苹果酸酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种苹果酸酶突变体及其应用，即通过进化方法快速定向进化苹果酸酶，增加了进化机率并能够有效应用于琥珀酸等的生产。本发明专利技术筛选出的苹果酸酶突变体，其蛋白序列为SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：3。所筛选出的酶突变体能有效的提高产琥珀酸的大肠杆菌中琥珀酸的产量，具有很好的经济应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于代谢工程和酶的定向进化领域，具体涉及一种苹果酸酶突变体及其应用，即利用代谢工程改造的重组大肠杆菌定向进化苹果酸酶，并将获得的定向进化苹果酸酶用于提高大肠杆菌琥珀酸的产量。
技术介绍
苹果酸酶催化可逆反应丙酮酸+NADH+ CO2 ^苹果酸+NAD+，苹果酸酶在中央代谢途径的三碳(O)和四碳(C4)化合物的相互转换过程中扮演着重要的角色，是固定(X)2的C4回补途径的重要一员。与其它二氧化碳固定C4回补途径相比，苹果酸酶催化的反应途径具有明显的能量经济性，对研究生命碳循环、发展碳负性工业过程有着重要的意义。微生物的固碳C4回补途径，主要包括由磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(P印C)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶(PepCK)、丙酮酸羧化酶(Pyc)、和苹果酸酶(Mae)等催化的四条途径。 苹果酸酶Mae催化丙酮酸羧化固定(X)2实现C4回补，从磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)开始计算可以净产生一个ATP，最大限度的回收了能量供细胞使用，因此具有能量经济性。同时，该反应不与大肠杆菌中主要的糖运输途径PTS系统竞争PEP (其底物之一是丙酮酸)，因此该反应具有明显的代谢循环优势。而其它几个C本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种苹果酸酶突变体，其蛋白序列为ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１或ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙际宾，刘娇，郑平，
申请(专利权)人：天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：12