制备用作血液学对照品的红细胞组分制造技术

处理脊椎动物的红细胞使之成为血液学对照品的有效组分，该对照品可用于检测所有血细胞组分，包括白细胞和血小板。该处理包括在浓度和接触时间有限的条件下利用固定剂，得到的红细胞稳定但可在血液学仪器中裂解且形成颗粒的倾向性降低。

【技术实现步骤摘要】
制备用作血液学对照品的红细胞组分本申请是国际申请号为PCT/US 2007/073625，国际申请日为2007年7月16日，进入中国国家阶段的申请号为200780027^2. 5，名称为“制备用作血液学对照品的红细胞组分”的专利技术专利申请的分案申请。早期申请的交叉引用本申请要求2006年7月17日提交的美国临时专利申请号60/807，585的优先权， 其内容通过引用全文纳入本文。
技术介绍
1.专利
本专利技术涉及血液学仪器的对照品材料领域，特别是关注对照品材料的红细胞组分。2.现有技术描述分析血液组分和化学性质的血液学仪器已使用多年，在此期间这些仪器的精确性和灵敏度不断提高。因此，早期形式的血液学仪器已被能根据各组分复杂而微妙的特征来分析血液中不连续组分的较复杂机器替代。除了检测红细胞和血小板外，自动血液学仪器中的最新发展是人白细胞的多组分分析。白细胞群通常包括淋巴细胞、单核细胞、嗜中性白细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。血细胞分析方法包括检测各类血细胞的电学和光学特性。典型的仪器可单独对白细胞组分计数和区分红细胞和血细胞大小。为计数白细胞，需要利用洗涤剂，例如季铵盐破坏红细胞，从而留下白细胞计数和区分大小。Beckman-Coulter 五组分白细胞分析仪器采用几种不同的技术，各依据电阻率、 电导率(采用低压DC检测的DC数字操作)、Rf (射频)调制和激光技术(包括光散射和光吸收)。通常联用Rf检测和DC低频检测以产生称为不透明度的参数，其是Rf除以DC的计算值。其它生产商，例如 Abbott Diagnostics 、Bayer 和 TOA Medical Electronics 的仪器联用电阻率，DC电导率和/或激光技术、Rf、去极化的90°角光散射和/或光吸收。 虽然电子技术的基础类型看似相同，但各生产商对于分析血细胞所需的仪器硬件和软件具有独特的实现方式。各生产商对于该技术的各自实现方式导致各生产商的各自具体仪器需要大量不同的试剂和方法，从而增加了它们应用复杂性和花费。现有的试剂或方法无一可用于多种仪器。为确保血液学仪器的可靠性和精确性，管理当局要求利用血液对照品以验证仪器的完整性。最佳对照品含有代表新鲜血液的所有细胞元件的颗粒，以及合成血浆，这是一种人工配制的液体悬浮介质以模拟人血浆。合成血浆通常含有与天然血浆的组分相同的或以相同方式起作用的组分。这些组分包括无机盐、有机和/或无机缓冲液及维持与血浆蛋白质所维持相类似的稳态的粘性材料。对照品的生产商提供，例如细胞计数、细胞大小和细胞类型等所有关键值。对照品材料应具有足够的保存期，从而能使用数天、数周或数月，进而确保仪器性能随时间推移而一致。制备血液学对照品的方法依赖于使用该对照品的具体仪器的硬件和软件设计以及长期保存的要求。血液对照品由RBC组分构成，通常是将经洗涤的人红细胞悬浮在合成血浆中。红细胞伴有会被仪器视作白细胞亚群的一种或多种颗粒。虽然白细胞对照品可以是人白细胞，但可使用以交联剂稳定从而能防止被洗涤剂破坏的动物红细胞作为替代。可用作Coulter -型仪器的人白细胞、红细胞或血小板对照品的血液对照品产物中的颗粒对于其它仪器，例如Abbott Laboratories 、Bayer 或TOA Medical Electronics生产的那些仪器可能无效。此外，因为这些颗粒通常是修饰形式的各种类型血细胞，它们的性能与活的天然新鲜血细胞不相似。例如，对于Abbott 仪器，用交联剂，如戊二醛固定的人白细胞的性能类似于嗜中性粒细胞，而对于Coulter 仪器类似于细胞碎片。对于某一类血液学仪器，特别处理并交联的非哺乳动物脊椎动物的红细胞还可显示为单核的细胞，而对于另一类仪器可显示为淋巴细胞。血液学对照品的红细胞组分可在许多仪器上良好使用以验证数值和化学值，例如计数和血红蛋白含量以及物理特征，例如大小和形状，而这些数值，特别是物理特征的那些值，例如平均细胞容积(MCV)、大小分布(RDW，即红细胞分布宽度)和细胞形状在不同仪器之间差别很大。此外，一类仪器可将红细胞制品读取为在血小板和/或白细胞计数区中所含的碎片，而另一类仪器读取为不含这种碎片。例如，生物辐射实验室公司(Bio-Rad Laboratories, Inc.)制造的血液学(C)产品中的红细胞制品在拜尔Hl-E血液学仪器(Bayer Hl-E Hematology Instrument)上具有高血小板背景。在阿伯特细胞-DYN 4000 (Abbott CELL-DYN 4000)仪器上，此同一红细胞制品在光学血小板和白细胞区中显示有干扰。在阿伯特细胞-DYN3000系列或1000系列仪器上不出现血小板或白细胞干扰。生物辐射血液学(C)产品所用的红细胞制品在考特尔(Coulter)仪器，例如考尔特MaxM型 (Coulter Model MaxM)上显示没有血小板或白细胞干扰，但在阿伯特细胞-DYN 4000仪器上确实显示血小板和白细胞干扰。现有技术报道了将某些分析物加入血液对照品的悬浮介质，从而通过改进组分的物理特征和防止颗粒碎片形成来改善该对照品中红细胞组分性能。Ryan等在美国专利号 6，403，377B1中指导可加入脂蛋白来改善白细胞组分的大小特征，加入抗氧化剂以防红细胞裂解。^ung在公布的美国专利申请号US2005/0221497A1中类似地公开了利用脂蛋白增加白细胞组分的容积。与Ryan等相反，在^img的申请中，脂蛋白通过考特尔仪器所用的洗涤剂起到使红细胞适当裂解的作用。Young还描述了血液对照品中需要非离子洗涤剂以进一步促进红细胞裂解，而不损害血液对照品中所用白细胞替代品的完整性。已证明固定红细胞是提供适用作白细胞类似物的不可裂解颗粒的有效方法。Hunt 在美国专利号3，873，467中描述了利用人红细胞产生白细胞类似物的固定方法。上文Ryan 等描述了利用交联剂稳定红细胞。借助这些方法固定的细胞可耐受机械应力，例如超声处理诱导的应力。上文^ung等详细描述了产生许多不同类型白细胞类似物的固定方法。 Carver 等在美国专利号 6，146，901，6，514，763B2，4, 704，364和 5，380，664 中公开了白细胞类似物的其它固定方法。本章节和本说明书它处引用的所有专利和公布的专利申请通过引用纳入本文。专利技术概述本专利技术的目的之一是提供从脊椎动物来源制备用于血液学血液对照品中的红细胞的方法，特别是足够灵活从而能补偿血液学仪器生产商所用不同技术的方法。本专利技术使得人们可采用本文所述方法定制工艺，从而获得唯一符合所选血液学仪器规格的血液学对照品。提供从人红细胞制备血液学血液对照品而无需血浆胆固醇或脂蛋白来增强红细胞可裂解性的方法也是本专利技术目的之一。本专利技术的另一目的是提供含有红细胞组分的血液学血液对照品，其中所述对照品本身不需要表面活性剂或其它裂解促进剂来增强红细胞组分在血液学仪器中的可裂解性能。本专利技术的另一目的是提供含有红细胞组分的血液学血液对照品，其中所述红细胞组分用交联剂固定从而尽可能降低或防止形成干扰血小板和白细胞计数区的颗粒。本专利技术的另一目的是提供含有红细胞组分的血液学血液对照品，其中所述红细胞组分(a)用交联剂固定从而能为多种本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种血液对照品，其包含相对量已知的悬浮在模拟血浆中的红细胞组分、白细胞组分和血小板组分，所述红细胞组分由Ｂ１型哺乳动物无核红细胞构成，而该哺乳动物无核红细胞已通过在２℃－８℃的温度下用０．０５％－２．５％（重量／体积）固定剂浓度的丁－１，４－二醛温育１６小时－４８小时作了预处理从而交联所述红细胞同时将可裂解的所述红细胞留在血液学仪器中。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：F·J·卡弗，L·格拉尼耶，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US