组织修复的方法技术

本发明专利技术涉及修复组织的方法。更具体地，本发明专利技术涉及使用细胞和可植入的支撑物以修复组织缺损的方法，其中，在所述细胞施用于所述支撑物上2小时内，将所述可植入的支撑物和细胞植入到所述组织缺损中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及修复组织的方法。更具体地，本专利技术涉及使用细胞和可植入的支撑物来修复组织缺损的方法。
技术介绍
由于传统疗法的局限以及老龄化的人口，对于组织修复的新治疗方案的需求越来越多。当前，基于细胞的疗法代表了组织和器官缺损治疗技术状况。这些疗法包括将前体细胞，优选是干细胞，引入到缺损部位，从而扩增内源性细胞种群以及增加组织再生和修复率。这些细胞通常是本质上自体的，从需要治疗的病人中分离，并在将其返回到病人的缺损部位之前进行体外扩增。在外植细胞扩增之后，普遍的做法是将细胞在支撑或支架上再培养4到10天。随后将细胞/支架的组合植入到组织的缺损部位。使用与自体细胞结合的支架主要出于三个原因(1)提供一个模拟细胞外基质，且被认为有利于细胞生长的环境；(2)促进组织结构的形成；以及C3)为植入后新形成的组织提供机械强度。不过，现有的方法也有一些问题。首先，众所周知，在体外长期培养的细胞会分化， 这会降低细胞在体内的增殖以及组织修复的能力。其次，细胞体的外培养使得细胞暴露于可能含有污染颗粒(例如病毒和细菌)或化学品的外来物质。如果在植入之前没有被检测至IJ，这些污染物有可能导致重大疾病和病态。此外，细胞成为毒害的风险会随着细胞培养的时长增加而增加。最后，由于缺乏营养和氧气，支架上培养的细胞从其外表面渗透很少超过 500 μ m。因此，尽管努力促进组织结构的形成，在体外还是不能形成全厚度的组织。因此，在本领域具有寻找以更好的方式在组织修复中使用细胞和支架的需求。
技术实现思路
专利技术人已经开发出一种修复组织的新方法，该方法包括植入前2小时内将细胞施用于可植入的支撑物。因此，在第一方面，本专利技术提供了一种在哺乳动物中修复组织的方法，该方法包括如下步骤(a)提供可植入的支撑物和样品份的细胞；(b)将所述样品份的细胞施用于所述支撑物上，以制备可植入的基质；以及(C)在将所述细胞施用于所述支撑物后的2小时内， 植入所述基质到待修复的组织内。重要的是，在植入前，所述细胞不与所述可植入的支撑物在体外培养，在植入前所述细胞仅仅允许有足够的时间黏附到可植入的支撑物上。因此，在第二方面，本专利技术提供了一种在哺乳动物中修复组织的方法，该方法包括如下步骤(a)提供可植入的支撑物；(b)将样品份的哺乳动物细胞接种于所述支撑物上， 并允许所述细胞有足够的时间黏附到所述支撑物上而不进行体外培养，以制备可植入的基质；以及(c)在将所述细胞接种到所述支撑物上后的2小时之内，植入所述基质到待修复的组织内。应该理解的是，需要修复的组织可以是任何在哺乳动物中能找到的组织，包括但不限于上皮、结缔组织或肌肉。在一些实施方式中，组织是软骨。类似的，可以理解的是，用于本专利技术所述的方法的细胞可以分离自哺乳动物中任何能找到的组织。所述细胞可以分离自任意的哺乳动物，包括但不限于羊、牛、猪、马、狗、猫或人。在另外的实施方式中，所述细胞分离自人。在另外的实施方式中，所述细胞分离自需要治疗的动物受试者。所述可植入的支撑物可以是任意类型的用于组织修复的可植入的支撑物。在某些实施方式中，所述可植入的支撑物可以包括膜、支架、织物、线状物或凝胶。在另外的实施方式中，所述可植入的支撑物是胶原支架。在某些实施方式中，该方法进一步包括使用细胞密封剂包覆所述可植入的基质的步骤。所述细胞密封剂可以是任何外科组织粘合剂。在一些实施方式中，所述细胞密封剂是纤维蛋白密封剂。应该理解的是，本专利技术的目的是在所述细胞黏附到所述支撑物上后尽快将包括可植入的支架和黏附细胞的基质植入，即，在植入之前所述基质不在体外培养。因此，可以将所述细胞在所述可植入的基质植入前的不超过约1小时59分钟施用于所述支撑物上。例如，可以将所述细胞在植入前的约5分钟到约1小时50分钟之间；在植入前的约10分钟到约1小时40分钟之间；在植入前的约15分钟到约1小时30分钟之间；在植入前的约20分钟到约1小时20分钟之间；在植入前的约30分钟到约1小时10分钟之间；在植入前的介于约30分钟到约1小时分钟之间；或者在植入前的介于约40分钟到约50分钟之间；施用于所述支撑物上。在一些实施方式中，将所述细胞在植入前的至少约7分钟时，施用于所述支撑物上。在其它实施方式中，将所述细胞在植入前的至少约15分钟时，施用于所述支撑物上。在另外的实施方式中，将所述细胞在植入前的至少约20分钟时，施用于所述支撑物上。在另外的实施方式中，将所述细胞在植入前的约40分钟时，施用于所述支撑物上。在特定的实施方式中，本专利技术提供一种修复组织的方法，该方法包括以下步骤 (a)提供胶原支架和样品份的含有软骨细胞的细胞；(b)将所述胶原支架加热到35°C到 37°C之间；(c)将所述细胞施用于加热后的胶原支架上，以制备可植入的基质；(d)使用纤维蛋白密封剂包覆所述的基质；以及(e)在将所述细胞施用于所述胶原支架上后的约40分钟，植入所述基质。本领域的技术人员应该认识到，将所述细胞施用或接种于所述可植入的支撑物与和植入所生成的基质的时间间隔(小于2小时)短(孵化)的目的是降低通常因延长培养导致的原代细胞的死亡。因此，在第三方面，本专利技术提供了一种增加用于植入的细胞的活性的方法，该方法包括将样品份的细胞施用于可植入的支撑物上，并在施用所述细胞后的2小时内植入所述支撑物。在一些实施方式中，植入的细胞的活性大于90%或大于95%。在另一些实施方式中，植入的细胞的活性在植入前的当时大于99%。应该理解的是，由于本专利技术的细胞具有高活性，细胞凋亡标志物的表达也会更低。在一些实施方式中，凋亡标志物选自由MMP-I、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-4、IL-I、c-fos、 c-jun、0ct3/4 和 Sox2 组成的组。在第四方面，本专利技术提供了一种用于修复组织的试剂盒，该试剂盒包括(a)可植入的支撑物；以及(b)试剂盒组分的使用说明书，其中，该说明书建议在植入前2小时内，将样品份的细胞施用于所述支撑物上。在一些实施方式中，该试剂盒进一步包括细胞样品。在其它实施方式中，该试剂盒进一步包括细胞密封剂。附图说明图1 有(深色块)和没有(浅色块)胶原支架时人类细胞基因表达的对比C = ρ < 0. 05)。图2 在胶原支架上的时间依赖的细胞粘附Γ = P < 0. 05)。 具体实施例方式在详细描述本专利技术之前，应该理解的是，本专利技术不局限于特定的示例方法，当然可以有变化。还应当理解的是，此处使用术语只是出于描述特定实施方式的目的，而不是为了限定，其仅由所附权利要求进行限定。本文中无论是上文还是下文所引用的所有的出版物、专利和专利申请，在此都通过引用的方式整体引入。但是，引用所提到的出版物是出于描述和公开该出版物所报道的过程和试剂的目的，其可以与本专利技术结合在一起使用。此处不存在可以被解释为承认本专利技术无权占先于这些在先专利技术所公开的内容。除非另有说明，本专利技术所使用的方法为本领域传统的细胞培养、细胞生物学和骨科手术技术。这些技术已经记载于文献中。例如参见，Coligan et al., 1999 “Current protocols in Protein Science，， 卷 I 禾口 II(John Wiley & Sons Inc. ) ；Ross et al. 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.03.27 AU 20099013251.一种修复组织的方法，该方法包括如下步骤(a)提供可植入的支撑物和样品份的细胞；(b)将所述样品份的细胞施用于所述支撑物上，以制备可植入的基质；以及(c)在将所述细胞施用于所述支撑物上后的2小时内，植入所述基质。2.根据权利要求1所述的方法，其中，需要修复的组织是上皮、结缔组织或肌肉。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，需要修复的组织是结缔组织。4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述结缔组织是选自由软骨、骨或肌腱组成的组。5.根据权利要求1至4中任意一项所述的方法，其中，所述细胞是自体的或异体的。6.根据权利要求1至5中任意一项所述的方法，其中，所述细胞是软骨细胞。7.根据权利要求1至6中任意一项所述的方法，其中，所述细胞分离自哺乳动物。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述哺乳动物是选自由羊、牛、猪或人组成的组。9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，所述哺乳动物是人。10.根据权利要求1至9中任意一项所述的方法，其中，所述细胞是自体的。11.根据权利要求1至10中任意一项所述的方法，其中，所述可植入的支撑物包括膜、 支架、织物、线状物或凝胶。12.根据权利要求1至11中任意一项所述的方法，其中，所述可植入支撑物包括胶原支^K O13.根据权利要求1至12中任意一项所述的方法，其中，在将所述细胞施用于所述支撑物上后的5分钟到约1小时50分钟之间植入所述基质。14.根据权利要求1至13中任意一项所述的方法，其中，在将所述细胞施用于所述支撑物上后的至少约7分钟时植入所述基质。15.根据权利要求1至14中任意一项所述的方法，其中，在将所述细胞施用于所述支撑物上后的至少约15分钟时植入所述基质。16.根据权利要求1至15中任意一项所述的方法，其中，在将所述细胞施用于所述支撑物上后的15分钟到约1小时30分钟之间植入所述基质。17.根据权利要求1至16中任意一项所述的方法，其中，在将所述细胞施用于所述支撑物上后的至少约20分钟时植入所述基质。18.根据权利要求1至17中任意一项所述的方法，其中，在将所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑铭豪，
申请(专利权)人：昊图细胞私人有限公司，
类型：发明
国别省市：