预防或治疗肿瘤恶性变或肿瘤转移的组合物及方法技术

本发明专利技术公开了一种预防或治疗肿瘤恶性变或肿瘤转移的组合物及其方法，尤其是ＯＰＧ在这种预防或治疗肿瘤恶性变或肿瘤转移的药物中的应用。具体的说，本发明专利技术公开了施用一种有效剂量的ＯＰＧ融合蛋白和其变异体、片段和衍生物的药物组合物，可以预防或治疗肿瘤恶性变和肿瘤转移。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种预防或治疗肿瘤恶性变或肿瘤转移的药物组合物及其方法，尤其是OPG在这种预防或治疗肿瘤恶性变或肿瘤转移的药物中的应用。肿瘤转移是指恶性肿瘤细胞借助血道、淋巴道等途径，在非肿瘤原发部位的器官内形成继发瘤。目前发现的抗肿瘤转移剂，如维甲酰胺，能显著抑制大鼠前列腺癌细胞的生长和转移；常用的组合物(紫杉醇、顺铂、他莫昔等)对肿瘤细胞具有基本的作用，事实上对正常细胞具有很大的副作用。恶性变和转移是恶性肿瘤的重要特征。癌转移使局部病变扩散成全身多灶性分布的疾病。在临床诊断出原发肿瘤时，一半以上的患者已经产生远隔部位的癌转移，以至现有的技术、放疗和化疗手段常常在治疗癌症时，无能为力，导致患者的死亡。因此防止肿瘤的恶性变以及肿瘤的转移，是延长肿瘤患者的生命，提高手术成功率的重要途径。OPG是一种分泌型糖蛋白和缺乏跨膜结构域的TNF受体(TNFR)家族成员，OPG mRNA具有广泛的组织分布，在肝、心、肺、肾、胃、小肠、皮肤、脑、脊髓和骨骼中的表达水平较高。OPG是一种诱饵受体，其作用是结合或中和可溶性细胞核因子-κB受体活化因子配体及与基质细胞/成骨细胞结合的RANKL，从而阻断RANKL与破骨细胞系细胞表面的细胞核因子-κB受体活化因子结合。RANKL配体一旦与RANK受体结合就会刺激前体破骨细胞分化，及活化成熟的破骨细胞，引起骨吸收。体外实验证实，OPG抑制前体破骨细胞分化和成熟破骨细胞形成骨吸收陷窝，并诱导破骨细胞凋亡。此外，OPG还可抵抗促骨吸收因子(PTH、PGE2、1，25(OH)2D3、糖皮质激素和RANKL等)引起的骨吸收。在正常生理条件下，OPG控制骨骼的骨质疏松和骨硬化两种极端表型。目前为止，所有关于OPG的功能性和病理性研究都集中在对骨的研究上，对于OPG在直接预防和治疗除了骨以外其他部位的肿瘤恶性变及肿瘤转移的应用尚未见到任何相关报道。本专利技术的机理在于，应用受体与配体的理论，寻找可以直接抑制具有RANK受体的肿瘤的发生恶变及转移的多肽药物。多肽生长因子与细胞因子是分泌因子，它们通过与不同的表面结合受体进行特异性结合，从而表明细胞生长、分化、代谢等变化的不同情况。作为一类蛋白，受体RANK在其结构和信号传导模式方面有所不同。它们的特征在于具有与配体RANKL结合有关的细胞外结构域和传递适当细胞内信号的胞质结构域。受体表达方式确定那种细胞会应答一种特定的配体，而特定受体的结构确定由配体结合并诱导的细胞应答。正常细胞表面不表达特异性受体RANK，只有发生非典型性增生时，细胞表面产生少量的受体RANK。如果继续增殖，形成肿瘤细胞，这时产生大量的受体RANK。这种肿瘤细胞表面的受体RANK一旦与相应的配体RANKL结合后，随即发生肿瘤恶性变。OPG恰好能与该配体RANKL(此时可称为OPGL)优先结合，及时阻断肿瘤细胞的受体与配体的结合，阻止了该肿瘤细胞恶性变的发生。但是人体自身的OPG数量有限，只有当我们给患者注入一定剂量的OPG复合药物，才可以阻止大量肿瘤细胞恶性变的发生。恶性变的肿瘤细胞沿着血管和淋巴道，进入在非肿瘤原发部位的器官组织内，当与该组织内大量存在的RANKL配体结合时，继续恶性变，这时产生肿瘤转移现象。我们如果预先给患者注入大量的OPG，就会抢先与配体RANKL结合，从而阻断了肿瘤细胞在该器官内的转移。这就是OPG在预防和/或治疗肿瘤恶性变和肿瘤转移的药物中的应用。本专利技术提供的含有OPG及其OPG多肽的药物组合物对于淋巴结、骨、肝，肾、肾上腺、脑等肿瘤易转移的部位，都可以进行预防和治疗。“OPG”或“OPG多肽”指序列表中的氨基酸序列的多肽及相关多肽。相关多肽包括等位基因变异体，剪接变异体，片段，衍生物，替代、缺失和插入的变异体，融合多肽和非人类同源体。本专利技术还提供包括OPG融合蛋白和其变异体、片段和衍生物的药物组合物。本药物组合物包括不同的缓冲体系、PH和离子强度的稀释剂，还有一些常用的添加剂和填充剂，如抗氧化剂。该药物组合物可以采用本领域人员熟知的缓冲剂，也可以采用固体片剂的形式。总之，制剂中要包含OPG融合蛋白或其变异体、片段或衍生物，以及惰性成分。该药物组合物可以注射施用，也可以口服，或其他通用形式服用。本专利技术优选液态药物进行皮下或肌肉注射的方式。施用一定剂量的OPG融合多肽来预防或治疗肿瘤恶性变或肿瘤转移，有效量从0.1mg/kg到10mg/kg，优选从1mg/kg到10mg/kg，尤其优选3mg/kg到8mg/kg。本专利技术药物对上皮细胞肿瘤恶变和腺癌具有显著疗效。尤其对腺癌的预防和治疗具有极好的疗效。应用OPG及其相关多肽的药物预防和治疗肿瘤恶性变或肿瘤转移，不仅可以克服以往化学疗法的副作用，减轻病人的痛苦，而且提高了病人术后的治愈率。服用一定剂量OPG药物的病人，其肿瘤生长速度减慢，并且与没有服用该药的病人相比，用药病人癌细胞出现可测量生长量的时间比用药病人长2.5倍(5个月对2个月)。本专利技术以下的实施例包含于但并不限制本专利技术的内容及范围。实施例1受体RANK在细胞增生不同阶段的数量检测1、第一组，取成年未孕的雌性正常小鼠(北京大学医学部提供)的乳腺细胞，检测细胞表面受体RANK含量，用RANK受体单克隆抗体免疫组化的方法进行DBA显色，无色(0)，表明不存在RANK受体。2、第二组，取怀孕2周雌性小鼠的乳腺细胞，用同上1的方法DBA显色，阳性，淡黄色(+/-)，表明在乳腺细胞上有少量RANK受体。3、将第二组怀孕小鼠在乳腺部位皮下注射乳腺癌细胞，3周后取小鼠的乳腺细胞用同上1的方法检测，强阳性，棕黄色(++)，表明此时有多量RANK受体在乳腺细胞上生成。4、5周后取第二组小鼠的乳腺附近明显肿大的淋巴结，镜检有转移的肿瘤细胞出现，然后用同上1的方法检测，强阳性，深棕色(++++)，表明在该发生肿瘤转移的该部位已经生成大量的RANK受体。实施例2在小鼠模型中OPG对预防乳腺癌的作用取6-8周小鼠20只，将1*106个MDA-MB-435乳腺癌细胞静脉注射到小鼠的全身循环中，肿瘤接种后立即给小鼠静脉注射PBS缓冲液，然后给其中的10只小鼠注射含有有效剂量3mg/kg的OPG融合多肽药物混合物，每周3次，连续4周。通过对比，发现没有注射OPG药物的小鼠全部出现乳腺癌的症状，肿块直径1.5cm，而注射OPG药物的10只小鼠中只有4只有些微的肿瘤肿块，直径0.5cm，其余6只都没有明显肿瘤现象。实施例3在小鼠模型中OPG对治疗乳腺癌和防止肿瘤转移的作用对实施例2中的没有注射OPG的10只小鼠继续下列的实验。当注射乳腺癌细胞的4周后，10只小鼠的肿瘤已经有明显征兆，直径1.5cm，这时给其中的5只小鼠静脉注射含有有效剂量6mg/kg的OPG融合多肽药物混合物，每周4次，连续5周。通过对比，发现没有注射OPG药物的小鼠肿瘤明显继续扩大，而且在皮下有肿瘤转移发生，其中4只小鼠已经死去。而注射OPG药物的5只小鼠中，除了1只死去，其余4只小鼠肿瘤的生长有部分缓解，其中2只小鼠的肿块的生长完全缓解，并且没有肿瘤转移的发生。实施例4在小鼠模型中OPG对治疗前列腺癌中的作用按照实施例2的方法，取20只4-6周雄性裸鼠，皮下注射5*106个DU-145前列腺癌细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预防或治疗哺乳动物肿瘤恶性变或肿瘤转移的方法，它包含施用有效剂量的ＯＰＧ多肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：方健秋，
申请(专利权)人：方健秋，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]