本发明专利技术提供了一种与猪生长速度相关的遗传标记及其应用，其位于猪GHSR1α基因5′侧翼区上，它的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，其中，151bp处的碱基C与猪快速生长性状相关，如果该碱基C突变为A，则与猪慢速生长性状相关。本发明专利技术采用聚合酶链式反应(PCR)和测序技术筛选到与猪生长速度相关的遗传标记，并通过限制片段多态性(RFLP)方法来检测待测猪的基因型，根据基因型进行猪的选育，从而加快猪的育种进程。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程及分子生物学领域，具体地说，涉及一种与猪生长速度相关的遗传标记及其应用。
技术介绍
养猪业是我国畜牧业生产的主体，其产值长期以来始终都是畜牧业总产值的第一位。随着人们生活水平的提高，对肉食品的数量和质量需求不断提高，如何培育出生长速度 快并且肉质风味好的猪种成为当前猪育种工作的热点。我国猪种资源丰富，为猪育种提供良好的素材，也为研究重要的与经济相关性状的基因和分子标记提供良好的材料。藏猪是我国特有的高原型猪种，体小皮薄、肉嫩味美，风味浓郁，肉质细腻、风味独特，素有“高原之珍”的美誉(刘轩，强巴央宗，王强等.藏猪繁殖性状多基因效应分析.遗传，2010，32 (5) :480-485)。藏猪产于我国青藏高原海拔250(T4300m区域，对高原低氧、低温和粗放的饲养环境有较强的适应性，是发展我国高海拔地区养猪业的重要品种资源。滇南小耳猪是云南省西双版纳州小型地方品种，具有适应热带雨林地区高温潮湿的生态环境，早熟易肥、屠宰率高、抗逆性强、皮薄骨细、肉质鲜嫩、营养丰富等优点。藏猪和滇南小耳猪均是小型地方品种，是研究猪生长和肉质性状基因的良好材料。随着分子数量遗传学、分子生物学技术的飞速发展，有关分子遗传标记和标记辅助选择的研究被广泛开展，并在畜禽育种中应用，产生了巨大的影响。生长性状是猪育种中选择的主要目标之一，不同品种或类型的猪生长速度有明显的差别。从分子水平上鉴定影响生长速度的基因或标记是目前猪功能基因研究的热点之一(姜运良，李宁，杜立新，吴常信.猪肌肉生长抑制素基因5’调控区T —A突变与生长性状的关系分析.遗传学报.2002，29(5):413 416)。研究者曾通过对基因的多态性与生长性状的关联分析，认为生长激素基因(PaszekAA, Wilkie P J, Wilkie P J, Flickinger G H, et al. Intervalmappingof growth in divergent swine cross. Mamm Genome. 1999,10(02) :117 122 ;Bidanel J P， Milan D， Iannuccelli N， et al.Detection ofquantitative traitloci for growth and fatness in pigs. Genet SeIEvoI. 2001,5-6,33 (03) :289 309 ;LEE S J，McPherron A C. Myostatinand the control of skeletal muscle mass. CurrOpin Genet Dev. 1999，9 (05) :604-607)、类胰岛素生长因子 I 基因、PITl 基因(Yu T P，SchmitzC B，Rothschild M F，Tuggle C K. Association of PITl poIymorphismswithgrowth and carcass traits in pigs. J Anim Sci. 1995，73(05):1282 1288)、MC4R基因(Kim K S，Larsen N，Short T，et al. Amissense variant of the porcinemelanocortin-4receptor(MC4R)gene isassociated with fatnsee growth,and feedintake traits. Mamm Genome. 2000，11:131 135)和痩素受体(Kennes Y M，Murphy B D，PothierFiPalin M F. Characterization of swine leptin(LEP)polymorphisms andtheirassociation with production traits. Anim Genet. 2001，32 (04) : 215-218)等与猪的生长速度有关。但目前，在猪分子育种实践中仍然缺少功能明确、效应显著的主效基因和分子标记。生长激素促分泌素受:体(growthhormone secretagogue receptor, GHSR)属于α 螺旋 7 次跨膜的 G 蛋白偶联受体(Herrington J, Hille B. Growth hormone-releasinghexapeptide elevates intracellular calciumresponse in rat somalotrophes bytwo mechanisms. Endocrinology. 1994,135 :1100-1108.)与生长激素分泌素(Ghrelin)结合，调节生长激素分泌，进而调节生长速度(Howard A D, Feighner S D, Cully D F, etal. A receptor in pituitary and hypothalamus that functions in growth hormonerelease. Science, 1996, 273(5277) :974-977)。基于该基因在生长发育过程中起到的重要作用，因此将其作为猪生长相 关的候选基因，采用PCR测序技术筛选不同类型猪群体间差异的SNP位点，从而建立起快速检测方法，为寻找影响猪生长性状的SNP位点及相关分子遗传标记的开发提供了新思路。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种与猪生长速度相关的遗传标记及其应用。本专利技术的另一目的是提供用于检测所述与猪生长速度相关的遗传标记的引物及含有该引物的试剂盒。为了实现本专利技术目的，本专利技术的一种与猪生长速度相关的遗传标记，其位于猪GHSRla基因5’侧翼区上，它的核苷酸序列如SEQ IDN0. I所示，其中，151bp处的碱基C与猪快速生长性状相关，如果该碱基C突变为A，则与猪慢速生长性状相关。本专利技术还提供用于检测上述与猪生长速度相关的遗传标记的引物，包括正向引物F5’ -AAACGCACTAATAAATGCTTCA-3’ 和反向引物 R5’ -CTTCCTGCCCTCACCTTTT-3’。本专利技术还提供上述与猪生长速度相关的遗传标记在鉴定猪种中的应用，其包括步骤1)提取待测猪的基因组DNA ；2)以待测猪的基因组DNA为模版，利用所述引物F和R，通过PCR反应扩增出猪GHSRl a基因5’侧翼区177bp片段；3)检测PCR扩增产物，如果扩增产物序列中151bp处的碱基为C，则待测猪属于生长速度快的猪品种，如果扩增产物序列中151bp处的碱基为A，则待测猪属于生长速度慢的猪品种。前述应用中，步骤2)中PCR反应使用的扩增体系以25 μ I计为IOOng/μ I模板DNAl μ l，5pmol/y I 弓丨物 F和 R各 I μ 1，IOmmoI/L dNTPmix2. O μ l,5U/y L Taq DNA聚合酶0.5 μ 1，10XPCR反应缓冲液2.5 μ 1，余量为水。前述应用中，步骤2)中PCR反应使用的条件为95°C 5分钟；95°C 30秒，58°C 30秒，720C 20秒，36本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种与猪生长速度相关的遗传标记，其特征在于，其位于猪GHSRl a基因5'侧翼区上，它的核苷酸序列如SEQ ID NO. I所示，其中，151bp处的碱基C与猪快速生长性状相关，如果该碱基C突变为A，则与猪慢速生长性状相关。2.用于检测权利要求I所述与猪生长速度相关的遗传标记的引物，其特征在于，包括正向引物F5 ' -AAACGCACTAATAAATGCTTCA-3 '和反向引物R5' -CTTCCTGCCCTCACCTTTT-3'。3.权利要求I所述与猪生长速度相关的遗传标记在鉴定猪种中的应用，其包括步骤 1)提取待测猪的基因组DNA； 2)以待测猪的基因组DNA为模版，利用权利要求2所述引物F和R，通过PCR反应扩增出猪GHSRl a基因5'侧翼区177bp片段； 3)检测PCR扩增产物，如果扩增产物序列中151bp处的碱基为C，则待测猪属于生长速度快的猪品种，如果扩增产物序列中151bp处的碱基为A，则待测猪属于生长速度慢的猪品种。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR反应使用的扩增体系以 25 ii I 计为IOOng/ii I 模板 DNA I y 1，5pm...
【专利技术属性】
技术研发人员：张浩，陶著，李庆岗，吴克亮，史利华，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：
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