本发明专利技术公开了一种游离雌三醇FE3的定量测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含FE3磁分离试剂，酶反应物，反应增强剂，稀释液，FE3校准品、FE3质控品，清洗液浓缩液以及底物溶液。本发明专利技术还公开了该试剂盒的制备方法。本发明专利技术试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，与现有技术相比，本发明专利技术试剂盒具有更高的检测灵敏度和特异性，并达到了较佳的性能参数，并且大大降低了产品成本。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中游离雌三醇 (FE3)含量的试剂盒及其测试方法。
技术介绍
雌三醇(estriol)是由经胎儿肾上腺和肝脏最后由胎盘合成的一种留体类激素。 母亲血清中的未结合雌三醇的主要由胎儿肝脏和胎盘产生。雌三醇的前体，胆固醇和孕烯醇酮来源于母体和胎盘。胎儿的肾上腺把孕烯醇酮转化为脱氢表雄酮(DHEA)，DHEA在胎儿的肝脏中转化为16-0H-DHEA-硫酸盐，这种硫酸盐的衍生物在胎盘转化为雌三醇，并通过胎盘进入母体血液，雌三醇在进入肝脏结合之前在母体血循环中的半衰期大约为20min。正常妊娠时，血循环中的90%的雌激素为雌三醇，检测血清未结合雌三醇可以作为显示胎儿生长和胎盘功能的良好指标。它以游离雌三醇(Free htriol，简称FE3)的形式直接由胎盘分泌进入母体循环。在母体肝脏内很快地以硫酸盐和葡萄糖苷酸雌三醇的形式代谢。母体血清中FE3水平随着孕周的增长而增加。唐氏综合征胎儿的母体血清FE3偏低，推测可能与胎儿生长迟缓有关。从检测角度上来说，目前临床上用于测定FE3的方法主要有放免法、ELISA法、化学发光法等。过去以放免为代表的游离雌三醇(FE!3)测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场，目前应用较多的为酶联免疫检测技术和化学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。磁微粒分离酶联免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法， 抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，而磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗原、抗体的结合反应也在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。与传统 ELISA相比具有灵敏度高，检测用时少的优点。
技术实现思路
本专利技术需要解决的技术问题在于提供一种游离雌三醇(FE3)定量测定试剂盒及其检测方法，采用该试剂盒进行FE3检测具有较高的灵敏度和特异性，和更短的获得检测结果的时间和更简便的操作方式。本专利技术提供了一种游离雌三醇(FE3)的定量测定试剂盒，其包含的试剂有FE3磁分离试剂，酶反应物，反应增强剂，稀释液，校准品、质控品，清洗液浓缩液以及底物溶液。所述的磁分离试剂含有标记有抗FE3单克隆抗体的磁性微球。所述的酶反应物是含有碱性磷酸酶标记的FE3抗原。所述的反应增强剂是含有Tris的缓冲液。所述稀释液是含有BSA溶液。所述的校准品及质控品是含有一定量的FE3抗原的BSA蛋白溶液。所述清洗液浓缩液是含有TWEEN-20和ftx)Clin-300的缓冲液。所述的底物溶液为酶促化学发光底物溶液。本专利技术游离雌三醇(FE!3)的定量测定试剂盒的制备方法，包括下述步骤第一步磁分离试剂的制备过程一、磁珠缓冲液配制操作步骤，配制IL 1、称取 TRIS 4. 58g 和 NaC16. 81g 于 IL 容器中，称取 0. 96g TWEEN-20 于 20ml 容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；2、用移液器将ftOclin-300量取0. 2ml于IOml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中，然后在上述IL容器中加入800ml纯化水，充分搅拌；3、调节PH计测量其PH值，调PH，控制PH在7. 95-8. 05之间；4、称取BSA 3g倒入上述IL容器中；5、最后定容至1000ml，用0. 2um滤器过滤；过滤完后贴好标签于2_8°C冷库贮存。二、磁分离试剂的制备过程1、将1. Omg辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗FE3单克隆抗体溶于PH 9. 5的0. lmol/L PB缓冲液中至总体积为Iml ；2、确定辛二酸二琥珀酰亚胺酯的投入量，用移液枪吸取辛二酸二琥珀酰亚胺酯加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min ；3、将步骤2抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中然后放入到高速冷冻离心机中在3000g下浓缩30min至体积为0. 5ml ；4、取0. 5ml磁珠，加入5ml反应杯中，放入专用试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；5、每次加入1. 5ml PH9. 5 0. lmol/L PB,混勻30秒，上架，去上清，重复操作3次； 将步骤4获得的抗体溶液加入到上述磁珠中，混勻后室温反应4小时；6、加入 0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37V 15 分钟；7、每次加入1. 5ml PH 7. 2 0. lmol/L PB清洗已经标记的磁珠，混勻30秒，上架，去上清，重复操作3次；8、用IOOml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶，即为0. 05%的FE3磁分离试剂； 磁珠保存液配方为0. 1% BSA, 0. 05%吐温-20，0. 02% NaN3，20%乙醇，4°C保存。9、将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1 1的比例混勻，即得本专利技术试剂盒中磁分离试剂。第二步酶反应物制备过程一、酶反应物稀释液配制操作步骤，配制IL 1、取 Tris 6. 06g、NaCl 13. 0g、Zncl2 0. 05g、Proclin-300 0. 2ml 禾口 MgCl2 0. 05g 于烧瓶中，然后在烧瓶中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；2、调 PH，控制 PH 在 7. 35-7. 45 范围内；3、称取BSA 3g倒入上述烧杯中；4、最后定容至1000ml，用0. 2um滤器过滤即得。6二、碱性磷酸酶ALP与FE3抗原的偶联1、取FE3-3-cmo-BSA抗原Img放置于Iml玻璃管中；2、取200ul DMSO溶解抗原使抗原的终浓度到达5mg/ml，充分混勻；3、按照Imol抗原加入IOmol的辛二酸二琥珀酰亚胺酯的摩尔比例加辛二酸二琥珀酰亚胺酯到步骤2的溶液中，37°C恒温箱中反应1. 5小时；4、按照3mol抗原加入Imol的ALP的摩尔比往步骤3溶液中添加ALP，然后加入 Iml的PH为7. 4浓度为0. IM的PB缓冲液，置于37度恒温箱中反应3小时；5、将步骤4的溶液用PD-IO柱纯化，收集纯化液，按照1 3000的体积添加上述步骤一)获得的酶反应物稀释液，混合均勻，即得酶反应物。第三步反应增强剂配制步骤，配制IL 1、称取TRIS1. 56g和NaCl 4. 23g于IL容器中；用移液器将Proclin-300量取 0. 2ml于IOml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；2、用量筒量取800ml纯化水于上述IL容器中，充分搅拌，直至完全溶解调PH，控制 PH 在 7. 35-7. 45 之间；3、称取Mak33 0. 9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um滤器过滤ο第四步稀释液配制步骤，配制IL 1、称取 NaC19. Og 和 BSA 60g 于 IL 的容器中；2、用移液器将Proclin-300量取0. 5ml加IOml纯化水溶解，倒入上述IL的容器中；3、最本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：内蒙古科慧生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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