【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种基于t7核酸外切酶的单链dna特异高通量测序方法。
技术介绍
1、目前所有报道的单链dna高通量测序方法因为使用了变性处理之后产生的单链dna样品进行建库测序而得名，并非为了区分和检测样品中的单链dna。在建库之前将dna样品进行变性处理，使样品中的dna分子都变为单链dna，这样可以增加样品中单链dna的丰度，从而提高序列产量。但是这都是人为操作带来的，并不能反应样品中真正单链dna的情况。同时，这很大程度上也是由于我们对单链dna的忽视所造成的。
2、由于我们无法区分样品中的单链dna和双链dna，因此也就无法进一步了解它们的差异，如长短大小、碱基分布等情况。但是如果我们想更深入地了解样品中单链dna与双链dna的差异，那么在建库之前将样品dna变性就显得缺乏特异性了。
3、受益于循环肿瘤dna(circulating tumor dna，ctdna)检测与表征的进展，液体活检开始进入临床实践。实际上，ctdna包含单链dna(ctssdna)和双链dna(ctdsdna)。内...
【技术保护点】
1.一种富集单链核酸分子的方法，所述方法包括使用对双链DNA具有特异性水解活性的核酸外切酶处理的样品；
2.针对单链核酸分子的文库构建方法，所述方法包括在权利要求1所述方法所富集得到的单链核酸分子的两端连接核酸分子后，进行扩增的步骤；
3.如权利要求2所述文库构建方法，所述步骤1)、2)、3)的反应是在相同或各自不同的缓冲液中进行反应；
4.如权利要求2所述文库构建方法，所述加尾也即添加poly(dN)尾；
5.如权利要求2所述文库构建方法，所述5’末端磷酸化试剂包括PNK和/或ATP。
6.如权利要求2所述...
【技术特征摘要】
1.一种富集单链核酸分子的方法，所述方法包括使用对双链dna具有特异性水解活性的核酸外切酶处理的样品；
2.针对单链核酸分子的文库构建方法，所述方法包括在权利要求1所述方法所富集得到的单链核酸分子的两端连接核酸分子后，进行扩增的步骤；
3.如权利要求2所述文库构建方法，所述步骤1)、2)、3)的反应是在相同或各自不同的缓冲液中进行反应；
4.如权利要求2所述文库构建方法，所述加尾也即添加poly(dn)尾；
5.如权利要求2...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘德培，谢龑，马兰枝，陈厚早，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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