一种导致烟草青枯病的茄科雷尔氏菌高纯培养物制备和保存方法技术

本发明专利技术公开了一种导致烟草青枯病的茄科雷尔氏菌高纯培养物制备和保存方法，将烟草青枯病典型症状的病株茎秆处置后，27～30℃无菌保湿培养12～24小时，获得含茄科雷尔氏菌培养物；经过TTC法鉴定、筛选含菌量在80％以上的高纯培养物；所获得的高纯培养物可采用保存液A在-20～-40℃恒温保存，或采用保存液B在20℃恒温保存；保存液A为100～200mL甘油和20～40g脱脂奶粉，加入蒸馏水溶解、定容至500mL，摇匀，常规灭菌后制得；保存液B是将1～2g的琼脂加入至1000mL蒸馏水中融化、摇匀，常规灭菌后制得。本发明专利技术的制备和保存方法简便、易行，目标菌纯度高、性状稳定，保存效果好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物纯化、保存
，具体涉及一种导致烟草青枯病的茄科雷尔氏菌高纯培养物制备方法和两种保存方法。
技术介绍
烟草青枯病(Tobacco bacterial wilt)是烟草生产中的主要细菌病害之一，在中国大部分产烟区都有发生，而且有逐年加重的趋势。其病原菌是茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)，该菌的寄主广泛，现有技术可实现对该菌的分离、培养和保存，见《中国烟草病害》(朱贤朝，王彦亭，王智发，中国农业出版社，2002，152 163页)，其采取的培养方式为将分离的材料表面消毒后，取病组织加入灭菌水后剪碎或磨碎，再取剪碎或磨碎液在 TTC培养基上划线或涂布，27 30°C培养3 4天后，检查培养的菌落，选择病菌菌落转入斜面培养、保存。该方式存在的不足是病菌在人工培养基上转接多次会导致病菌的变异、 一些固有的特性会丧失；而且有可能因为病菌数量少分离不到病菌。方中达编著的《植物病研究方法》(中国农业出版社，1998，187 189页)记载，有关保存烟草青枯病菌菌株的方法有真空冷冻干燥保存、冷冻甘油保存、矿物油保存、斜面保存和无菌水常温保存等方式。本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种导致烟草青枯病的茄科雷尔氏菌高纯培养物的制备方法，其特征是采取以下步骤：Ａ、原料的制备：选具有烟草青枯病典型症状的病株茎秆用自来水洗净，经７５％的酒精表面消毒２～３分钟后，用无菌水冲洗２～３次，然后在无菌条件下将病株茎秆截成３～５ｃｍ的小段；Ｂ、保湿培养：在２７～３０℃下，将病株茎秆小段的截口暴露于灭菌蒸馏水外，无菌保湿培养１２～２４小时，有浓稠状液体从截口处流出，浓稠状液体为含茄科雷尔氏菌培养物；Ｃ、选择高纯培养物：采用半选择ＴＴＣ法进行培养测定，用移菌环取Ｂ步骤所得的浓稠状液体，以含有０．１％吐温－８０、ｐＨ值为６．８的灭菌磷酸缓冲液１０倍系列稀释后，涂布于直径９～１０ｃｍ半选择Ｔ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：方敦煌，晋艳，宋春满，胡坚，秦西云，余清，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：53