【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
ＩＢＶ－Ｎ重组蛋白，其特征是，通过以下制备方法获得： １）根据ＧｅｎＢａｎｋ中已登录的ＩＢＶ－Ｎ基因序列，设计一对特异引物 上游引物为５’－ＣＣＧＡＴＡＴＣＡＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＴＡＡＡＧＣＡ－３’， 下游引物为５’－ＣＣＧＴＣＧＡＣＡＣＴＣＡＡＡＧＴＴＣＡＴＴＣＴＣＴＣＣ－３’ 扩增片段大小为１２３０ｂｐ； ２）通过ＲＴ－ＰＣＲ方法对ＩＢＶ的Ｎ基因进行扩增；以ＥｃｏＲ Ｖ和Ｓａｌ Ｉ同时对ＩＢＶ－Ｎ基因ＲＴ－ＰＣＲ产物和ｐＥＴ－３２ａ（＋）载体进行酶切，回收目的片段，用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将二者进行连接，１６℃过夜，次日将连接产物转化感受态细胞ＢＬ２１，３７℃温箱培养１６－２０ｈ；挑取单菌落扩大培养，提取质粒，用ＥｃｏＲＶ、Ｓａｌ Ｉ进行双酶切鉴定；将阳性重组质粒测序，鉴定正确后获得阳性重组表达质粒ｐＥＴ－３２ａ（＋）－ＩＢＶ－Ｎ； ３）将阳性重组表达质粒ｐＥＴ－３２ａ（＋）－ＩＢＶ－Ｎ及空白载体ｐＥＴ－３２ａ（＋）分别转化ＢＬ２１感受态细胞，于３７℃培养，待ＯＤ６００ｎｍ值达到０．５～０．６时，加入ＩＰＴＧ至终浓度为１．０ｍｍｏｌ／Ｌ进行诱导表达，收集诱导表达后４ｈ的菌体，...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：亓丽红，黄兵，宋敏训，艾武，王莉莉，刘涛，秦卓明，
申请(专利权)人：山东省农业科学院家禽研究所，
类型：发明
国别省市：88
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