一种治疗脊髓损伤的治疗剂制造技术

一种用于治疗脊髓损伤的治疗剂，所述治疗剂包含作为活性成分的神经胶质细胞，所述神经胶质细胞包括作为ＣＮＳ胶质细胞的Ⅰ型星形胶质细胞的祖细胞和Ⅱ型星形胶质细胞的祖细胞和０４祖细胞；和一种特征在于通过将有效剂量的上述治疗剂局部给药而治疗脊髓损伤的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种治疗脊髓损伤(SCI)的新方法和治疗剂。具体地说，本专利技术涉及通过向SCI忠者的脊髓的损伤部位局部注射CNS神经胶质细胞而治疗脊髓损伤的方法和活性成分是CNS神经胶质细胞的治疗剂。
技术介绍
脊髓损伤引起严重的症状截瘫(双下肢麻痹)或四肢瘫痪或甚至呼吸肌麻痹兼四肢瘫痪，因此轮椅和卧床不起的生活是不可避免的。至今仍未发现治疗SCI的有效疗法。由于瞬间的交通或运动事故而被剥夺手和脚自由的患者极渴望活动他或她自己的手和脚并通过恢复损伤的神经通路而再次行走。自19世纪末期以来，人们已相信哺乳动物CNS通路根本不能再生或者很少再生，即使有，也无明显的功能。但是，过去二十年的研究披露哺乳动物CNS通路的功能上的明显再生是可能的，因而否定了全世界认为的不能再生的观念。一种关于CNS环境的假说于最近出现并逐渐成为一个教条。它主张哺乳动物CNS的环境不允许轴突生长，因而必需使环境允许诱导轴突的再生。Schwab和他的合作者发现了CNS白质中与髓磷脂相关的生长抑制因子，并推测所述因子导致哺乳动物CNS不允许再生。事实上，他们报道由抗体导致的因子的中和诱导横切之后锥体束的再生，且该束的外延越过整个成年大鼠的损伤部位。除了他们的报道之外，还进行了多种尝试使CNS环境允许诱导成年大鼠脊髓的再生移植外周神经节、雪旺氏细胞、嗅觉鞘样细胞(OEC，对嗅神经和嗅球具有特异性的神经胶质细胞)。Cheng和他的合作者报道在除去成年大鼠脊髓节段之后通过在空的脊髓间隙中桥接神经节发生功能恢复(Science，273(26)，510(1996)]。Guest和他的合作者报道通过移植雪旺氏细胞，即PNS的神经胶质细胞而发生脊髓的再生。Li和他的合作者报道在部分横切颈上脊髓之后通过将培养的OEC移植到损伤部位发生锥体束的再生和功能恢复。但是通过这些尝试使环境允许再生的投射数量小且长度短(至多10mm)，且大部分是异常的，达不到适当的目标。因此功能恢复程度小，因而后肢不能完全支持体重。为了使SCI患者从轮椅上解放出来并用他们自己的脚再次行走，重要的是开发一种新能够重建类似于正常的神经投射的治疗方法。本专利技术的目的是提供一种新的在数量(投射神经元的数量)、长度(轴突的范围)、通路和末端方面实现恢复类似于正常的神经投射的方法，并使SCI患者能够再次行走。本专利技术还提供所述方法的治疗剂。预期本专利技术能减少患者和他们的家庭护理者的生理和心理负担，并节约沉重的医疗负担和社会福利成本。
技术实现思路
本专利技术基于我们的假设，即局部损伤症状而不是CNS的整体不允许环境导致轴突再生失败。所述假设与目前所持观点相当不同，但与我们的脊髓损伤研究的发现一致我们发现被横切的CNS通路中显著的再生自发地发生在小于一个月龄的大鼠被急速切割之后。在2-3个月龄的成年大鼠中，自发性再生不发生，推测因为其CNS组织比年幼动物坚硬，因而横切导致损伤部位的水肿。但是，当将胚胎大鼠脊髓组织移植到损伤部位时，类似于正常投射的轴索再生被诱导。因此，我们推测CNS环境不是整体不允许再生，而再生失败是由于局部条件恶化，即使生长轴突能够发现正确通路和目标的轴突指导线索紊乱导致的。似乎很有可能有多种因素使CNS环境允许破坏轴突指导线索的一致性，从而限制轴突再生的数量和范围，导致异常投射。根据我们的推测，我们尝试通过移植从新生大鼠脊髓收集的培养的混合的神经胶质细胞来改善损伤部位的局部条件，期望恢复损伤部位的微环境。在完全横切成年大鼠胸节段水平的脊髓之后将神经胶质细胞移植到损伤部位。移植的动物从完全截瘫恢复到几乎正常行走。再生的投射在数量、范围、通路和末端方面类似于正常。本专利技术通过对哺乳动物CNS再生的新认识来实现。与CNS神经胶质细胞妨碍轴突再生的常规观念完全相反，我们使用这种细胞成功地实现脊髓的神经修复。神经连接恢复和功能复原的程度大大高于根据常规观念进行尝试的程度。本专利技术提供一种通过将CNS神经胶质细胞移植到损伤的人或其它哺乳动物的脊髓而治疗脊髓损伤的方法。用于移植的细胞包括除了II型星形胶质细胞之外的培养的CNS神经胶质细胞中的至少一种。本专利技术还提供适用于所述治疗脊髓损伤的方法的治疗剂。所述治疗剂包含至少一种除了I型星形胶质细胞之外的培养的CNS神经胶质细胞作为活性成分，并可以包含任何医疗允许的赋形剂。本专利技术的进一步特征和优点将在以下“本专利技术的最佳实施方式”中变得清晰。本专利技术的最佳实施方式CNS神经胶质细胞由I型和II型星形胶质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞和它们的祖细胞组成。本专利技术的治疗剂包含至少一种除了I型星形胶质细胞之外的培养的CNS神经胶质细胞作为活性成分；它们可以是多于2种CNS神经胶质细胞的混合的细胞。所述的CNS神经胶质细胞优选包括所述三种细胞即I型星形胶质细胞的祖细胞、II型星形胶质细胞的祖细胞和O4祖细胞中的至少一种。最适宜的治疗剂主要包含II型星形胶质细胞的祖细胞，但可以包含I型星形胶质细胞、II型星形胶质细胞，少突胶质细胞和小胶质细胞。此外，它们可以包含雪旺氏细胞和嗅觉鞘样神经胶质。用于本专利技术的神经胶质细胞的来源无限制；可以使用自体的或同种异体的或异种的CNS神经胶质细胞。其中优选自体的细胞和同种异体的细胞。对于临床应用，可以从患者自身损伤的脊髓中收集自体的细胞。可以从流产的胚胎或脑/心脏死亡的尸体中收集同种异体的细胞。可以从猪、猴或某些其它哺乳动物的CNS中收集异种细胞。由于CNS是免疫学豁免部位，异种细胞可以在施用少量免疫抑制药物时存活。CNS神经胶质细胞的来源优选胚胎、新生儿或幼小的哺乳动物，但可以是年老的动物。优选但不是必须地从它们的脊髓中进行收集。任何其它CNS部分，例如大脑皮层、脑干或全脑可以是供应来源。来源于胚胎干细胞或神经干细胞的神经胶质细胞也可以是供应来源。神经干细胞分成成人型、胚胎型和神经上皮型。它们不仅可以从胚胎或新生儿中收集，也可以从成人中收集。神经胶质细胞可以通过常规的生物技术，使用刺激剂EGF、bFGF、CNTF、视黄酸或T3由这些来源制备[(Genes Dev.，10，3129-3140(1996)，Neuron，18，81-93(1997)，J.Neurosci.，18，3620-3629(1998))。任何细胞培养技术可以用于制备神经胶质细胞。例如，用蛋白酶(如胰蛋白酶)处理在无菌中切除的脊髓或大脑皮层以制备单细胞或小细胞群。然后将它们接种于陪替氏培养皿并在含有血清的培养基中于CO2恒温箱中培养一定的时间。在培养期间，神经元早早死亡而混合的神经胶质细胞存活。关于细胞培养，可以使用含有10-20％胎牛血清、F-10培养基或RPMI1640或某些其它培养基的Dulbecco’s MEM(DMEM)。培养基每3-4天更换，并保持在大约30-40℃下。过了几天，星形胶质细胞由于其旺盛的增殖潜能而变成占绝大多数的细胞，如果需要的话可以通过使用不含血清的培养基而增加少突胶质细胞。Percoll密度梯度法或粘合剂差异法有效地分离少突胶质细胞和星形胶质细胞。可以通过制备在培养基或适宜的缓冲溶液如PBS中的培养的神经胶质细胞的悬浮液而制备适于应用的本专利技术的治疗剂。细胞悬浮液的培养基可以包含医学上允许的添加剂，除非它们抑制细胞活性。应用的细胞密本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗脊髓损伤的治疗剂，所述治疗剂包含作为活性成分的神经胶质细胞，所述神经胶质细胞包括选自除了Ⅰ型星形胶质细胞之外的培养的ＣＮＳ神经胶质细胞的至少一种。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：川口三郎，西尾健资，
申请(专利权)人：川口三郎，西尾健资，
类型：发明
国别省市：JP[日本]