两个与陆地棉细胞质雄性不育恢复基因连锁新标记的开发及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种利用SSR和STS技术筛选棉花细胞质雄性不育恢复基因连锁的分子标记的方法和应用。包括步骤：a)构建(P30A×Y18R)×P30B回交群体BC1F1代共369个单株。育性分离比符合1∶1，由一对显性基因控制。b)SDS-CTAB法提取(P30A×Y18R)×P30B回交群体BC1F1代共369个单株叶片基因组DNA。分别构建可育和不育DNA混合池，每个DNA混合池由5个单株构成。c)SSR分析或STS分析，并同收SSR或STS标记扩增的特异DNA片段测序。d)数据分析。本发明专利技术公开了两个与棉花细胞质雄性不育恢复基因连锁的新标记，所述分子标记具有SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6的核苷酸序列；所述分子标记的引物对具有SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2或SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4的核苷酸序列。另外，本发明专利技术也公开了所述棉花细胞质雄性不育恢复基因连锁分子标记在恢复系分子鉴定中的应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．两个与陆地棉细胞质雄性不育恢复基因连锁新标记ＭＧＨＥＳ２８和ＳＴＳＨＹ２７的开发。其步骤包括：ａ）．构建（Ｐ３０Ａ×Ｙ１８Ｒ）×Ｐ３０Ｂ回交群体ＢＣ１Ｆ１代共３６９个单株，田间调查育性分离，可育株为１８０株，不育株为１８９株，卡方测验（Ｘ２＝０．１１，Ｐ＞０．９５）结果表明，可育与不育分离比例为１∶１，完全符合一对显性基因控制的模型。ｂ）．ＳＤＳ－ＣＴＡＢ法提取回交群体ＢＣ１Ｆ１代共３６９个单株的棉花叶片基因组ＤＮＡ。构建可育和不育ＤＮＡ混合池，每个混合池由５个单株构成。所有构建的可育和不育ＤＮＡ混合池用于ＳＳＲ和ＳＴＳ标记分析。ｃ）．ＭＧＨＥＳ２８和ＳＴＳＨＹ２７标记分析回交群体可育和不育ＤＮＡ混合池，进一步分析回交群体中不育单株出现的重组体。ＭＧＨＥＳ２８和ＳＴＳＨＹ２７标记扩增可育ＤＮＡ混合池的特异ＤＮＡ片段回收测序。ｄ）．数据分析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭三堆，侯思宇，张锐，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，郭三堆，
类型：发明
国别省市：11