本发明专利技术公开了一种酵母菌株，为半乳糖霉S9菌株，于2012年3月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏登记入册编号CCTCC?M2012056，上述半乳糖霉S9菌株降解林可霉素，源于菌株发酵液中的某种代谢物质成份，主要作用机理是菌株产生的某种代谢物质成份对林可霉素结构中的某个关键化学键产生作用，从而使其分解成小分子物质。同时半乳糖霉S9菌株在本发明专利技术所述的培养条件下生长迅速，容易进行工业化生产，具备了很好的应用开发前景，本发明专利技术利用半乳糖霉S9菌株处理林克链霉菌发酵药渣具有高效性和实用性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物菌株处理药物废渣、饲料蛋白
，特别涉及到一种降解发酵药渣中残余林可霉素的酵母菌及其应用。
技术介绍
“超级细菌”是细菌和抗生素博弈的产物，抗生素在杀死细菌的同时，也让一部分未死的细菌不断进化，产生了耐药性，抗生素使用越多，细菌耐药性也越強。据调查，我国60%的病人使用抗生素都是自作主张，只有少数会向医生寻求帮助。研究表明，抗生素摄 入后除少部分残留在体内，85%以上以原药和代谢产物的形式经由病人与动物的粪尿排出体外，其残留的抗生素进入土壌、水域等环境中，在雨水、风等携帯或促进下，进而污染地下水、地表水和人们的生活用水。近年来，在人们生活用水中检测到抗生素的报道越来越多。可见，这些残余的抗生素进入生态环境，破坏了环境的微生态平衡。因此，控制抗生素的滥用比研制杀灭“超级细菌”的抗生素更为重要和紧迫。林可霉素类药物是由链霉菌产生的林可酰胺类抗生素，属于目前结构最稳定的抗生素之一。它的作用机理是通过与核糖体的大亚基结合，抑制蛋白质合成，对大多数革兰阳性菌和某些厌氧的革兰阴性菌有抗菌作用。但是在利用微生物发酵生产林可霉素过程中，由于存在提炼纯度低等问题，造成废渣中残留林可霉素含量高，难降解等诸多问题，造成严重环境污染，难以达到直接利用或排放标准。因此，将林克链霉菌发酵药渣中残余的高浓度的林可霉素进行生物降解，是将废渣有效实现废物利用的关键步骤，目前备受关注。作为单细胞真核微生物的酵母菌菌体蛋白质含量高，富含多种维生素，能够用作饲料，可利用エ厂排出的有机废料、废水生长繁殖。利用酵母菌降解废渣中高浓度的林可霉素，这不仅变废为宝，还能解决环境污染问题，可谓ー举两得。同时，在微生物家族中，酵母菌是食品、饲料等エ业化生产技术最成熟的种类，研究开发酵母菌药洛饲料有着重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术不足，提供一种可以有效降解林克链霉菌发酵药渣中残余林可霉素含量的酵母菌，使用该酵母菌可以开发酵母菌源生物饲料。本专利技术所述的酵母菌株，为半乳糖霉{Galactomyces geotrichud) S9菌株。上述半乳糖霉S9菌株已于2012年3月5日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址武汉市珞珈山武汉大学)，保藏登记入册编号CCTCC M 2012056。上述半乳糖霉S9菌株在平板上呈现雪花状，颜色为白色，呈薄层状，表面比较干燥，四周有绒丝状物质；中间没有突起，该菌的生物量特别大，2周即可长满整个平板，菌落直径约4 5 cm ;细胞体积大小为(I. 60 2. 36Mm)X (I. 6 4. 9Mm);光学显微镜下观察S9大多数细胞的形态呈椭圆形、肾形、圆柱形，有些细胞与其子代细胞连在一起成为链状细胞的生殖方式为裂殖。上述半乳糖霉S9菌株降解林可霉素，源于菌株发酵液中的某种代谢物质成份，主要作用机理是菌株产生的某种代谢物质成份对林可霉素结构中的某个关键化学键产生作用，从而使其分解成小分子物质。上述S9菌株系本专利技术人在开展发酵药渣中高浓度林可霉素的生物降解的研究中，从林可霉素生产药厂的大量废水废渣中筛选到的地霉菌属酵母菌。研究发现其对林可霉素具极高降解活性，通过多批次降解林可霉素药物活性试验确定其活性后，委托武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)对菌株进行鉴定,确定为半乳糖霉菌G geotrichum。本专利技术半乳糖霉S9菌株是一类全新发现的具有显著的降解林可霉素的地霉菌酵母菌菌株，其降解功能主要源于发酵液中的某种代谢物质成份，主要作用机理是菌株产生的某种代谢物质对林可霉素结构中的某个关键化学键，从而使其分解成小分子物质。同时半乳糖霉S9菌株在本专利技术所述的培养条件下生长迅速，容易进行エ业化生产，具备了很好的应用开发前景，本专利技术利用半乳糖霉S9菌株处理林克链霉菌发酵药渣具有高效性和实用性。附图说明下面结合附图对本专利技术做进ー步地说明 图I是本专利技术实施例中林可霉素浓度与抑菌圈直径线性关系的标准曲线。具体实施例方式下面实施例中，如果没有特殊说明，均为常规方法；百分含量如果没有特殊说明，均为质量百分含量。扩大培养半乳糖霉(にgeoiricAa ) S9菌株 制备菌液，将菌液接入含林可霉素的药渣和稻壳固态培养基中，提取林可霉素药物，进行降解活性试验，确定其对林可霉素的降解作用。半乳糖霉S9菌株的培养方法(以下为重量百分比) I、试管种培养 培养基配方为0. 2 1%酵母粉、O. 5 2%蛋白胨、O. I 2%葡萄糖；pH3 6。将S9菌体接种到培养基上，20 30°C下培养2 5天，获得试管种。2、液体扩大培养 液体培养基配方为0. 2 1%酵母提取物；0. 5 2%蛋白胨；0. I 2%葡萄糖；pH值3 6，其余为水。将试管种接种到500ml三角瓶液体培养基中，每瓶装200ml，于20 30°C下摇床培养培养时间2 5天，转速为200 300 rpm。半乳糖霉S9菌株降解林可霉素活性试验 I、制备试验用药渣培养基 将发酵新鲜药渣5g和Ig稻壳混合均匀，121 °C高压蒸汽灭菌30 min,作为测试降解林可霉素活性的固态发酵培养基。2、制备待测菌液 按上述液体扩大培养方法制备S9待测菌液。3、制备对照用试剂 对照I :前述2制备待测菌液方法制备对照用药剂，但培养基中不接入S9菌株。对照2 :以50mM磷酸缓冲液作为对照。对照3 以等量的无菌水溶液作为对照。4、制备指示菌藤黄八叠球菌菌液 培养指示菌藤黄八叠球菌的培养基配方将O. 5 %酵母提取物、1%蛋白胨、l%NaCl、pH7. 5。培养条件将藤黄八叠球菌菌体接种到100 ml培养基中，37°C培养I天，获得指示菌菌液。5、试验方法 (1)将5ml上述待测菌液2及对照用试剂3加入上述试验用药渣固态培养基I中，在室温下静止培养2 3周，观察至有菌体产生时再加入15ml无菌水搅匀，静置24h，使其中残余林可霉素充分溶解到水中； (2)制备平板取6套无菌培养皿，分别加入约20ml上述4培养基(加I.8 2%琼脂)后，置水平玻璃板上凝固，作为底层；另取冷却至50°C左右的50ml上述4培养基(加I. 8 2%琼脂)，加入Iml指示菌藤黄八叠球菌菌悬液，迅速摇匀后，用IOml破ロ吸管取6ml混菌培养基倒在底层平板上，作为菌层，并放置在水平玻璃板上凝固； (3)在培养基平板底部作好相应标记，用弯头镊子在每个培养皿中等距离放入4个牛津杯； (4)用滴管分别将高、低浓度的标准品和样品溶液加入到牛津杯中，以滴满为度，换上皿盖； (5)将培养皿平稳送入恒温箱,37°C下培养16 18h； (6)用游标卡尺测量抑菌圈直径; (7)制作林可霉素浓度与抑菌圈直径间线性关系的标准曲线准确称取林可霉素纯品，溶于蒸馏水，先配成储备液。再稀释成不同浓度的标准液，按上述方法測定不同浓度下的抑菌圈直径大小，绘制标准曲线；如图I所示。降解率为(初始浓度ー加菌液反应后的浓度)/初始浓度 分别用3种对照药剂，每个处理重复三次。6、试验结果 实验数据结果如表I所示 表I半乳糖霉(にgeoiricAw ) S9菌株对林可霉素的降解效果丨咎理前r丨咎理后r[样品处理抑菌圈直径(mm) 初始浓度(mg/ml) 抑菌圈直径(mm) _林可本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.本发明所述的酵母菌株，为半乳糖霉S9菌株。2.如权利要求I所述的酵母菌株，已于2012年3月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏登记入册编号CCTCC M 2012056。3.上述半乳糖霉S9菌株菌株在平板上呈现雪花状，颜色为白色，呈薄层状，表面比较干燥，四周有绒丝状物质；中间没有突起，该菌的生物量特别大，2周即可长满整个平板，菌落直径约4 5...
【专利技术属性】
技术研发人员：牛秋红，和晶亮，唐悦，沈艳丽，张林，丁锋，张清会，
申请(专利权)人：南阳师范学院，
类型：发明
国别省市：
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