本发明专利技术提供了新的腺伴随病毒衣壳与载体的序列以及含有这些序列的宿主细胞。也描述了使用这种宿主细胞和载体产生rAAV颗粒的方法。也提供了使用本发明专利技术的载体AAV-介导的递送治疗性和免疫原性基因。
【技术实现步骤摘要】
腺伴随病毒(AAV)进化支、序列、含有这些序列的载体及它们的应用本专利技术专利申请是国际申请号为PCT/US2004/028817，国际申请日为2004年9月30日，进入中国国家阶段的申请号为“200480027905.2”，专利技术名称为“腺伴随病毒(AAV)进化支、序列、含有这些序列的载体及它们的应用”的专利技术专利申请的分案申请。关于联邦政府资助的研究或开发的声明本申请包括由国家卫生研究院(NIH)的NIDDKP30DK47757和NHLBIP01HL59407拨款资助的工作。美国政府享有本专利技术的一定权力。专利技术背景腺伴随病毒(AAV)是细小病毒科家族的成员，它是小的无包膜、二十面体病毒，具有4.7千碱基(kb)到6kb的单链线形DNA基因组。由于该病毒是作为纯化的腺病毒原种的污染物被发现，AAV指定为依赖病毒属(Dependovirus)。AAV的生命周期包括潜伏期(AAV基因组在感染后位点特异性地整合进宿主染色体)，感染期(腺病毒或单纯疱疹病毒感染后，整合的基因组接着得到拯救、复制并包装进感染性病毒)。非致病性的特性、感染性的宽宿主范围(包括非分裂细胞)与潜在的位点特异性染色体整合使得AAV成为用于基因转移的有吸引力的工具。近来的研究表明AAV载体是用于基因递送的优选运载体。迄今为止，已从人或非人灵长类(NHP)分离了几种表征良好的不同AAV。已发现不同血清型的AAV表现出不同的转染效率，也表现出对不同细胞或组织的向性。然而，以前还未对这些不同血清型之间的关系进行研究。基于AAV的构建物用于递送异源分子是理想的。专利技术概述本专利技术提供AAV的系统发生相关序列的“超家族”或“进化支”。这些AAV进化支提供用于将分子靶向和/或递送至所需靶细胞或组织的AAV序列源。本专利技术一方面提供具有至少三个AAV成员的AAV进化支，这些成员是基于AAVvp1氨基酸序列对比，使用自引值为至少75％(基于至少1000次复制)的邻接启发式算法(Neighbor-Joiningheuristic)与不大于0.05的泊松校正距离测量值(Poissoncorrectiondistancemeasurement)确定为系统发生相关的。合适的AAV进化支由用于产生载体的AAV序列组成。本专利技术还提供以前未知的人AAV血清型，这些血清型在本文中称为克隆28.4/hu.14或AAV血清型9。因此，本专利技术另一方面提供一种由AAV衣壳组成的血清型9的AAV，该衣壳在血清学上与SEQIDNO：123的氨基酸1-736的序列的衣壳相关，在血清学上与AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7或AAV8中的任一衣壳蛋白不同。用该huAAV9的衣壳构建的载体表现出的基因转移效率类似于肝脏中的AAV8、优于肌肉中的AAV并且比肺中的AAV5高200倍。此外，该新的人AAV血清型与以前所述的AAV1到AAV8的序列同一性小于85％，并且不被任何这些AAV交叉中和。本专利技术也提供其它新的AAV序列、含有这些序列的组合物及它们的应用。有利的是，这些组合物特别适用于出于治疗或预防目的需要反复施用的AAV载体。本专利技术的这些和其它方面可通过以下专利技术详述得到明白。附图简述图1是使用带泊松校正距离测量值的邻接启发式算法构建的系统发生关系树。基于分离的AAVvp1衣壳蛋白与分组于进化支中分离的AAV确定关系。单个衣壳克隆的组基于它们共同的祖先分类在进化支中。进化支以A到F命名；亚型以进化支字母加上一个数值表示。图2A-2AE对比了本专利技术的AAVvp1衣壳蛋白的氨基酸序列(公布了各个序列的编号)与以前公布的AAV1[SEQIDNO：219]、AAV2[SEQIDNO：221]、AAV3-3[SEQIDNO：217]、AAV4-4[SEQIDNO：218]、AAV5[SEQIDNO：216]、AAV6[SEQIDNO：220]、AAV7[SEQIDNO：222]、AAV8[SEQIDNO：223]与rh.25/42-15、29.3/bb.1、cy.2、29.5/bb.2、rh.32、rh.33、rh.34、rh.10、rh.24、rh14、rh.16、rh.17、rh.12、rh.18、rh.21(以前称为41.10)、rh.25(以前称为41.15)、rh2、rh.31、cy.3、cy.5、rh.13、cy.4、cy.6、rh.22、rh.19、rh.35、rh.37、rh.36、rh.23、rh.8和ch5[公开的美国专利申请号2003/0138772Al(2003年7月24日)]。本专利技术的序列包括hu.14/AAV9[SEQIDNO：123]、hu.17[SEQIDNO：83]、hu.6[SEQIDNO：84]、hu.42[SEQIDNO：85]、hu.38[SEQIDNO：86]、hu.40[SEQIDNO：87]、hu.37[SEQIDNO：88]、rh.40[SEQIDNO：92]、rh.52[SEQIDNO：96]、rh.53[SEQIDNO：97]、rh.49[SEQIDNO：103]、rh.51[SEQIDNO：104]、rh.57[SEQIDNO：105]、rh.58[SEQIDNO：106]、rh.61[SEQIDNO：107]、rh.50[SEQIDNO：108]、rh.43[SEQIDNO：163]、rh.62[SEQIDNO：114]、rh.48[SEQIDNO：115]、4-9/rh.54[SEQIDNO：116]和4-19/rh.55[SEQIDNO：117]、hu.31[SEQIDNO：121]、hu.32[SEQIDNO：122]、hu.34[SEQIDNO：125]、hu.45[SEQIDNO：127]、hu.47[SEQIDNO：128]、hu.13[SEQIDNO：129]、hu.28[SEQIDNO：130]、hu.29[SEQIDNO：132]、hu.19[SEQIDNO：133]、hu.20[SEQIDNO：134]、hu.21[SEQIDNO：135]、hu.23.2[SEQIDNO：137]、hu.22[SEQIDNO：138]、hu.27[SEQIDNO：140]、hu.4[SEQIDNO：141]、hu.2[SEQIDNO：143]、hu.1[SEQIDNO：144]、hu.3[SEQIDNO：145]、hu.25[SEQIDNO：146]、hu.15[SEQIDNO：147]、hu.16[SEQIDNO：148]、hu.18[SEQIDNO：149]、hu.7[SEQIDNO：150]、hu.11[SEQIDNO：153]、hu.9[SEQIDNO：155]、hu.10[SEQIDNO：156]、hu.48[SEQIDNO：157]、hu.44[SEQIDNO：158]、hu.46[SEQIDNO：159]、hu.43[SEQIDNO：160]、hu.35[SEQIDNO：164]、hu.24[SEQIDNO：136]、rh.64[SEQIDNO：99]、hu.41[SEQIDNO：91]、hu.39[SEQIDNO：102]、hu.67[SEQIDNO：198]、hu.66[SEQIDNO本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种腺伴随病毒（ＡＡＶ）载体，其包含ｒｈ．６４ＡＡＶ衣壳，所述ＡＡＶ ｒｈ．６４衣壳具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３所示的序列，其中所述ＡＡＶ还包含具有ＡＡＶ末端反向重复和操作性连接于调节序列的异源基因的小基因，所述调节序列引导所述异源基因在宿主细胞中表达。
【技术特征摘要】
2003.09.30 US 60/508,226;2004.04.29 US 60/566,5461.一种腺伴随病毒(即AAV)载体，其包含AAVrh.64衣壳，所述AAVrh.64衣壳由vp1蛋白、vp2蛋白和vp3蛋白构成，所述vp1蛋白由选自SEQIDNO:99或SEQIDNO:233所示序列构成，其中所述AAV还包含小基因，所述小基因具有AAV末端反向重复和操作性连接于调节序列的异源基因，所述调节序列引导所述异源基因在宿主细胞中表达。2.如权利要求1所述的腺伴随病毒载体，其特征在于，所述衣壳由SEQIDNO:15所示的核酸序列编码。3.如权利要求1-2中任一项所述的腺伴随病毒载体，其特征在于，所述末端反向重复来自与AAVrh.64异源的AAV。4.一种分离的衣壳蛋白，所述衣壳蛋白选自下组：由SEQIDNO:99的氨基酸1-738构成的vp1衣壳蛋白，和由SEQIDNO:233的氨基酸1-738构成的vp1衣壳蛋白。5.一种核酸分子，其包含编码权利要求4中所述蛋白的核...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·M·威尔森，G·高，M·R·阿尔维拉，L·H·范登伯格，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州立大学托管会，
类型：发明
国别省市：US
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