用于检测和诊断骨或软骨障碍的方法技术

本发明专利技术涉及用于检测和诊断骨和／或软骨障碍的方法，其中通过使实验样品接触特异性地结合多肽的抗体，并测量所述抗体与所述实验样品的结合，测量实验样品中所述多肽的表达水平。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于诊断和/或检测骨或软骨障碍的方法和试剂盒。更具体地，本专利技术鉴别出了在骨和/或软骨中以更高的水平表达的几个基因，它们可以用于所述方法中。 本专利技术也鉴别出了在体液中存在的几种肽，它们可以用于所述方法中。
技术介绍
骨是包含多种组织类型的坚硬的、动力器官。骨的主要组织是骨质组织(osseous tissue)，也称作骨组织(bone tissue)，即主要由磷酸钙形成的相对较硬的、重量较轻的组织。在骨中发现的其它组织类型包括骨髓、骨内膜和骨外膜、神经、血管和软骨。在骨中发现了 2个不同的细胞谱系。成骨细胞是源自未分化的间充质祖细胞的骨形成细胞。破骨细胞是负责骨吸收且源自单核细胞干细胞的细胞。骨的连续破坏和重建源自这2个细胞类型的相互作用。成骨细胞和破骨细胞的作用受到化学因子的控制，所述化学因子促进或抑制这些细胞的活性，由此控制形成和/或破坏骨的速率。在胚胎发育过程中的骨形成通过2个不同的途径发生软骨内的或膜内的骨化。 膜内的骨化主要在来自间充质组织的颅骨的骨形成过程中发生。软骨内的骨化发生于长骨 (例如四肢)中，并需要来自软骨的骨形成。软骨内的骨化从软骨中的初级骨化中心处开始，所述初级骨化中心在胚胎发育过程中出现。这些中心负责长骨的骨干的形成。二级骨化发生在出生后，并形成长骨的骨骺。长骨的骨干和双骨骺被称作骨骺板的软骨成长区分开。当达到成熟时(对于人类，约18岁)，软骨被骨替换，使骨干和双骨骺融合到一起，即称作骨骺闭合的过程。许多障碍源自骨吸收和建立的复杂平衡的紊乱，包括但不限于佩吉特病(变形性骨炎)、炎性骨病诸如类风湿性关节炎、骨关节炎和牙周病、骨骼转移过程中发生的局部骨生成、克鲁宗综合征、迟缓软骨发育障碍、致密性成骨不全症/Toulouse-Lautrec病、成骨不全(脆骨病)和骨质疏松症。其它骨骼障碍包括骨软化症、骨质减少、骨硬化症和剥脱性骨软骨炎。骨质疏松症是最突出的骨骼障碍之一。在骨质疏松症中，骨矿物质密度减小，骨结构被破坏，骨中非胶原性蛋白的量和种类改变。该疾病最常见于绝经后的女性，但是也可能在男性中形成。骨质疏松症的根本机理是骨吸收和骨形成之间的失衡；骨吸收增加，和/或新骨形成不足。软骨是由产生胞外基质的称作软骨细胞的专门化细胞组成的一类致密结缔组织。 软骨存在于骨关节表面、肋架、耳、鼻、支气管和椎间盘中。它的机械性质位于骨和致密结缔组织之间。不象其它结缔组织，软骨不含有血管。软骨被分成3类透明软骨、弹性软骨和纤维软骨。透明软骨是硬的、半透明的物质，具有高浓度的胶原和蛋白聚糖。它覆盖骨的末端，以形成关节的光滑关节表面。弹性软骨含有高浓度的弹性蛋白，其提供弹性，且存在于耳的耳廓中，诸如咽鼓管等管状结构中， 和会厌中。纤维软骨包含致密的I型胶原网络，其提供高拉伸强度和支撑，且见于椎间盘、耻骨联合以及某些腱和韧带的连接中。几种疾病影响到软骨，包括骨关节炎、软骨发育不全和肋软骨炎。骨关节炎是一种临床综合征，其中低级炎症导致关节疼痛，这由关节内软骨的异常磨损或润滑关节的滑液的减少造成。骨关节炎的主要症状是慢性疼痛，导致活动性减少。该病症似乎存在遗传易 j患t生ο近年来，用于研究导致严重的骨和软骨病(如骨质疏松症和类风湿性关节炎)的生物学过程的生物标记集合已经增加。最近，焦点集中于几种影响破骨细胞或成骨细胞增殖的调节分子。尽管在理解骨更新的生物学方面取得了这一进展，对骨和软骨病的基础研究和临床研究还需要更多的生物标记。
技术实现思路
本专利技术涉及骨和/或软骨障碍领域中的诊断和检测方法，所述方法基于观察到的由SEQ ID NO :1-56表示的本专利技术多肽的差别表达。本专利技术也涉及骨和/或软骨障碍领域中的诊断和检测方法，所述方法基于源自本专利技术多肽的、由SEQ ID NO :57-193表示的体液肽的检测。本说明书描述了与其它组织相比在骨和/或软骨组织中以更大的程度表达的不同多肽的鉴别。预期这些多肽可用作哺乳动物的骨和/或软骨障碍的诊断和检测的有效靶标。与年龄和性别匹配的健康对照相比，所述多肽似乎在表现出骨和/或软骨障碍的患者中差别表达。技术人员会认识到，这样的差别表达的多肽可以用于骨障碍的早期检测、诊断和/或预后，这在本专利技术范围内。本说明书也描述了源自选择性地表达的多肽的体液肽的鉴别。还发现所述体液肽可用作哺乳动物的骨和/或软骨障碍的诊断和检测的有效靶标。通常，在体外测定中进行用于诊断的检测。根据本专利技术可以诊断的骨障碍包括、但不限于，骨质疏松症、骨质减少、骨软化症、 骨髓瘤、骨营养不良、佩吉特病、成骨不全、骨硬化、发育不全骨障碍、体液血钙过高骨髓瘤、 多发性骨髓瘤、克鲁宗综合征、迟缓软骨发育障碍、致密性成骨不全症和骨硬化症。根据本专利技术可以诊断的软骨障碍包括、但不限于，包括骨关节炎和类风湿性关节炎的关节炎、变性性关节病、骨软骨炎、剥脱性骨软骨炎、肋软骨炎和多软骨炎。在一个实施方案中，本专利技术提供了抗体，其结合、优选地特异性地结合选自SEQ ID NO 1-56的多肽。在一个有关的实施方案中，本专利技术提供了抗体，其结合、优选地特异性地结合选自SEQ ID NO :57-193的肽。任选地，所述抗体是单克隆抗体、抗体片段、嵌合抗体、 人源化抗体或单链抗体。对于诊断目的，本专利技术的抗体可以被可检测地标记，连接到固体支持物上，诸如此类。所述抗体可以结合选自SEQ IDNO 1-56的多肽的任意表位，且能结合所述多肽的至少一个表位。所述抗体可以识别选自SEQ ID NO :1-56的多肽的线性的或构象的表位。在一个实施方案中，所述抗体识别选自SEQ ID NO :1-56的多肽和选自SEQ ID NO: 57-193的肽共有的表位。在其它实施方案中，本专利技术提供了编码任一种本文所述抗体的DNA和包含所述 DNA的载体。也提供了包含任意这样的载体的宿主细胞。作为实例，所述宿主细胞可以是 CHO细胞、大肠杆菌细胞或酵母细胞。在其它实施方案中，本专利技术提供了寡肽，其结合、优选地特异性地结合选自SEQ ID NO 1-56的多肽。在一个有关的实施方案中，本专利技术提供了寡肽，其结合、优选地特异性地结合选自SEQ ID NO :57-193的肽。本专利技术的寡肽可以任选地在CHO细胞或细菌细胞中产生。对于诊断目的，所述寡肽可以被可检测地标记，连接到固体支持物上，诸如此类。也提供了包含编码本专利技术的任意寡肽的DNA的载体，和包含任意这样的载体的宿主细胞。另外提供了产生任意所述寡肽的方法，且包括，在适合表达希望的寡肽的条件下，培养宿主细胞， 并从细胞培养物回收希望的寡肽。在另一个实施方案中，本专利技术提供了小有机分子，其结合、优选地特异性地结合选自SEQ ID NO 1-56的多肽和/或选自SEQ ID NO :57-193的肽。对于诊断目的，本专利技术的有机分子可以被可检测地标记，连接到固体支持物上，诸如此类。在另一个实施方案中，本专利技术涉及一种组合物，其包含任一种本文所述的抗体、寡肽或小有机分子(共同地称作“特异性的结合试剂”)以及载体。任选地，所述载体是药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，本专利技术涉及一种试剂盒，其包含容器和在容器内的组合物， 其中所述组合物可以包含任一种本文所述的特异性的结合试剂(即抗体、寡肽或小有机分子)。所述试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用于检测实验样品中选自ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、１０、１６、１９、２８、２９和５４的多肽的表达水平的方法，所述方法包括，使所述实验样品接触特异性地结合所述多肽的抗体，并测量所述抗体与所述实验样品的结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·沃罗什楚克，
申请(专利权)人：生物标记设计研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：AT