皱纹形成风险的评价方法技术

一种皮肤老化风险的评价方法，其将使用非侵袭方法采集的皮肤角质层中的抑制蛋白１的量作为指标。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及预测皮肤老化风险的技术。
技术介绍
本申请人一直以来就着眼于老化而进行研究开发。发现了伴随老化而发生变化的蛋白质，从而提出了专利文献1(国际公开第07/023808号公报)等。有关抑制蛋白1，已知有抑制抑制蛋白的产生、改变修正植物生长发育的技术(专利文献2 日本特开平11-69921号公报)；抑制由作为组织损伤的结果所释放出的游离肌动蛋白产生的二次组织损伤的技术(专利文献3 日本特开2005-41881号公报)；检测神经系统障碍、神经细胞障碍，作为诊断标记物的技术(专利文献4 日本特开2007-532915号公报)；作为上皮性癌的生物标记物的技术(专利文献5 日本特开2008-5^008号公报)。专利文献1国际公开第07/023808号公报 专利文献2日本特开平11-69921号公报 专利文献3日本特开2005-41881号公报 专利文献4日本特开2007-532915号公报 专利文献5日本特开2008-5^008号公报
技术实现思路
本专利技术的目的在于使用利用非侵袭的方法采集的皮肤角质层，提供将来的皮肤老化风险的指标。本专利技术的主要构成如下。(1) 一种，其特征在于，将皮肤角质层中的抑制蛋白1的量作为指标，抑制蛋白1的量越多，评价皱纹形成风险越高。(2)根据⑴所述的，其特征在于，将从皮肤角质层中提取的抑制蛋白1的量与预先测定的被验者年龄层的标准化抑制蛋白的量进行比较对比。(3)根据(1)或O)中所述的，其特征在于，皮肤角质层为通过非侵袭胶带剥离方法采集的皮肤角质层。(4)根据⑴中所述的，其特征在于，从45岁以前的被验者身上采集皮肤角质层，从该皮肤角质层中检测出抑制蛋白1的量，45岁以后形成的皱纹形成风险以该抑制蛋白1的量作为指标。(5)根据(4)所述的，其特征在于，所采集的皮肤角质层来源于脸颊。(6) 一种筛选方法，其特征在于，使用(1) (5)中任一项所述的筛选对皱纹形成风险有影响的成分。本专利技术证实了在机体内大范围表达的蛋白质且在细胞内构成细胞骨架的蛋白质即抑制蛋白1成为皮肤老化风险评价的指标。特别是作为老化现象的对象，着眼于皱纹形成。使用通过胶带剥离等非侵袭方法从脸颊上采集的皮肤角质层，通过检测抑制蛋白1并测定其表达量，可预测将来的皱纹形成等。特别是对预测45岁以后发生的皱纹形成有效。可为预防将来皱纹形成等的老化现象采取选择有效化妆品等的预防措施，或者可针对皱纹形成风险等的皮肤老化风险进行恰当的美容咨询。附图说明 图1为表示皱纹面积率和年龄的回归直线的图。图2为用LOWESS曲线表示皮肤角质层中的抑制蛋白1的量多的组、中等的组、少的组各组的测定数据的图。具体实施例方式本专利技术中使用的抑制蛋白1(PFN1、Gene ID 5216)是在机体内大范围表达的蛋白质，作为调节在细胞内构成细胞骨架的蛋白质即肌动蛋白的聚合/脱聚合的蛋白质而已知。本申请专利技术测量了利用非侵袭方法采集的皮肤角质层中存在的蛋白质即抑制蛋白1，基于其存在量，可知成为该皮肤角质层原来源的人将来的皮肤老化风险。特别是阐明了即使在年轻时未表现出来，但45岁以后皱纹的发生状况也与年轻时抑制蛋白1的表达量相关。本专利技术者通过按各年龄不同而将抑制蛋白1的表达量建立高中低3级模型，证实了虽然在45岁左右之前皱纹有相同程度的增加趋势，但在45岁左右以后，高度抑制蛋白1 组的皱纹面积的增加加速，而低度抑制蛋白1组的皱纹面积的增加得到抑制。基于此结果，通过了解抑制蛋白1的表达量，即可从年轻时预测皱纹形成等的皮肤老化风险，从而可采取选择化妆品等的预防措施。而且，即使在45岁以后，也可推测出今后皱纹等的老化的加速性，并可根据该推测来研究对策，或者可根据科学依据来进行化妆品选择的咨询。另外，可通过利用高度抑制蛋白1的皮肤培养模型，探索影响该抑制蛋白1表达量的被检物质，而筛选出可抑制皱纹形成等老化的药剂。本申请专利技术因通过胶带剥离等非侵袭方法安全且容易地采集皮肤角质层，关注抑制蛋白1的表达量，可短时间特定该皮肤角质层，所以，可在化妆品柜台简单测定并在其柜台处作为选择化妆品的资料。测定该抑制蛋白1表达量的机器可为一体化小型机器，并将检测出的结果与前述分级指标相比较而提示。而且，基于该结果，也可表示适合的化妆品和菜单。本专利技术作为医疗目的以外的目的为可评价皮肤老化等的皮肤老化风险，并可基于此在医疗以外的目的上采取处理措施。从皮肤角质层采集抑制蛋白1的方法 (1)通过胶带剥离法的角质层的采集 胶带剥离法是指通过在皮肤上粘贴粘附胶带并揭下粘附胶带，从而采集粘附面上粘附的角质层的方法。使用市售的粘附胶带，例如可通过在人脸颊部按压粘附胶带，使角质层粘附在粘附胶带上来采集。作为市售的粘附胶带，可例举ASAHIBI0MED公司制角质检测仪、M0RITEX 公司制角质层seal、PR0M0T00L公司制角质检测仪(盘式W、盘式G、PRO式)、Integral公司制Corneofix、3M公司制透明胶带、3M公司制透明双面胶带等。(2)提取缓冲液 为了从粘附在粘附胶带上的角质层中提取抑制蛋白1，使用提取缓冲液。作为提取缓冲液，例如可例举如下组成。组成50mM Tris-HCl (pH7. 5)、120mM NaCl (氯化钠)，ImM Na3VO4 (正钒酸钠)。用粘附胶带采集的皮肤的角质层是角化细胞分化的角质层，富含细胞骨架系的蛋白质。因此，为提高抑制蛋白1的提取效率，优选在该提取缓冲液中含有适当的表面活性剂。作为表面活性剂，优选使用SDS (月桂基硫酸钠、CH3 (CH2) n0S03Na)。(3)抑制蛋白1的提取 通过将采集了角质层的粘附胶带放入圆筒容器，使用高速旋转的均质器用研杵 (Pestle)(以下称为“研杵”)摩擦粘附面，可迅速进行抑制蛋白1的提取。此外，可将采集了角质层的粘附胶带浸入提取缓冲液中用刮刀刮擦以提取抑制蛋白1，也可使用振荡法、超声波照射法。将粘附胶带的粘附面朝向圆筒容器内侧，将粘附面的相反面沿圆筒容器的内侧放入圆筒容器。通过将粘附胶带的粘附面的相反面沿圆筒容器的内侧放入，可容易地用研杵摩擦粘附面。研杵可以是棒的先端具有可刮取的突起状、或是刮铲状的结构。作为研杵的结构， 例如也可通过在棒的先端连接比棒的直径大的同心圆筒，在其圆筒上与轴平行设置多个缺口部，可在圆筒的圆周上并列设置多个刮铲状结构(刮取部)，用该刮铲可刮擦粘附胶带。 作为市售品，可使用 Handy pestle (Τ0Υ0Β0 公司、code HMX-301)等。Handy pestle (T0Y0B0 公司、code HMX-301)的刮取部的直径为约7mm。(4)抑制蛋白1提取液的采集 将抑制蛋白1提取液静置约1分钟，使泡沉静后，优选从圆筒容器中吸引、采集抑制蛋白1提取液。(5)抑制蛋白1的量分析 所得到的抑制蛋白1提取液中的抑制蛋白1的量可通过ELISA法、抗体芯片法、 FRET法定量分析。皮肤老化风险的评价 与皱纹面积率{皱纹面积率是指根据日本化妆品工业联合会(http://WWW. jcia. org/)的标准导出的皱纹图像分析参数。实际上，是采集皮肤复制品后，使用图像分析软件进行形状补正，从进行了形状补正的3维形状中提取皱纹，计算出占测本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种皱纹形成风险的评价方法，其特征在于，将皮肤角质层中的抑制蛋白１的量作为指标，抑制蛋白１的量越多，评价皱纹形成风险越高。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：北岛诚司，
申请(专利权)人：株式会社芳珂，
类型：发明
国别省市：JP