巴氏染色液及其快速染色方法技术

本发明专利技术公开了一种巴氏染色液及其快速染色方法，巴氏染色液是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成；巴氏染色液的快速染色方法，是在22℃的室温环境下操作。本发明专利技术巴氏染色液制备方法简单、成本低。利用本发明专利技术巴氏染色液的染色方法简单可靠，可以从传统的90分钟缩减为7分钟，工作效率大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及巴氏染色液及其染色方法，属于体外诊断试剂及试剂的使用方法
技术介绍
巴氏(Papanicolaou)染色法是病理切片和脱落细胞染色中最好的最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点， 而且所染标本不易脱色，可长久保存。细胞核的主要成分是脱氧核糖核酸，其等电点为pH 1. 6-2. 0，当pH大于2. 0时 DNA带负电，能与带正电的染料阳离子结合。苏木素是染核的染料，氧化后成为氧化苏木素即苏木素红或苏木精，它的等离子点是PH 6. 5，当染液的酸碱度调节到PH 2. 2-2. 9时，苏木精能析出阳离子，与带负电的DNA结合。因为苏木精阳离子电荷不强，与DNA结合不牢， 所以染色不深。当加入钾矾等媒剂后，即结合成带强正电的大分子带色体——苏木精矾，后者具有强大亲和力，与DNA结合牢固，染成较深紫色，不易为醇、水洗脱。细胞浆中的蛋白质等电点约为PH 6.0，在不同的酸碱度中能与不同的染料结合。但在PH小于4时便不能再与染料的阳离子结合；PH大于8时便不再与染料的阴离子结合。伊红、亮绿、桔黄、俾士麦棕的发色部分都是阴离子，只能与蛋白质的阳离子结合，因此染色环境不能太酸太碱。较年轻的细胞如底层鳞状上皮细胞浆中核蛋白体较多，易与亮绿结合而染绿色。成熟的细胞浆中含核蛋白体较少(如成熟红细胞、表层角化鳞状上皮细胞)易与伊红结合而染红色。很衰老的细胞(如完全角化细胞)则可与桔黄结合而呈桔黄色。传统的巴氏染色液配制复杂，染色手续繁杂，时间较长且难以掌握。因而检验技术人员普遍感到操作难度大。
技术实现思路
本专利技术是为避免上述现有技术所存在的不足之处，提供一种巴氏染色液及其染色方法。以使巴氏染色液配制简单、染色过程时间短，易于技术人员准确操作。本专利技术巴氏染色液的特点是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成；所述细胞核染色液的配制方法为将0. 3g苏木素色精单独溶解于30ml无水乙醇中得苏木素酒精液；将硫酸铝铵 6g置于IOOOml大烧杯中加蒸馏水700ml，加热至70-80°C，搅拌使其完全溶解，然后加温至90°C，关断热源即加入苏木素酒精液，边加边搅拌，加完之后继续加热至沸即离开热源； 再向其中加入0. 5g黄色氧化汞粉末，边加边搅拌，继续加热使溶液呈深紫色，立即置于 10-30°C的水中进行水浴冷却；冷却到10-30°C后置于塑料桶中，加入体积浓度为冰乙酸anl，经滤纸滤去残渣即得细胞核染色液；所述细胞浆染色液的配制方法取0. Ig橙黄G6溶于100ml、95%酒精得橙黄G6酒精液为备用料；取0. Ig亮绿溶于100ml、95%酒精得亮绿酒精液为备用料；取0. 05g俾仕麦棕溶于100ml、95%酒精得俾仕麦棕酒精液为备用料；取0. Ig伊红溶于100ml、95%酒精得伊红酒精液为备用料；取磷钨酸0.5g为备用料；所有备用料充分混勻溶解后即为细胞浆染色液。本专利技术巴氏染色液的快速染色方法的特点是在22°C的室温环境下按如下步骤进行操作a、固定将未干的宫颈分泌物涂片置95%酒精中，15-30分钟时取出得固定涂片；b、染核将步骤a所得固定涂片置于细胞核染色液中染色2分钟，取出后用蒸馏水冲净得染核涂片，立即进行下一步骤的染浆；c、染浆将染核涂片置于细胞浆染色液中，2分钟取出，在95%酒精液中洗涤至无细胞浆染色液附着即得染浆涂片，所述染浆涂片即可用于进行镜检；若需要长期保存则继续进行后续步骤d的封片；d、封片将步骤c所得染浆涂片置于无水酒精中洗涤后，再置于AR级二甲苯洗涤透明涂片；用阿拉伯树胶封固透明涂片，所述被封固的透明涂片在10-30°C避光条件下保存。染色结果上皮细胞核染蓝紫色、核仁红色；胞浆依分化高低，分别染成橙黄、粉红、绿色、淡蓝色。与已有技术相比，本专利技术有益效果体现在1、本专利技术巴氏染色液制备方法简单、成本低。2、本专利技术染色方法简单可靠，可以从传统的90分钟缩减为7分钟，工作效率大大提尚。附图说明图1为传统的巴氏染色方法的染色效果图；图2为经本专利技术巴氏染色液按本专利技术方法操作的染色效果图；经实验表明本专利技术与传统方法所获得的染色效果相一致。具体实施例方式本实施例巴氏染色液是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成；细胞核染色液的配制将0. 3g苏木素色精单独溶解于30ml无水乙醇中得苏木素酒精液；将硫酸铝铵 6g置于IOOOml大烧杯中加蒸馏水700ml，加热至70-80°C，搅拌使其完全溶解，然后加温至 90°C，关断热源即加入苏木素酒精液，边加边搅拌，加完之后继续加热至沸即离开热源；再向其中加入0. 5g黄色氧化汞粉末，边加边搅拌，继续加热使溶液经目测呈深紫色，立即置于10-30°C的水中进行水浴冷却；冷却到10-30°C后置于塑料桶中，加入体积百分比为冰乙酸anl，经滤纸滤去残渣即得细胞核染色液，避光保存；冰乙酸的加入能稳定苏木素染色团抗拒氧化，使不过染，也减少沉淀形成；细胞浆染色液的配制取0. Ig橙黄G6溶于100ml、体积百分比为95%的酒精得橙黄G6酒精液为备用料；取0. Ig亮绿溶于100ml、体积百分比为95%的酒精得亮绿酒精液为备用料；取0. 05g俾仕麦棕溶于100ml、体积百分比为95%的酒精得俾仕麦棕酒精液为备用料；取0. Ig伊红溶于100ml、体积百分比为95%的酒精得伊红酒精液为备用料；取磷钨酸0.5g为备用料；所有备用料充分混勻溶解后即为细胞浆染色液。利用以上过程制备的巴氏染色液的快速染色方法是在22°C的室温环境下按如下步骤进行操作a、固定将未干的宫颈分泌物涂片置体积百分比为95%的酒精中，15-30分钟时取出得固定涂片；b、染核将步骤a所得固定涂片置于细胞核染色液中染色2分钟，取出后用蒸馏水冲净得染核涂片，立即进行下一步骤的染浆；C、染浆将染核涂片置于细胞浆染色液中，2分钟取出，先后在两缸体积百分比为 95%的酒精液中洗涤至无细胞浆染色液附着即得染浆涂片，染浆涂片即可用于进行镜检； 若需要长期保存则继续进行后续步骤d的封片；d、封片将步骤c所得染浆涂片置于无水酒精中洗涤后，再先后置于两缸AR级二甲苯洗涤透明涂片；用阿拉伯树胶封固透明涂片，被封固的透明涂片在10-30°C避光条件下保存。本实施例中各原料来源橙黄G6，型号为Q/GHXC 6118-2004 ；生产厂家上海展云化工有限公司；电话 021-56772368 ；网址:www. shzychem. com ；亮绿，型号为Q/CYDZ 2516-2005 ；生产厂家国药集团化学试剂有限公司；地址 上海市宁波路52号；俾仕麦棕，符合企标；生产厂家上海展云化工有限公司；电话021-56772368 ； 网址:www. shzychem. com ；伊红，符合企标；生产厂家上海展云化工有限公司；电话021-56772368，网址 www. shzychem. com ；阿拉伯树胶，生产厂家泰安利达胶业有限公司；地址山东省泰安市热电厂南， 电话:0538-8297288ο权利要求1.巴氏染色液，其特征是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成； 所述细胞核染色液的配制方法为将0. 3g苏木素色精单独溶解于30ml无水乙醇中得苏木素酒精液；将硫酸铝铵6g置于 IOOOml大烧杯中加蒸馏水700本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．巴氏染色液，其特征是由细胞核染色液和细胞浆染色液构成；所述细胞核染色液的配制方法为：将０．３ｇ苏木素色精单独溶解于３０ｍｌ无水乙醇中得苏木素酒精液；将硫酸铝铵６ｇ置于１０００ｍｌ大烧杯中加蒸馏水７００ｍｌ，加热至７０－８０℃，搅拌使其完全溶解，然后加温至９０℃，关断热源即加入苏木素酒精液，边加边搅拌，加完之后继续加热至沸即离开热源；再向其中加入０．５ｇ黄色氧化汞粉末，边加边搅拌，继续加热使溶液呈深紫色，立即置于１０－３０℃的水中进行水浴冷却；冷却到１０－３０℃后置于塑料桶俾仕麦棕溶于１００ｍｌ、９５％酒精得俾仕麦棕酒精液为备用料；取０．１ｇ伊红溶于１００ｍｌ、９５％酒精得伊红酒精液为备用料；取磷钨酸０．５ｇ为备用料；所有备用料充分混匀溶解后即为细胞浆染色液。中，加入体积浓度为１％冰乙酸２ｍｌ，经滤纸滤去残渣即得细胞核染色液；所述细胞浆染色液的配制方法：取０．１ｇ橙黄Ｇ６溶于１００ｍｌ、９５％酒精得橙黄Ｇ６酒精液为备用料；取０．１ｇ亮绿溶于１００ｍｌ、９５％酒精得亮绿酒精液为备用料；取０．０５ｇ

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴志昇，袁立成，吴松，
申请(专利权)人：安徽省巢湖市弘慈医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：34