基于玻璃化转变温度通过干法加热的病毒灭活方法技术

本发明专利技术涉及针对存在或可能存在于根据玻璃化转变温度干燥的生物制品中的病毒通过干法加热的病毒灭活方法。首先确定所述干制品的玻璃化转变温度，接着在不低于所述确定的玻璃化转变温度的温度加热所述制品。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
病毒污染的风险存在于任何固体生物材料中，其后续的或衍生的 产品或使用这样的材料的加工品必须用病毒灭活方法处理以便用于治 疗或预防的目的。在治疗和预防领域中，使用的活性物质源自生物来源，或在其生 产处理过程中可能被生物来源污染。这些活性物质可以是蛋白、肽、多肽、抗体；可能被脂质或糖类 基团取代的蛋白、肽、多肽、抗体；核酸、DNA、 RNA、多糖、细菌、 病毒颗粒或其它。它们所起源的生物来源或者在其生产处理过程中可能污染它们的 生物来源可以是任何人或动物组织、血液、血浆、骨、任何才直物组织、 任何微生物、细胞培养基、病毒培养基、细菌培养基、酵母培养基、 霉菌培养基或真菌培养基。因此，在从这样的生物来源生产活性物质的提取步骤中，通常包 括病毒减少或灭活步骤。对于本专利技术，生物制品是指包含由生物来源制得的活性物质和源 自所述活性物质的生产处理的其它化合物和赋形剂的制品。基于用化学品和/或加热处理的病毒灭活方法是背景领域已知的。 其中大多数来自病毒灭活效力至关重要的输血领域，因为必须尽力使 得没有得自捐献者血液导致的可能污染。加热已经被推荐用于灭活HIV,因为已经特别公认其病毒源在血 液和血浆以及血液和血浆的f;t生制品中。干法加热，即将干制品加热 到温度T并维持时间l殳t，已经被推荐用于例如尚未以液体形式加热 的凝血因子的冻干或冷冻干燥的浓缩物。例如，过去常常将从人类血浆中提取的凝血因子VIII以冻干的形式在60。C加热72-96小时以使 这种生物学活性物质安全地用于治疗血友病患者。然而，病毒滴度的 不一致减少导致这种方法被放弃，因为尽管进行了加热灭活，仍记录 了一些^皮HIV感染的血友病患者污染病例。因此，建议将这些制品经受所谓的严格的加热条件，即以干燥 形式在80。C的温度下加热72小时。根据以这种方式处理因子VIII所获得的临床结果，这种病毒灭活 方法后来被批准用于HIV (有包膜病毒)(L. Winkelman et al,， Severe Heat Treatment of Lyophilised Coagulation Factors (冻干凝血因子的严 格加热处理)Curr. Stud. Hematol. Blood Transfus. 56: 55-69)。用溶剂和洗涤剂的混合物处理纯化的蛋白也通常用于防止通过源 自生物来源的蛋白的有包膜病毒的传染(Piet et al., Transfusion (输液) 30: 592-98)。这种处理对具有脂质包膜的病毒有效但对那些没 有这样的结构的病毒则逊色很多。最近，描述了通过使用溶剂/洗涤剂 处理的生物制品的至少两个无包膜病毒的传染。无包膜RNA病毒曱型 肝炎病毒被传染给使用已经用溶剂/洗涤剂处理过的因子VII的患者 (Purcell et al., Vox Sang 67: 2-7)。因子VIII也与无包膜细小病 毒B19的传染有关(LefAre et al. Lancet 343: 211-12)。纯化蛋白的加热处理已经被推荐将病毒灭活语延伸至无包膜病 毒。然而，无包膜病毒的加热灭活通常比有包膜病毒更难，并且通常 要求更长的处理时间和/或更高的温度以保证灭活令人满意。B19已经 通过已在100°C下干法加热30分钟的因子VIII传染给患者 (Santagostino et al Lancet 343:798)。因此，很明显弄清楚能够如何改进病毒灭活方法以保持或增强生 物制品的安全性非常重要。
技术介绍
很多研究者设法观察影响干法加热的病毒灭活的主要参数。其目 标在于限定物理化学参数，所述参数会允许预测所给处理是否适合于 待处理的固体材料，即该处理是否会在保持制品的稳定性令人满意时将病毒灭活至充分的程度。此外，如果能够调节这种参数以有利于病 毒灭活或制品稳定性，则会极为有趣。病毒灭活处理的病毒减少因子被定义为病毒滴度减少的因子，即 灭活步骤前的病毒滴度和灭活步骤后的病毒滴度的比值的常用对数。水分含量被定义为每100 g制品中物质的重量。这是为什么将它 表达为总重百分数的原因。传统的测量方法是在100。C以上的温度加热至其重量保持恒定后测量制品重量的减少。Wilkommen等人(Paul Ehrlich Institute)表明对于含有低水分水平 的冻干粉(< 0.8%),通过在80°C加热72小时得到的曱型肝炎病毒 (HAV)减少因子为0-0.4 log1()，而对于含有较高水分水平的冻干粉(> 0.8%)，在同样条件下得到的曱型肝炎病毒减少因子大于或等于4.3 logio。Bunch等人(Alpha Therapeutic Corporation)表明对于重组因子 VIII的两个样品，在80。C加热72小时时甲型肝炎病毒减少因子大于 等于6.9 log10。Roberts PL等人(Biologicals Sept; 28(3): 185-8 Comparison of the Inactivation of Canine and Bovine Parvovirus by Freeze-Drying and Dry-Heat Treatment in Two High-Purity Factor VIII Concentrates (在 两个高纯度因子VIII浓缩物中通过冻干和干法加热处理的犬和牛细小 病毒的灭活比4支))表明在将因子VIII浓缩物的两个冻干制剂在80°C 加热72小时时，通过两个细小病毒(牛和犬)的病毒灭活对生物制品的 成分和病毒的抵抗力的影响。Hart HF等人(Vox Sang 67(4): 345-50 Effect of Terminal (Dry) Heat Treatment on Non-Enveloped Viruses in Coagulation Factor Concentrates (最终(干法)加热处理对凝血因子浓缩物中无包膜病毒的 作用))在80。C加热24小时或90°C加热2小时的因子VIII冻干4分中获 得了相同的甲型肝炎病毒减少因子。Tomokiyo等人(Vox Sang Jan; 84(1): 54-64 Large-Scale Production and Properties of Human Plasma-Derived Activated Factor VII Concentrate (人类血浆书f生的活化因子VII浓缩物的大规才莫生产及性质))表明通过灭活因子Vila的冻干粉中的CMV (巨细胞病毒)、 HIV(人类免疫缺陷病毒)、BVDV(牛病毒性腹泻病毒)、脊髓灰质炎病 毒、PPV (猪细小病毒)的不同病毒，冻干粉中的病毒灭活在6S。C是 可能的。将含有小于1.7%的水分水平的制品在65。C加热96小时表明 除了PPV之外，所有病毒的病毒减少因子大于41og10。专利申请EP 0 844 005表明，待处理的干生物制品的残留水分含 量是通过在80。C干法加热处理72-77小时的病毒灭活效力中的关键因 素。所测试的病毒是HAV、猪细小病毒和々支性狂犬病病毒。本专利技术人 表明残留水分必须大于或等于0.8%以达到用这种处理使病毒减少因 子大本文档来自技高网...

【技术保护点】
针对存在或者可能存在于干生物制品中的病毒进行干法加热的病毒灭活方法，其特征在于包括如下步骤：　ａ）确定待处理的干生物制品的玻璃化转变温度Ｔｇ，然后　ｂ）在等于或大于步骤ａ）中确定的所述玻璃化转变温度Ｔｇ的干法加热温度Ｔ加热来自步骤ａ）的所述待处理的干生物制品。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】FR 2005-12-19 05128751.针对存在或者可能存在于干生物制品中的病毒进行干法加热的病毒灭活方法，其特征在于包括如下步骤a)确定待处理的干生物制品的玻璃化转变温度Tg，然后b)在等于或大于步骤a)中确定的所述玻璃化转变温度Tg的干法加热温度T加热来自步骤a)的所述待处理的干生物制品。2. 如权利要求1的方法，其特征在于干法加热之前调节所述干生 物制品的玻璃化转变温度Tg。3. 如权利要求1或2的方法，其特征在于所述干生物制品是冻干粉。4. 如权利要求1-3中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述 干生物制品是含有 一 种或多种提取自血液-血浆的蛋白的组合物。5. 如权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其特征在于选择 所述干法加热温度T以使得灭活无包膜病毒。6. 如权利要求2-5中任一权利要求所述的方法，其特征在于通过 向所述生物制品中加入高分子量赋形剂或减少所述生物制品的水分使 所述玻璃化转变温度升高。7. 如权利要求2-5中任一权利要求所述的方法，其特征在于通过 向所述生物制品中加入盐或低分子量赋形剂或通过增加该生物制品的 水分含量使所述玻璃化转变温度降低。8. 如权利要求1-7中任一权利要求所述的方法，其特征在于使用 差示扫描量热仪测量Tg。9. 如权利要求1-8...

【专利技术属性】
技术研发人员：安妮巴达特，
申请(专利权)人：分馏及生物技术法国实验室股份公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]