在土壌中有较强的宿存能力及较稳定的毒力和产孢水平。8、9月施入土壌中白僵菌孢子的毒力能持续到来年6月继续感染前期未被感染、越冬后的桃小幼虫。另外因为白僵菌的感染致死作用需要一定的时间，而桃小食心虫幼虫在土壌中的生活周期很长，可让白僵菌在此时期对越冬幼虫发挥感染致死作用。并且被感染的幼虫死亡后，白僵菌还能从虫尸上长出并产孢，増加土壌中白僵菌孢子含量，使其能持续在林间发挥作用，达到生物持续控制的长期效应。本专利技术白僵菌菌粉制剂的施用方法，利用了桃小食心虫在土壌中越冬的生活习性，发挥了菌种适应北方干旱低温环境及在土壤中长期宿存的特性，不仅能对当代桃小食心虫幼虫造成直接控制，而且能对来年越冬幼虫再次形成侵染。通过人工撒施白僵菌菌粉制剂，可以大大増加土壌的含菌量，提高了菌种防治效果；并且具有无污染、施用方便、节省了传统防治方法因监测桃小食心虫出土和羽化所耗费的人力物カ等优点。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进ー步的说明，但实施例不对本专利技术作任何形式的限定。实施例I本专利技术白僵菌菌粉制剂的制备(一 ) ー级斜面菌种培养I、斜面培养基的制备斜面培养基成分及其配比马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，桃小食心虫幼虫干虫尸10g, 7jc IOOOmL0其制备步骤①、称取桃小食心虫幼虫干虫尸IOg研碎，加入IOOOmL清水浸泡2_3小时。②、将马铃薯去皮挖芽后称取200g，切成长宽约Icm的小块后加入到浸泡的干虫尸液体中共煮沸，至马铃薯发软后用纱布过滤，取滤液。③、将此滤液补充水至IOOOmL,加入琼脂20g，煮沸。完全溶解后加入20g葡萄糖。培养基为自然pH值。 ④、滤液通过漏斗注入试管中，约占试管的1/5。试管ロ用棉塞和报纸密封。⑤、试管用121°C，1. 5pa/kg高压灭菌30min。灭完菌后及时取出，趁热将试管摆成斜面(高度约为试管的1/2)。⑥、待试管中培养基完全冷却凝固后，放入25°C恒温培养箱中培养24h,做无菌考察。然后取合格的准备接种。2、ー级斜面菌种培养将保藏号为CGMCC No. 4526的球孢白僵菌接种于装有上述斜面培养基的试管中，放入培养箱，在温度为25°C、相対湿度为75%条件下，培养10天，待菌丝长满斜面并产孢时，转入ニ级液体菌种培养。( ニ)ニ级液体菌种培养I、ニ级液体培养基的制备ニ级液体培养基成份组成蛋白胨50g、酵母膏10g、葡萄糖200g、水5000mL。其制备步骤①、在5000mL水中先加本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ー种白僵菌，其菌种保藏号为CGMCCNo. 4526。2.一种防治桃小食心虫的白僵菌制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)ー级斜面菌种培养将保藏号为CGMCC No. 4526的球孢白僵菌菌种接入装有含健康桃小食心虫虫尸浸出液的PDA斜面培养基的试管中，放入培养箱，在温度为20°C -28°C,相対湿度为70% -85%条件下培养，待菌丝长满斜面并产满孢子时备用； (2)ニ级菌种培养在无菌条件下，将培养好的ー级斜面菌种连同培养基一起刮下，放入含有液体培养基的三角瓶中培养，接种量为每ー试管菌种接种3瓶，将接种后的三角瓶放入恒温震荡培养箱，20°C -28°C、150-200r/min，培养至培养液中长满菌丝球时备用； (3)三级固体扩大培养在无菌条件下，将ニ级菌种，按体积比为I: 10-25的接种量接入灭过菌的固体培养基中，在温度为20°C _28°C、相対湿度为70% -85%条件下培养，至培养基上长满白色菌丝，即得三级培养物； (4)菌粉制剂制备将原料按重量百分比计麦麸60-80，谷壳20-40(优选麦麸70，谷壳30)混匀，并按原料总重量加...
【专利技术属性】
技术研发人员：熊琦，高英，张艳峰，李捷，范仁俊，曹天文，谢映平，薛皎亮，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：
0来自[辽宁省电信] 2021年09月20日 17:42在哪能买到正品