提供了一种具有SEQ.ID.NO.：1序列的内源性短发夹RNA或其互补物，该内源性短发夹RNA通过特异性地抑制EID1来诱导造血细胞形成，并提供了其用途。还提供了一种含有SEQ.ID.NO.：1序列的表达构建体、载体和多核苷酸。SEQ.ID.NO.：1序列为5’-CAA?AUA?CUCACC?GUG?UUA?CA-3’。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种RNA分子，特别是一种内源性短发夹RNA以及该RNA通过抑制分 化-1的ElA样抑制子(在下文也称为EID1)诱导造血细胞形成的应用。本申请由中华人 民共和国科学技术部项目、国家自然基金、北京科学技术委员会以及长江学者项目资助。
技术介绍
骨髓间充质干细胞(本文也称为BMSC)和造血干细胞(本文称为HSC)的特征 均为具有通过自我更新来提供生物体一生所需要的分化细胞的能力。在培养体系中扩增 的所述 BMSC 由于不表达 CD45 和 CD34(G. Chamberlain, J. Fox, B. Ashton, J. Middleton, Stem Cells. 25,2739-49(2007).)而可以与HSC区分开来。由于在临床应用中，获取大 量的 HSC 仍是一个难题(B.P.Sorrentino，Nat Rev Immunol. 4 (11) :878-88 Q004) ·)，因 此，如果能将BMSC诱导分化成造血细胞，则BMSC就可替代HSC。已知骨髓间充质干细胞 (BMSC)是多能干细胞，其能够分化成骨细胞、内皮细胞、脂肪组织细胞、软骨细胞、肌肉细胞 和神经细胞。但是，BMSC能否在体内和体外分化成造血干细胞(HSC)仍存在争议(Y.Jiang 等人，Nature 418，41-49 (2002) ；Μ. Serafini 等人，J Exp Med. 204,129-39(2007)； Μ. F. Pittenger, Science. 284，143-7 (1999) ；K. W. Liechty 等人，Nat Med. 6，1282-6 (2000) 和 M. Angelopoulou 等人，Exp. Hematol 31,413-420 (2003))。在本专利技术中已经证明，当 BMSC 在含有多种细胞因子和生长因子的培养基中培养时，表达Flk-I (胎肝激酶1)而不表达 ⑶34和⑶31并且可以容易地进行扩增。表达Flk-I似乎使BMSC具有更为强大的分化潜能 (L.Liao，L Li, R. C. Zhao, Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 362 1107-12 (2007)) 这些Flk-Γ的细胞甚至可以被诱导分化成造血细胞，虽然发生频率很低(H. Guo等人，Exp. Hematol. 31 =650-658 (2003))。此外，对本领域技术人员而言，为使BMSC能够替代HSC，理 解调控BMSC自我更新和分化的分子机制非常重要。现有技术表明，miRNAs在不同造血细胞类型中表达有差异，且具有重要的调控作 用。例如，miR-181 与 B 淋巴细胞发育有关(C. Z.Chen 等人，Science 303，83-86 (2004).)， miR-142 和-223 与 T 淋巴细胞生成有关(S. H. Ramkissoon 等人，Leukemia Research, 30， 643-647 (2005).)，miR-221 和-222 与红细胞生成有关(N. Felli 等人，Proc Natl Acad Sci US A. 102,18081-18086(2005).), miR-223 与粒细胞分化有关(F. Fazi 等人，Cell, 123,819-831(2005).), miR-10, -126，_17 与巨核细胞生成有关(R. Garzon 等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 103，5078-5083 (2006).)。此外，已经显示一些 miRNAs (miR-128 和-181)抑制 HSC 分化(III，R. W. Georgantas 等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 104， 2750-2755 (2007).)。虽然已经发现一些miRNAs (如miR_130a和miR-10a)靴向作用于重 要的细胞分化转录因子 H0XA1 和 MAFB (R. Garzon 等人，Proc Natl AcadSci U S A. 103， 5078-5083 (2006))，但在BMSC和HSC早期发育阶段，一些miRNAs或其他小RNAs是否参与 调控自我更新和分化尚不清楚。实际上，对于BMSC命运决定的内部因素，我们知之甚少。近期，我们报道了人细胞的蛋白编码基因的内含子处生成的一类新的内源性shRNAs (Yin JQ 禾口 Zhao RC. Methods. 43 (2) :123-30(2007) Τ. Gu 等人(随稿)2008。见随稿)O
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种具有SEQ. ID. NO. :1序列，通过抑制EIDl来诱导 造血细胞生成的内源性短发夹RNA或其互补物。该SEQ. ID. NO. :1序列如下5’ -CAAAUA CUC ACC GUG UUA CA-3，。该SEQ. ID. NO. :1 序列主要包括核苷酸 5，-CAAAUA CUC A-3，。本专利技术的第二个目的是提供一种含有SEQ. ID. NO. :1序列的表达构建体。本专利技术的第三个目的是提供一种具有含有SEQ. ID. NO. :1序列表达构建体的载 体。本领域技术人员知道的所有载体均可应用于本专利技术。在本专利技术的一个具体实施 方案中，优选的载体是一种表达SEQ. ID.N0. :1序列的逆转录病毒质粒(逆转录病毒载体 pMSCV)。本专利技术的第四个目的是提供具有SEQ. ID. NO. :1序列的本专利技术的RNA或其互补物 的一种用来诱导造血细胞形成的应用，或者一种治疗罹患血细胞生成障碍的病人的方法， 或者一种治疗哺乳动物包括人类的血液疾病的方法。换言之，本专利技术还提供了一种具有SEQ. ID. NO. :1序列或SEQ. ID. NO. :2序列的内 源性短发夹RNA在制备用于治疗罹患哺乳动物包括人类中的造血障碍的患者的药物中的 用途。所述 SEQ. ID. NO. 2 序列为 5，-UGU AAC ACA AUG GUG AGU AUU UG-3，。多核苷酸的％同一性是由GAP (Needleman和mmsch，1970)分析(GCG程序)测定 的，空位产生罚分=5，空位延伸罚分=0.3。除非另外提及，询问序列的长度至多是23个 核苷酸。优选的，序列长度至少是10个核苷酸，并且GAP分析在最多23个核苷酸的区域上 比对两个序列。且GAP分析在最少10个核苷酸的区域比对两个序列。对于确定的多核苷酸，人们理解，高于上述那些数值的％同一性数值包括优选的 具体实施方案。因此，在可以实施的情况下，对最小的％同一性数值而言，优选本专利技术的多核苷酸 包含与相关的称为SEQ ID NO. :1的具有至少下述数值的同一性的序列至少40%，更优选 至少45 %，更优选至少50 %，更优选至少55 %，更优选至少60 %，更优选至少65 %，更优选 至少70 %，更优选至少75 %，更优选至少80 %，更优选至少85 %，更优选至少90 %，更优选 至少91 %，更优选至少92 %，更优选至少93 %，更优选至少94 %，更优选至少95 %，更优选 至少96 %，更本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种通过抑制ＥＩＤ１来特异性诱导造血细胞形成的具有ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．：１序列的内源性短发夹ＲＮＡ。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种通过抑制EIDl来特异性诱导造血细胞形成的具有SEQ. ID. NO. :1序列的内源 性短发夹RNA。2.一种根据权利要求1所述的内源性短发夹RNA的具有SEQ. ID. NO. :2序列的互补物。3.根据权利要求1所述的内源性短发夹RNA，其中所述SEQ.ID. NO. :1序列主要含有 5，-CAA AUA CUC A-3，的核酸。4.一种包含SEQ. ID. NO. :1序列的表达构建体，其中表达构建体具有SEQ. ID. NO. :3序列。5.—种包含SEQ. ID. NO. :1序列的表达构建体，其中表达构建体具有拥有SEQ. ID. NO. 4序列的互补物。6.一种含有具有包括SEQ. ID. NO. :1序列的表达构建体的表达构建体的载体。7.根据权利要求6所述的载体，其中载体是逆转录病毒质粒。8.一...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵春华，殷勤伟，边春景，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。