一种辅酶Q**的新用途制造技术

一种辅酶Ｑ↓［１０］的新用途，用于制备治疗老年性痴呆症的药物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及将辅酶Q10(CoQ10)，用于制备治疗老年性痴呆症(Alzheimer’sdisease，AD)的药物。
技术介绍
老年性痴呆症是一种中枢神经退行性疾病。主要表现为在中年到老年期间有进行性记忆损伤以及智力丧失、记忆障碍、抽象思维障碍、语言行为能力失常、方向障碍等症状。从病理学考虑，老年性痴呆主要是由于脑区，包括皮层、海马、白质等的萎缩；多种神经元尤其是胆碱能神经元的原发性变性；β-淀粉样蛋白沉积斑和神经纤维缠结的出现与增多等。随着世界人口结构的老龄化、AD的发病率的增高，治疗AD病药物的研究越米越受到世界医约研究机构的重视。AD的发病机制非常复杂，病因至今尚不十分清楚。但大量研究表明它与细胞衰老、神经递质异常、神经生长因子功能低下以及多基因缺陷有关。在治疗药物方面，由于发病机理不明，缺乏有效的筛选模型，多属于对症治疗，目前AD治疗药物大致可分为拟胆碱药物、促进乙酰胆碱释放药物、生长因子促进剂、抗Aβ肽药物，以及脑功能改善药物等。至今还没有根治或逆转病程的理想药物。已开发的化学合成药物中，大多存在特异性差、毒副作用大、生物利用度低的缺点。因此，近年来对于使用毒副作用小的天然活性物质治疗AD的研究越来越受到重视。CoQ10(Coenzymle Q10)有结构式 CoQ10具有比较广泛的药理作用，能够改善缺血心肌氧利用率，具有心肌线粒体ATP合成赋活作用、心功能低下改善作用、心肌保护作用、抗醛甾酮作用等，已用于临床多年，以往在临床上主要用于急慢性肝炎、轻中度充血性心功能不全及癌症等辅助治疗。近年来，国内外对CoQ10的药理作用研究较为活跃，除用于临床的药理作用外，前人的研究还表明CoQ10作为抗氧剂具有延缓衰老作用，并能用于肾病的辅助治疗等，但都未涉及其对AD的治疗作用。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种CoQ10用于制备治疗AD药物的新用途。本专利技术人率先研究了CoQ10对AD模型动物脑内NGF功能的改善作用，研究了对AD模型动物脑内乙酰胆碱转移酶(ChAT)水平的影响以及对AD模型动物的空间识别障碍和学习记忆能力的影响。本专利技术人研究发现CoQ10对AD有很好的防治作用。研究发现CoQ10能显著提高AD动物大脑皮层ChAT活力；CoQ10能促进AD模型大鼠海马NGF的转录；CoQ10对AD模型动物能改善学习记忆行为。因此CoQ10能用于制备治疗老年性痴呆症的药物，且CoQ10毒副作用极小。具体实施例方式例1CoQ10对AD模型动物大脑皮层乙酰胆碱转移酶(ChAT)活力的提高作用动物SD大鼠方法1、给药方案CoQ10用1％CMC-Na混悬均匀。SD大鼠(250-300g)随机分为5组(每组8只)。分别为假损伤组(2ml1％CMC-Na)，模型组(2ml1％CMC-Na)，CoQ10高剂量组(40mg/kg)，CoQ10中剂量组(20mg/kg)，CoQ10低剂量组(10mg/kg)。于大鼠手术前2周给药，每日灌胃一次，直至断头处死。2、AD模型动物的制作采用兴奋性氨基酸(NMDA)单侧损伤SD大鼠Meynert基底核建立了AD动物模型，大鼠腹腔注射10％水合氯醛生理盐水溶液(3ml/kg)，10min 后进入麻醉状态。剪去颅顶切口区毛，水平固定于立体定向仪上。颅顶正中纵向切开，暴露颅骨，记录前囟坐标。选择前囟后0.9mm，中缝右侧2.6mm，用医用牙科钻垂直钻孔直至大脑皮层。以微量进样器垂直进针，深度为硬膜下6.8mm，停针2min后注入100nmol NMDA(PH7.4PBS，1μl)，注入时间为5min，停针5min后出针。创口以75％乙醇消毒，牙科水泥封孔，缝合皮肤，肌注双抗预防感染。假损伤组注射1μlPH7.4PBS。术后数日动物出现吞咽不能，需每日灌胃奶粉溶液。3、大鼠皮层胆碱乙酰转移酶(ChAT)活力测定将大鼠断头处死，立即取出全脑，冰上分离前脑皮层(frontal cortex)，测定皮层内ChAT活力。将皮层组织以PH7.4 10mmEDTA制成5％匀浆(W/V)，加入0.5％(V/V)TritonX-100以保证酶活全部释放。10,000g离心3min，取上清进行测定。酶反应底物包括(终浓度)0.2mmol/L乙酰CoA(250,000d.p.m)，300mmol/L NaCl，50mmol/L PB(PH7.4)，8mmol/L氯化胆碱，20mmol/L EDTA(PH7.4)，0.1mmol/L毒扁豆碱。乙酰辅酶A以未标记的乙酰辅酶A稀释。将2μl样品溶液与5μl底物溶液加入0.5ml Eppendorf管中，离心至管底使充分混合，37℃水浴反应15min。将酶反应管置于闪烁管中，以3mlPBS(10mM，PH7.4)冲洗出内容物。然后向闪烁管中加入2ml含10mg四苯硼钠的乙腈溶液和10ml甲苯闪烁液，轻轻振摇2min，Ach即被抽提至甲苯相中。静置10min使两相分离，在LS5000TD液闪仪下测定每分钟衰变数(d.p.m)。以Lowry法测定组织匀浆上清中蛋白质含量。结果AD模型动物连续给药4周，测定动物大脑皮层ChAT活力，结果见表1。结果表明，银杏内酯和CoQ10能显著提高AD动物大脑皮层ChAT活力。表1 CoQ10对AD模型动物大脑皮层ChAT活力的影响组别 动物数 ChAT活力(10-6d.p.m./mg蛋白)假损伤组85.99±0.32AD模型组82.22±0.16##CoQ10(40mg/kg) 89.37±0.29**CoQ10(20mg/kg) 810.51±0.21**CoQ10(10mg/kg) 810.66±0.37*N＝8，##P＜0.01vs假损伤组*P＜0.05vs AD模型组**P＜0.01vs AD模型组例2CoQ10对AD模型动物海马NGFmRNA水平的影响动物SD大鼠方法1、给药方案同实例12、AD模型动物的制作同实例13、大鼠海马总RNA的抽提大鼠断头，无菌操作取海马，加入1mlTrizol试剂匀浆，室温静置5min，15～30℃水浴5min，以使核蛋白复合物充分解离。加入0.2ml氯仿剧烈振摇片刻，15～30℃水浴3min，4℃离心12000g×15min。抽提上清于另管，加0.5ml异丙醇沉淀，15～30℃水浴10min，4℃离心12000g×10min，弃上清。用1ml75％冷乙醇洗涤，4℃离心7500g×5min，弃上清，于超净台中风干沉淀。用DEPC处理的水溶解沉淀，55～60℃水浴10min，以充分溶解。取适量稀释后测OD260和OD280，计算OD260/OD280比值及RNA浓度(OD260×33μg/ml×稀释倍数)。4、RNA逆转录合成cDNA2μg总RNA与1μl random primer(0.5μg/μl)加5μl M-mlv逆转录酶反应缓冲液5μl，70℃温浴5min，立即冷却至0℃，室温静置片刻，依次加入4×dNTP(10mmol/L)1.5μl，Rnasin RibonucleaseInhibitor(40U/μl)0.5μl及M-mlv逆转录酶(10U/μl)1μl，加DEPC处理水至终体积25μl，轻轻混匀。37℃水浴反应60min，反应结束后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种辅酶Ｑ↓［１０］的用途，其特征是用于制备治疗老年性痴呆症的药物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高向东，姚文兵，吴梧桐，李明，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]