龋齿疫苗及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于由变形链球菌感染所造成的龋齿的疫苗组合物，该疫苗组合物包括从变形链球菌表面蛋白PAC派生的抗原和从鞭毛素派生的佐剂。本发明专利技术进一步提供制备疫苗组合物的方法。本发明专利技术还提供了通过将该疫苗组合物应用到个体来预防或治疗由变形链球菌引起的龋齿的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般涉及到疫苗的技术，更特别为龋齿疫苗，并进一步疫苗的制备方法。
技术介绍
龋齿，或称为蛀牙，是一种慢性传染病，导致钙化组织的区域消融和破坏。如果不及时治疗，龋齿可以引起相当大的痛苦和不适，并最终失去牙齿。龋齿维持一个世界性的高患病率和使得治疗的费用非常高，是一个重大的公共卫生问题。变形链球菌(5被认为是造成人类龋齿的首要病源细菌。变形链球菌表达一种表面蛋白，指定为抗原I / II型，B，P1，或PAc。PAc于变形链球菌在牙齿表面的初始黏附和尔后变形链球菌在牙齿表面的聚集的过程中起作用；因此PAc被认为是一个关键的致病因子，促进龋齿的病理发生。由于其在变形链球菌的龋齿生成性(cariogenicity) 中的重要性，PAc是公认的研制防龋齿疫苗的目标。在一个早期的研究中，雷纳等(Lehneret al. (Immunization with Purified Protein Antigens from Streptococcus mutans Against Dental Caries in Rhesus Monkeys. Infection and Immunity 34, 407-415 (1981)))从细菌培养中直接纯化了蛋白抗原I，I / Π，Π，ΙΙΙ。纯化抗原与佐剂(弗氏不完全佐剂或氢氧化铝)肌注给药。抗原 I，I / II和抗原IK程度较轻)引起龋齿的显著减少，但是抗原III没有引起龋齿减少。对龋齿的保护主要是与血清和龈沟液中IgG抗体相关。在这项研究中使用的免疫计划下，血清IgA抗体的滴度在10 0.7和2.8之间。然而，在实验中使用的抗原的纯度是一个问题。 此外，声称的有效性可能得益于给药途径，即肌肉注射。由于变形链球菌的感染模式，粘膜免疫应是研制一种有效疫苗的优选。不幸的是， 许多研究都表明，当通过粘膜途径免疫时，没有一个合适的佐剂的PAc是一个弱的免疫原。 为了角军决这个问题，Saito 等(Protective Immunity to Streptococcus mutans Induced by Nasal Vaccination with Surface Protein Antigen and Mutant Cholera Toxin Adjuvant. Journal of Infectious Diseases 183, 823-826 (2OOl))从变形链球菌培养上清中纯化了 PAc。PAc和MCT的鼻腔免疫诱导PAc特异性IgA抗体，唾液中的滴度(， 6. 1+/-1. 7)和鼻洗液样本中的滴度(10 ，8. 2+/ -1.5)。通过PAc和MCT的鼻腔免疫诱导的抗原特异性免疫应答提供显著抑制变形链球菌的定植。然而，这项研究有严重缺陷。首先，使用的PAc抗原不是一个表达的重组蛋白；从细菌培养直接纯化不能排除显示的成效由污染造成的可能性；这与以上所述的莱纳研究相似。二，CT是有毒的；尽管它已经被研究多年，离人体应用仍然需假以时日。最后，防止龋齿的有效性并没有直接显示。综上所述，尽管先例中已经提示PAc可能是一个研发针对由变形链球菌引起的龋齿的疫苗的可能的抗原，但是对什么是一个针对变形链球菌引起的龋齿的有效黏膜疫苗并没有指导或提示。因此，迫切需要的是研发一个针对变形链球菌引起龋齿的有效黏膜疫苗。
技术实现思路
本专利技术提供了一种用于由变形链球菌感染引起的龋齿的疫苗组合物，该疫苗组合物包含从变形链球菌表面蛋白PAc派生的抗原和从鞭毛素派生的佐剂。本专利技术进一步提供制备疫苗组合物的方法。本专利技术还提供了通过给一个个体应用该疫苗组合物来预防或治疗由变形链球菌引起的龋齿的方法。下面结合附图和具体实施方式进一步详细描述本专利技术，但本专利技术不局限于这些实施方式，任何在本专利技术基本精神上的改进或替代，仍属于本专利技术权利要求书中所要求保护的范围。附图说明根据本专利技术的优选实施方案现在参考附图加以描述，其中相似参考数字代表相似元素。图1显示了纯化的PAc和FLIC; (A)I道免疫印迹纯化的PAc，用HRP-交联的抗 His标签的抗体检测；2道纯化的重组PAc的考马斯亮蓝染色，SDS - PAGE ； (B)3道重组FLIC的考马斯蓝染色，SDS - PAGE; 4道免疫印迹纯化的FLIC，用HRP-交联的抗His 标签的抗体检测。图2是一个图表，显示血清抗PAc IgG，血清抗PAc IgA和唾液抗PAc IgA抗体的滴度，四组小鼠滴鼻免疫=(I)PBS ； (2) 10微克PAc ； (3) 10微克PAc + 1微克FLIC; (4) 10微克PAc + 5微克FLIC，其中数据表示为均值士标准差。图3是一个图表，显示(a)血清抗-PAc IgG，(b)血清抗PAc IgA和(c)唾液抗 PAc IgA的滴度，四组大鼠滴鼻免疫(1 )PBS ;(2)5微克FLIC; (3)20微克PAc + 5微克 FLIC; (4) 40微克PAc + 5微克FLIC，其中数据表示为均值士标准差。图4显示了三个示范图片，说明(A)大鼠正常磨牙的中位数矢切片(右颂骨舌侧部分)及(B)大鼠龋磨牙的中位数矢切片(右舌侧下颂骨的一部分)，大鼠经变形链球菌 Ingbritt的挑战和感染，其中在图片中的箭头表示不同程度的龋齿。(C)大鼠磨牙的中位数矢切片(右舌侧下颂骨的一部分)，大鼠经20微克PAc + 5微克FLIC免疫，随后用变形链球菌hgbritt挑战。偶尔可观察到轻度龋斑和其中一个由箭头所示。图5包含两个图表，显示(A)四组大鼠龋齿的整体得分，每个点代表一只大鼠的龋水平和(B)四组大鼠磨牙的不同部分的龋齿的凯斯(Keyes)得分，四组大鼠滴鼻免疫(1) PBS; (2) 5 微克 FLIC; (3) 20 微克 PAc + 5 微克 FLIC; (4) 40 微克 PAc + 5 微克 FLIC。 得分值表示为均值加上标准偏差值。*与阴性对照组有显着性差异(P <0. 05)。**与阴性对照组有显着性差异(P <0.01)。***与阴性对照组有显着性差异(P <0.001)。符号 EZ3,搪瓷病变;_，牙本质病变轻微;Θ，中度牙本质病变。图6显示pET28a-KF_PAc质粒构建的示意图。图7显示pET28a-KFD2_PAc质粒构建的示意图。图 8 显示纯化了的 PAc，KF-PAc 和 KFD2_PAc 的(A) SDS-PAGE 图及(B) Western Blot 图。图9是一个图表，显示血清抗PAc IgG，血清抗PAc IgA和唾液抗PAc IgA抗体的滴度，其中数据表示为均值士标准差。图10包括三个图表，显示(A)血清抗PAc IgG，(B)血清抗PAc IgA和(C)唾液抗 PAc IgA抗体的滴度，其中数据表示为均值士标准差。图11包括三个图表，显示(A)血清抗PAc IgG，(B)血清抗PAc IgA和(C)唾液抗 PAc IgA抗体的滴度，其中数据表示为均值士标准差。图12是一个图表，显示五组大鼠龋齿的凯氏(keyes)得分，每个点代表一只大鼠的龋患水平得分值表示为均值士标准偏差值。具体实施例方式本专利技术可参考以下详细描述的某些实施例而更容易理解。在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：鄢慧民，石伟，孙颖，杨菁毅，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：