一种抑制血管新生或生长的融合蛋白及其医疗应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抑制血管新生或生长的融合蛋白，以及其药物用途或药物制剂。该融合蛋白能够同时抑制PDGF和VEGF，并能有效的治疗由血管新生或生长引起的各种疾病，如肿瘤、眼疾等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程和蛋白质工程
，具体地说，涉及一种能有效抑制血管新生或生长的融合蛋白，以及其药物用途或药物制剂。
技术介绍
在正常生理条件下，血管的生成是一个受多个环节严密调节的过程，对修复和维持机体的正常功能具有重要的作用。然而，如肿瘤内部血管快速生长，则是临床常见的现象之一。大量的动物模型和人体临床试验表明，阻断肿瘤内新生血管的形成可以有效地阻止肿瘤的生长和引发肿瘤细胞的死亡，从而达到对肿瘤的治疗效果。因此，抑制血管新生是目前抗肿瘤新药研究的重要进展之一，大分子抗新生血管药物如Avastin经过美国FDA的上市批准，同时还有更多的药物处于不同的临床前和临床研究阶段。另外，对于老年性视网膜血管病变(Age-related macular degeneration，简称为AMD)、糖尿病视网膜病变、关节炎等多种与血管新生相关的疾病，抑制血管新生治疗新药也有广泛和重要的作用。血管新生是一个有多种活性生物因子进行调控的复杂过程，其中一个关键环节是内皮细胞表面受体由多种生长因子相结合从而被激活，然后经细胞内酪氨酸磷酸化的信号传递系统控制内皮细胞活动，从而促使血管新生。多种生长因子中，血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial cell growth factor，简称为 VEGF)和血小板衍生生长因子( platelet derived growth factor,简称为PDGF)是控制血管新生最重要的两类因子，是诱导和促进血管形成作用最强、最专一的血管生长因子，在几乎所有的人体肿瘤中都过量表达，是抗癌研究的一个重要分子靶标。PDGF主要通过与PDGF受体(PDGFR)结合，进而激活蛋白激酶信号转导通路而发挥作用。PDGFR由α和β两种亚基构成，共有3种二聚体(PDGFR-α α、α β、β β )， 其中β β 二聚体受体(PDGFR-β )最为重要，其分子量约为180 190 kd,属于酪氨酸激酶受体(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。PDGFR在肿瘤形成和发展过程中起着重要的作用。PDGFR-β的过度表达或过度活化均能刺激肿瘤内血管生成，促进肿瘤生长。PDGFR-β是肿瘤血管内皮细胞的分子标志之一，在肿瘤新生血管内皮细胞中高表达， 并与某些肿瘤的生长、转移及预后密切相关。因此PDGFR-β是一个较为理想的肿瘤靶向治疗的靶标。VEGF在血管内皮细胞表面上有多种受体，其中包括VEGFR-I (又称为Flt_l)和 VEGFR-2 (又称为KDR或Flk-Ι)，它们的细胞外部分均由七个可与VEGF相结合的免疫球蛋白样区域(D1-D7)组成，细胞内部分均包括酪氨酸激酶基团，当受体被VEGF激活后，细胞内的酪氨酸激酶基团发生磷酸化，并导致一系列的信号传递，最终引发血管新生。由于 VEGF信号传递对血管新生的重要性，阻断VEGF或VEGF受体从而达到抑制血管新生具有重要的抗癌作用，同时也对其他包括视网膜血管病变等与血管新生相关的疾病有着重要的治疗作用。目前唯一被美国FDA批准的针对血管新生的抗癌药物(Avastin)就是特异性结合 VEGF-A的单克隆抗体，其机理就是通过结合VEGF达到阻断VEGF与其受体结合的目的。另一类可能效果更好的VEGF阻断剂是VEGF受体的细胞外片段，其具有天然的针对VEGF的高特异性。目前大量的研究已经证实血管的生成是受多因子调控的复杂过程，而且PDGF和 VEGF是控制血管新生最重要的两类因子。但是目前的药物，尤其是大分子抗体和融合蛋白类药物，都是针对其中一个作为治疗靶点的，考虑到血管新生是一个复杂的过程，为了改进目前仅针对单靶点治疗药物的缺陷，本专利技术提供了一个针对血管新生最重要的两个靶点同时抑制的融合蛋白，在大大提高生物活性的基础上，保证其在体外和动物内都能更有效地结合或中和VEGF和PDGF，阻断血管新生和生长，从而达到更好的治疗效果。
技术实现思路
本专利技术目的之一是提供一种经优化、且包含VEGF和PDGF受体细胞外片段和人免疫球蛋白Fc的融合蛋白，其在体内外都具有优良的稳定性和生物活性，并能同时阻断VEGF和 PDGF信号传递，从而抑制血管新生和生长的作用。为了实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案本专利技术一方面提供了一种融合蛋白，该融合蛋白是由PDGF受体和VEGF受体的不同片段与人免疫球蛋白Fc构成，其中PDGF受体片段，VEGF受体片段或Fc之间还可以包括一个或多个优化肽连接片段，该肽连接片段选自以下的组a.(Gly Gly Gly Gly Ser) η, η 可以为 1，2，3，4，5 ；b.(Gly Gly Gly) η, η 可以为 1，2，3，4，5 ； 其中所述PDGF受体片段选自以下的组a.PDGFa受体的细胞外免疫球蛋白样区域1、2、3或4，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 1所述；或b.PDGF β受体的细胞外免疫球蛋白样区域1、2、3或4，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 2 所述；所述的VEGF受体片段选自以下的组a.VEGF-I受体的细胞外第2免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 3所述；b.VEGF-2受体的细胞外第3免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 4所述；c.VEGF-I受体的细胞外第4免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 5所述。本专利技术还进一步提供了具有以下结构的融合蛋白a.KH-001 α RD dl — α RD d2 — α RD d3 — α RD d4 — FLT-I d2 — KDR d3 —Fc ；b.KH-OO2 : β RD dl — β RD d2 — β RD d3 — β RD d4 — FLT-I d2 — KDR d3 - Fc;c.KH-003 α RD d2 — α RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — FLT-I d4 — Fe;d.KH-004e.KH-005f.KH-006β RD d2 - β RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — FLT-I d4 — Fe; α RD d2 - α RD d3 — FLT-I d2 一 KDR d3 — Fe; β RD d2 - β RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — Fe;g.KH-007 a RD d2 - a RD d3 — GS — FLT-I d2 — KDR d3 — GS — Fe;h.KH-008 3 RD d2 — 3 RD d3 — GS — FLT-I d2 — KDR d3 — GS — Fe;i.KH-009 a RD d2 — a RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — GS — Fe; j. KH-OlO 3 RD d2 — 3 RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — GS — Fe; k. KH-Oll a RD d2 — a RD d3 — GS — FLT-I d2 — KDR d3 — Fe; 1. KH-012 3 RD d2 — ^ RD d3 — GS —本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种融合蛋白，其特征在于，由ＰＤＧＦ受体和ＶＥＧＦ受体的不同片段与人免疫球蛋白Ｆｃ构成，其中ＰＤＧＦ受体片段，ＶＥＧＦ受体片段或Ｆｃ之间还可以包括一个或多个优化肽连接片段，该肽连接片段选自以下的组：（Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ）　ｎ，　ｎ可以为１，２，３，４，５；（Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ）　ｎ，　ｎ可以为１，２，３，４，５；　　　　　　　　ＰＤＧＦ受体片段选自以下的组：ａ．　ＰＤＧＦ　　α　受体的细胞外免疫球蛋白样区域１、２、３或４，其氨基酸序列如序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１　所述；或ｂ．　ＰＤＧＦ　β受体的细胞外免疫球蛋白样区域１、２、３或４，其氨基酸序列如序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．２　所述；　　　　　　　ＰＤＧＦ受体片段选自以下的组：ａ．　ＶＥＧＦ－１受体的细胞外第２免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．３　所述；ｂ．　ＶＥＧＦ－２受体的细胞外第３免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．４所述；ｃ．　ＶＥＧＦ－１受体的细胞外第４免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中ＳＥＱ　ＩＤＮＯ．５　所述。

【技术特征摘要】
2010.07.10 CN 201010223930.51.一种融合蛋白，其特征在于，由PDGF受体和VEGF受体的不同片段与人免疫球蛋白 Fc构成，其中PDGF受体片段，VEGF受体片段或Fc之间还可以包括一个或多个优化肽连接片段，该肽连接片段选自以下的组(Gly Gly Gly Gly Ser) η, η 可以为 1,2,3,4,5 ； (Gly Gly Gly) η, η 可以为 1，2，3，4，5 ； PDGF受体片段选自以下的组a.PDGF α受体的细胞外免疫球蛋白样区域1、2、3或4，其氨基酸序列如序列表中 SEQ ID NO. 1 所述；或b.PDGF β受体的细胞外免疫球蛋白样区域1、2、3或4，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 2 所述；PDGF受体片段选自以下的组a.VEGF-I受体的细胞外第2免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 3所述；b.VEGF-2受体的细胞外第3免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 4所述；c.VEGF-I受体的细胞外第4免疫球蛋白样区域，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 5所述。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于具有以下结构KH-001 α RD dl — α RD d2 — α RD d3 — α RD d4 — FLT-I d2 — KDR d3 —Fc ；KH-002 β RD dl - β RD d2 — β RD d3 — β RD d4 -FLT-I d2 — KDR d3 —Fc ；KH-003 α RD d2 — α RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — FLT-I d4 — Fe;KH-004 β RD d2 — β RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — FLT-I d4 — Fe;KH-005 α RD d2 — α RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — Fe;KH-006 β RD d2 — β RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — Fe;KH-007 α RD d2 — α RD d3 — GS — FLT-I d2 — KDR d3 — GS — Fe;KH-008 β RD d2 — β RD d3 — GS — FLT-I d2 — KDR d3 — GS — Fe;KH-009 α RD d2 — α RD d3 — FLT-I d2 — KDR d3 — GS — Fe;KH-010 β R...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯潇，郑强，
申请(专利权)人：成都康弘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：90