倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法技术

本发明专利技术涉及倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征是大叶醉鱼草用有机溶剂提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用乙酸乙酯或乙醚萃取，减压浓缩得萃取有机溶剂层，取萃取有机溶剂进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含醉鱼草定A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇-水或乙腈-水进行洗脱，浓缩相应组分，结晶即得。本发明专利技术制备方法简单，制备量大、收率高、产品纯度好，适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药制药领域，涉及倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法。
技术介绍
醉鱼草定A(Buddledin Α),分子式为 C17H24O3,分子量 276. 38,mp. 94-95°C，为无色片晶，是从醉鱼草科(Buddlejaceae)大叶醉鱼草Buddleja davidii Franch.根皮和日本醉鱼草^/i/i/ZeJa japonica Hemsl.根中分离得到的倍半萜化合物。药理研究表明，醉鱼草定A具有毒鱼活性。李顺举等研究发现不同浓度的大叶醉鱼草乙醇提取液对蝗虫的喂毒强度不同，乙醇提取液浓度越高，作用越强烈，效果越好。目前，醉鱼草定A主要采用常压反复硅胶柱层析进行分离，得率低，不但对操作人员人身造成危害，而且有毒溶剂消耗较大。中国专利申请号201010554164. 0公开的“一种醉鱼草定A的制备方法”采用多级逆流萃取与大孔吸附树脂柱层析结合制备醉鱼草定A，该方法分离效果较差，产品纯度较低。
技术实现思路
本专利技术旨在克服上述技术缺陷，提供一种分离效果好、收率高、产品纯度好，适合工业化生产的醉鱼草定A的提取纯化方法。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征在于将大叶醉鱼草用有机溶剂加热提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用2-3倍体积量的乙酸乙酯或乙醚萃取， 萃取3-6次，减压浓缩得萃取有机溶剂层，取萃取有机溶剂进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含醉鱼草定A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇-水或乙腈-水进行洗脱，浓缩相应组分，结晶即得。所述提取所用有机溶剂可选80-95%乙醇、甲醇、丙酮，提取方法可选回流或超声提取。所述高压硅胶柱的柱压为2. 2-3. 3MPa，柱内径为150_250mm，层析柱径高比为 1:12-20，硅胶目数为100-400目。所述制备液相流动相中甲醇的体积百分比浓度为20-70%，乙腈的体积百分比浓度为 20-50%ο所述结晶溶剂为二氯甲烷-甲醇、石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-乙酸乙酯组合中的任意一种。本专利技术的有益效果是1、本专利技术方法通过提取、萃取、柱层析及制备液相分离、结晶等步骤制备醉鱼草定A，耗时短，得率高，操作简单，易于工业化生产。2、使用特制高压柱层析，上样量大，周期短，分离度好，产品纯度高。3、本专利技术为醉鱼草定A的进一步开发利用提供药理原料、理论和实践支持。本
技术实现思路
通过以下的实施例作进一步的阐述，但并不限制本专利技术的范围。具体实施例方式实施例1 取大叶醉鱼草5kg按质量比1:4加入85%的乙醇，80°C条件下加热回流提取1. 5小时， 提取3次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用乙醚(800ml)萃取6次，减压浓缩得乙醚层85g，将乙醚层85g用甲醇溶解湿法上样至填料200-300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 9MPa，柱内径为150mm，层析柱径高比为1:18，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:1、100:2、100:5、100:20洗脱，分段收集各流分，将含醉鱼草定A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离得到醉鱼草定A粗品， 制备液相色谱条件是流动相乙腈-水(45:55)，流速15ml/min，检测波长280nm。将醉鱼草定A粗品用石油醚-乙酸乙酯(5:1)进一步结晶纯化，得纯度为98. 9%的无色结晶产品 15g。实施例2:取大叶醉鱼草5kg按质量比1:6加入80%的丙酮，85 °C条件下加热回流提取2小时，提取2次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用乙酸乙酯 (1200ml)萃取4次，减压浓缩得乙醚层83g，将乙醚层83g用甲醇溶解湿法上样至填料 100-200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为3. 3MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为 1:20,以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100 1、1002、1005、10020洗脱，分段收集各流分，将含醉鱼草定A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离得到醉鱼草定A粗品，制备液相色谱条件是流动相甲醇-水(70:30)，流速20ml/min，检测波长280nmo将醉鱼草定A粗品用二氯甲烷-甲醇(6 1)进一步结晶纯化，得纯度为98. 7% 的无色结晶产品18g。实施例3:取大叶醉鱼草IOkg按质量比1 4加入90%的乙醇，75°C条件下超声提取1. 5小时，提取 3次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用乙酸乙酯(2000ml) 萃取3次，减压浓缩得乙醚层182g，将乙醚层182g用甲醇溶解湿法上样至填料300-400目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 2MPa，柱内径为200mm，层析柱径高比为1:15，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:1、100:2、100:5、100:20洗脱，分段收集各流分，将含醉鱼草定A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离得到醉鱼草定A 粗品，制备液相色谱条件是流动相甲醇-水(60:40)，流速35ml/min，检测波长280nm。 将醉鱼草定A粗品用石油醚-乙酸乙酯(3:1)进一步结晶纯化，得纯度为98. 8%的无色结晶产品3知。实施例4:取大叶醉鱼草IOkg按质量比1:5加入95%的甲醇，80°C条件下超声提取1小时，提取 2次，过滤，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用乙醚(1600ml)萃取5 次，减压浓缩得乙醚层176g，将乙醚层176g用甲醇溶解湿法上样至填料200-300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 6MPa，柱内径为220mm，层析柱径高比为1:17，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:1、100:2、100:5、100:20洗脱，分段收集各流分，将含醉鱼草定A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离得到醉鱼草定A粗品，制备液相色谱条件是流动相乙腈-水(27:73)，流速50ml/min，检测波长280nm。将醉鱼草定A粗品用二氯甲烷-乙酸乙酯(4:1)进一步结晶纯化，得纯度为98. 6%的无色结晶产品 36g。权利要求1.倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征是将大叶醉鱼草用有机溶剂加热提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用2-3倍体积量的乙酸乙酯或乙醚萃取， 萃取3-6次，减压浓缩得萃取有机溶剂层，取萃取有机溶剂进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含醉鱼草定A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇-水或乙腈-水进行洗脱，浓缩相应组分，结晶即得。2.根据权利要求1所述的倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征在于所述提取所用有机溶剂可选80-95%乙醇、甲醇、丙酮，提取方法可选回流或超声提取。3.根据权利要求1所述的倍半萜醉鱼草定A的提取纯化方法，其特征在于所述高压硅胶柱的柱压为2. 2-3. 3MPa，柱内径为150_250mm，层析柱径高比为1 12-20，硅胶目数为 100-400 目。4.根据权利要求1所述的倍半萜醉鱼草定A的提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．倍半萜醉鱼草定Ａ的提取纯化方法，其特征是将大叶醉鱼草用有机溶剂加热提取后，减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，用２－３倍体积量的乙酸乙酯或乙醚萃取，萃取３－６次，减压浓缩得萃取有机溶剂层，取萃取有机溶剂进行高压硅胶柱层析，用石油醚－丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集含醉鱼草定Ａ的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇－水或乙腈－水进行洗脱，浓缩相应组分，结晶即得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苏刘花，
申请(专利权)人：南京泽朗农业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：84