一种普洱茶熟茶中微生物的快速分离方法技术

本发明专利技术涉及一种普洱茶熟茶中微生物的快速分离方法，具体为普洱茶熟茶中产闭囊壳(俗称“金花”)微生物的快速分离方法，属普洱茶发酵有益微生物分离培养技术领域。根据“金花”出现的环境条件分析，对其分离用培养基利用正交优化试验方法确定后，进一步比较完善后，并对培养条件进行比较研究后确定基本培养条件，从而使“产闭囊壳菌”在平板上菌落扩展快，菌落大，气生菌丝发育良好，缩短无性阶段，促进有性繁殖结构——黄色子囊果闭囊壳(俗称“金花”)的产生，达到快速分离、培养增殖的目的要求。方法包括培养基的制备、平板分离培养条件确定、茶样分离及微生物的确认。本发明专利技术具有快捷、简便、针对性强、分离成功率高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体为普洱茶熟茶中黄色子囊果一闭囊壳(俗称“金花”)微生物的快速分离方法，属普洱茶发酵有益微生物分离培养

技术介绍
云南是普洱茶的故乡，作为历史传统名茶——普洱茶之所以成为当今国内外消费者广为青睐的独具魅力的健康饮品，近年来，大量研究证实普洱茶具有抑菌、减肥、降脂的功效。普洱茶特有的保健功能得到国内外人士的共识。普洱茶熟茶独特的加工工艺和技术，使用多种有益微生物参与其中，并起到了关键的作用，从而最终影响了普洱茶品质及功效。其种类及作用现今人们还未完全认识。针对市场上有些普洱熟茶在贮藏过程中其内部会出现“金花”——黄色颗粒，经分离、纯化和培养，观察为真菌有性子实体中的子囊果——闭囊壳(俗称“金花”)，“金花”的出现对普洱茶的品质有改善作用，这样如需要深入研究和揭示其作用，首先就要对其进行快速定位分离纯化培养，这将涉及“金花”菌的营养要求、生长环境条件等几方面。经文献检索，未见与本专利技术相同的公开报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于利用微生物分离培养技术，提供。本专利技术结合普洱熟茶在贮藏过程中所产生黄色颗粒的子囊果——闭囊壳(俗称 “金花”)的微生物，针对形成的环境条件分析，对其分离用培养基利用正交优化试验方法确定后，进一步比较完善后，并对培养条件进行比较研究后确定基本培养条件，从而使“产闭囊壳菌”在平板上菌落扩展快，菌落大，气生菌丝发育良好，缩短无性阶段，促进有性繁殖结构——黄色闭囊壳(俗称“金花”)的产生，达到快速分离、培养增殖的目的要求。本专利技术的目的通过如下方案实现1、培养基的制备a分离纯化培养基20%马铃薯浸汁IOOOmL ；IOg酵母浸出物；葡萄糖140g ；琼脂 20g ；121. 3°C，15分钟灭菌后，制备分离用培养平板。b闭囊壳产生培养基茶叶50g，加入30mL的水，装入500mL三角瓶包扎，121. 3°C， 15分钟灭菌后备用。2、平板分离培养条件培养温度25°C ；培养时间7天(菌落由灰绿色变为黄色)；湿度控制在70%以上，通过对平板进行包裹制造相对缺氧环境。3、茶样分离a、将普洱紧压熟茶用无菌工具以常规的无菌操作方式剥离，露出中心部位，用无菌工具将子囊果——闭囊壳挑于无菌水中制备成悬液，然后按十倍梯度稀释，在分离纯化培养基上以常规方法进行平板涂布分离，在25°C的温度下培养7天，挑取黄色颗粒明显的单菌落保存备用；b、将普洱紧压熟茶用无菌工具以无菌操作方式剥离，露出中心部位，用无菌工具挑取子囊果——闭囊壳后轻磕器皿边，使之播撒于分离纯化培养基分离平板上，在25V的温度下培养7天，挑取黄色颗粒明显的单菌落保存备用；4、产闭囊壳微生物的确认将分离得到的黄色颗粒明显的单菌落微生物接种于闭囊壳产生培养基上，25°C下培养10天，出现明显“金花”颗粒，经显微观察后和普洱茶分离样品中的“金花”颗粒形态结构相同。本专利技术具有快捷、简便、针对性强、分离成功率高的特点。 具体实施例方式本方法实施中的仪器设备及器材为微生物研究中常用的仪器设备及器材。本方法包括培养基选择、培养条件确定、产闭囊壳(俗称“金花”)微生物的确认几方面。具体如下1、培养基的制备a分离纯化培养基20%马铃薯浸汁IOOOmL ；IOg酵母浸出物；葡萄糖140g ；琼脂 20g ；121. 3°C，15分钟灭菌后，制备分离用培养平板。b闭囊壳产生培养基茶叶50g，加入30mL的水，装入500mL三角瓶包扎，121.3°C， 15分钟灭菌后备用。2、平板分离培养条件培养温度25°C ；培养时间7天(菌落由灰绿色变为黄色)；湿度控制在70%以上，通过对平板进行包裹制造相对缺氧环境。3、茶样分离a、将普洱紧压熟茶用无菌工具以常规的无菌操作方式剥离露出中心部位，用无菌工具将子囊果——闭囊壳挑于无菌水中制备成悬液，然后按十倍梯度稀释，在分离纯化培养基上以常规方法进行平板涂布分离，在25°C的温度下培养7天，挑取黄色颗粒明显的单菌落保存备用；b、将普洱紧压熟茶用无菌工具以常规的无菌操作方式剥离露出中心部位，用无菌工具挑取子囊果——闭囊壳后轻磕器皿边，使之播撒于分离纯化培养基分离平板上，在 25°C的温度下培养7天，挑取黄色颗粒明显的单菌落保存备用；4、产闭囊壳微生物的确认将分离得到的黄色颗粒明显的单菌落微生物接种于囊果闭囊壳(俗称“金花”)培养基上，25°C下培养10天，出现明显“金花”颗粒，经显微观察后和普洱茶分离样品中的“金花”颗粒形态结构相同。权利要求1. ，其特征在于该分离培养方法包括如下步骤1.1培养基的制备分离纯化培养基20%马铃薯浸汁IOOOmL ；IOg酵母浸出物；葡萄糖140g ；琼脂20g ； 121. 3°C，15分钟灭菌后，制备分离用培养平板；闭囊壳产生培养基茶叶50g，加入30mL的水，装入500mL三角瓶包扎，121. 3°C，15分钟灭菌后备用；1.2平板分离培养条件培养温度25°C;培养时间7天；湿度控制在70%以上，通过对平板进行包裹制造相对缺氧环境；1.3茶样分离a、将普洱紧压熟茶用无菌工具以常规的无菌操作方式剥离，露出中心部位，用无菌工具将子囊果——闭囊壳挑于无菌水中制备成悬液，然后按十倍梯度稀释，在分离纯化培养基上以常规方法进行平板涂布分离，在25°C的温度下培养7天，挑取黄色颗粒明显的单菌落保存备用；b、将普洱紧压熟茶用无菌工具以常规的无菌操作方式剥离，露出中心部位，用无菌工具挑取子囊果——闭囊壳后轻磕器皿边，使之播撒于分离纯化培养基分离平板上，在25°C 的温度下培养7天，挑取黄色颗粒明显的单菌落保存备用；1.4产闭囊壳微生物的确认将分离得到的黄色颗粒明显的单菌落微生物接种于闭囊壳产生培养基上，25°C的温度下培养10天，出现明显黄色颗粒，经显微观察后和普洱茶分离样品中黄色颗粒形态结构相同。全文摘要本专利技术涉及，具体为普洱茶熟茶中产闭囊壳(俗称“金花”)微生物的快速分离方法，属普洱茶发酵有益微生物分离培养
根据“金花”出现的环境条件分析，对其分离用培养基利用正交优化试验方法确定后，进一步比较完善后，并对培养条件进行比较研究后确定基本培养条件，从而使“产闭囊壳菌”在平板上菌落扩展快，菌落大，气生菌丝发育良好，缩短无性阶段，促进有性繁殖结构——黄色子囊果闭囊壳(俗称“金花”)的产生，达到快速分离、培养增殖的目的要求。方法包括培养基的制备、平板分离培养条件确定、茶样分离及微生物的确认。本专利技术具有快捷、简便、针对性强、分离成功率高的特点。文档编号C12N1/00GK102424798SQ20111036955公开日2012年4月25日 申请日期2011年11月19日 优先权日2011年11月19日专利技术者张理珉, 程立忠 申请人:云南大学本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：程立忠，张理珉，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：