本发明专利技术首次公开了一种与EBV感染相关的鼻咽癌诊断和治疗的分子靶标hsa-miR203及其应用。该microRNA能准确反映EBV病毒在细胞及组织内保留与丢失的情况；进而能够用于EBV感染相关的鼻咽癌诊断，同时还发现hsa-miR203通过其调控的靶基因E2F3，CCNG1等明显抑制细胞的增殖和转化能力，可以用于治疗EBV感染相关的鼻咽癌。所以hsa-miR203具有重要的科研理论和临床应用价值。为EBV相关肿瘤的诊断、治疗或预后判断提供新的线索和依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子靶标
，涉及EBV感染相关的鼻咽癌诊断与治疗的分子靶标及其应用。
技术介绍
根据国际癌症研究署对致癌因子的分类标准，EB病毒被列在第一组致癌因子中。 EBV与中国南方高发的鼻咽癌(NPC)密切相关。在NPC组织中，几乎所有低分化肿瘤细胞中含有EBV基因组。EBV基因组的存在对相关肿瘤的发生发展具有重要作用。有学者认为肿瘤组织的环境如其中的病毒会引起瘤细胞miRNA的表达谱异常的改变，可以用来解释某些病毒与肿瘤高度相关的重要原因。关于EBV、miRNA与相关肿瘤的关系是否是这样，尚没有研究报道确证，由EBV直接影响的miRNA至今知之甚少。Hsa-miR203在NPC中的作用及其是否与EBV的作用相关及机制均未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与EBV感染相关的鼻咽癌诊断与治疗的分子标志物及其应用，一种与EBV感染相关的鼻咽癌诊断和治疗的分子靶标Hsa-miR203，序列为gUgBBBUgUUUBggBCCBCUBgo所述的分子靶标Hsa-miR203应用于制备与EBV感染相关的鼻咽癌诊断的试剂。所述的分子靶标Hsa-miR203应用于制备与EBV感染相关的鼻咽癌诊断的试剂盒。所述的分子靶标Hsa-miR203应用于制备与EBV感染相关的鼻咽癌治疗的试剂。本专利技术的研究过程如下(1)与293空白差异miRNA芯片筛选结果中选取下调明显的hsa-miR203 ;(2)分别提取四3，四3_空白，293-EBV，Lm(Lm细胞系是 293-EBV细胞系通过低密度培养，EBV丢失后细胞的混合克隆)；永生化人鼻咽上皮细胞 NP69细胞系，NP69-空白对照细胞系，EBV癌基因LMPl稳定转染的NP69-LMP1细胞系；鼻咽癌HONEl细胞，HONEl-空白对照细胞系，HONEl (EBV+)细胞系；鼻咽癌HNE2细胞系，HNE2-空白对照细胞系，HNE2 (EBV+)细胞系；鼻咽癌；5-8F空白对照细胞系；5_8F(EBV+)细胞系； 四例正常人EBV(-)淋巴细胞，四株EBV稳定感染的淋巴细胞系(LCL)，Raji (EBV+)细胞， B95-8 (EBV+)的Total RNA ； (3)分别提取11例正常鼻咽上皮组织与31例低分化鼻咽癌组织的Total RNA ； (4)用hsa-miR203特异性逆转录试剂盒将总RNA逆转为cDNA ； (5)用 hsa-miR203stem-loop 引物进行 Real-Time PCR 扩增；(6)对 hsa_miR203 的生物功能研究及其靶基因验证。通过对EBV稳定感染的人胚肾上皮细胞293-EBV及其对照进行microRNA芯片筛查发现hsa-miR203在^3_EBV中表达明显下调。Real-timePCR验证了 hsa_miR203在四3，四3_空白，293-EBV，Lm(Lm细胞系是^3_EBV细胞系通过低密度培养，EBV丢失后细胞的混合克隆)细胞系中的表达情况[图1]结果显示hsa-miR203在293-EBV细胞系中表达下降5. 1倍(ρ < 0. 01)，在EBV丢失的细胞系Lm中hsa_miR203表达几乎恢复EBV感染前表达水平(ρ <0.01) ；Real-time PCR验证了 hsa_miR203在四例正常人EBV (-)淋巴细胞(Lym EBV-)，四株EBV稳定感染后永生化的淋巴细胞系(EBV+) (E18，E14，E33，E20)， Raji (EBV+)细胞，B95-8 (EBV+)细胞中的表达情况[图2A]结果显示EBV稳定感染的淋巴细胞系hsa-miR203表达较^V阴性的淋巴细胞明显降低(ρ < 0. 01)。Real-time PCR 方法检测hsa-miR203与LMPl在正常人淋巴细胞(Lym) EBV (-)，四株EBV稳定感染的淋巴细胞系[E33，E20, E18，E14]，(EBV+)，B95-8 (EBV+)细胞中的表达情况[图2B]结果显示hsa-miR203表达量与LMPl的表达量呈负相关性(R = -0. 99) ；Real_timeqPCR检测永生化人鼻咽上皮细胞NP69细胞系，NP69-空白对照细胞系，EBV癌基因LMPl稳定转染的 NP69-LMP1细胞系；鼻咽癌HONEl细胞，HONEl-空白对照细胞系，HONEl (EBV+)细胞系；鼻咽癌HNE2细胞系，HNE2-空白对照细胞系，HNE2 (EBV+)细胞系；鼻咽癌5-8F细胞，5-8F空白对照细胞系；5-8F(EBV+)细胞系中hsa-miR203表达情况[图3A]，结果表明LMPl，EBV 能明显下调hsa-miR203的表达(ρ < 0. 01)。Real-time qPCR检测EBV阳性低分化鼻咽癌组织中hsa-miR203表达情况[图结果表明低分化鼻咽癌组织(低分化鼻咽癌中几乎百分之百EBV阳性)中hsa-miR203表达较正常对照平均下调4. 9倍(ρ < 0. 01)。随后对hsa-miR203的生物学功能进行研究结果表明hsa-miR203通过其调控的靶基因E2F3， CCNGl等明显抑制细胞的增殖和转化能力[图4，5，6]。综上hsa-miR203可以作为与EBV 感染相关的鼻咽癌诊断与治疗的分子靶标。本专利技术提供了一种与EBV感染相关的鼻咽癌诊断和治疗的分子靶标hsa-miR203 及其应用。该microRNA能准确反映EBV病毒在细胞及组织内保留与丢失的情况；进而能够用于EBV感染相关的鼻咽癌诊断，同时还发现hsa-miR203通过其调控的靶基因E2F3， CCNGl等明显抑制细胞的增殖和转化能力，可以用于治疗EBV感染相关的鼻咽癌。所以 hsa-miR203具有重要的科研理论和临床应用价值。为EBV相关肿瘤的诊断、治疗或预后判断提供新的线索和依据。附图说明图 1 :real-time PCR 方法检测 hsa_miR203 在四3，四3_ 空白，293-EBV，Lm，细胞中的表达结果图；可见hsa-miR203在^3-EBV中表达下调5. 1倍，在EBV丢失的Lm细胞中明显恢复表达；图2A :real-time PCR方法检测hsa_miR203在正常人淋巴细胞(Lym) ^V (-)，四株EBV稳定感染的B淋巴细胞系[E33，E20, E18，E14]，Raji (EBV+)，B95-8 (EBV+)细胞中的表达结果图；图2B :real-time PCR方法检测hsa_miR203与LMPl在正常人淋巴细胞(Lym) EBV (-)，四株 EBV 稳定感染的 B 淋巴细胞系[E33，E20，E18，E14]，(EBV+)，B95-8 (EBV+)细胞中的表达结果图；可见hsa-miR203表达量与LMPl的表达量呈负相关性；图3A :real-time PCR方法检测hsa_miR203在永生化人鼻咽上皮细胞NP69细胞系，NP69-空白对照细胞系，EBV癌基因LMPl稳定转染的NP69-LMP1细胞系；鼻咽癌HONEl 细胞，HONEl-空白对照细胞系，HONEl (EBV+)细胞系；鼻咽癌HNE2细胞系，HNE2-空白对照细胞系，HNE2 (E本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种与ＥＢＶ感染相关的鼻咽癌诊断和治疗的分子靶标Ｈｓａ－ｍｉＲ２０３，序列为：ｇｕｇａａａｕｇｕｕｕａｇｇａｃｃａｃｕａｇ。
【技术特征摘要】
1.一种与EBV感染相关的鼻咽癌诊断和治疗的分子靶标Hsa-miR203，序列为 gugaaauguuuaggaccacuago2.权利要求1所述的分子靶标Hsa-miR203应用于制备与EBV感染相关的鼻咽癌诊断的试剂。...
【专利技术属性】
技术研发人员：李桂源，俞海波，卢建红，赵莲，李小玲，唐海林，喻正源，李夏雨，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：43
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