本发明专利技术公开了一种黄瓜专用复合抗重茬微生态制剂及其专用菌株与应用。本发明专利技术的复合抗重茬微生态制剂是以多粘类芽孢杆菌ＫＴＢ００２ ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２５６５和哈茨木霉ＫＴＦ００２ ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２５６３为活性成分的制剂。所述多粘类芽孢杆菌ＫＴＢ００２ ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２５６５的含量为５０亿ｃｆｕ／克制剂；所述哈茨木霉ＫＴＦ００２ ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２５６３的含量为５亿ｃｆｕ／克制剂。本发明专利技术的复合抗重茬微生态制剂高效、无毒、无污染，不仅可以预防和控制黄瓜重茬引起的多种病害，而且还可以提高黄瓜产量、改善品质和增强黄瓜植株的抗逆性，有利于减少化学农药的用量和在农产品上的残留，对保护人体健康和防止环境污染都极为重要。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种黄瓜专用复合抗重茬微生态制剂及其专用菌株与应用。
技术介绍
黄瓜富含多种维生素和蛋白质，具有补血开胃、增进食欲、美容等多种作用功效， 而且常年供应。因此，黄瓜的健康生长关系到食用者的身体健康。但是，近年来随着 农业产业结构的调整，保护地黄瓜种植面积在不断扩大，然而产量得不到明显提高， 而且有逐年下降的趋势，其主要原因是病害造成的，造成病害的原因之一是重茬种植。 黄瓜重茬病害主要有立枯猝倒病、霜霉病、枯萎病、灰霉病、根腐病等，随着重茬病害发生频率增高，病情加重，轻者减产20% 30% ，重者达50%以上，甚至绝收，成 为制约黄瓜产量、持量和效益的主要因素。此外，由于长期连作及农药的使用导致病 原菌产生抗药性，致病力增强，致使病害日趋蔓延和猖撅，从而给种植者带来严重的 经济损失。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种黄瓜专用复合抗重茬微生态制剂及其专用菌株与应用。 本专利技术所提供的复合抗重茬微生态制剂，是以多粘类芽孢杆菌KTB002 CGMCC No. 2565和哈茨木霉KTF002 CGMCC No. 2563为活性成分的制剂。本专利技术的复合抗重茬 微生态制剂能防治由于黄瓜重茬引起的黄瓜立枯猝倒病、霜霉病、枯萎病、灰霉病和 根腐病等。哈茨木霉(;T—rj'c力o^r/^力arw'朋咖)KTF002已于2008年06月27日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址北京市朝阳区大屯 路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC No.2563。多粘类 芽孢杆菌(/73e7n'力ac^^s / oJyyz y;ra) KTB002已于2008年06月27日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址北京市朝阳区大屯路， 中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC No.2565。其中，所述多粘类芽孢杆菌KTB002 CGMCC No. 2565和哈茨木霉KTF002 CGMCC No.2563的集落形成单位数目比为(10-30) : (1-10)。所述多粘类芽孢杆菌KTB002 CGMCC No. 2565的含量具体可为50亿cfu/克制剂；所述哈茨木霉KTF002 CGMCC No. 2563 的含量为5亿cfu /克制剂。本专利技术的复合抗重茬微生态制剂可以是固体或者液体制剂。可加入吸附剂将所述复合抗重茬微生态制剂制成固体制剂，所述吸附剂具体可为轻质碳酸钙和/或草炭。所 述固体制剂的粒度优选为0. 09mm。经田间试验，本专利技术的复合抗重茬微生态制剂能够有效控制黄瓜灰霉病、立枯病、根腐病和霜霉病等重茬病害的发生，防治效果均达到30%以上；且有促生增产的作用效果，能够明显提高黄瓜单株鲜重、单株结瓜数，增产效果显著，达到20%左右。此外，还可以改善黄瓜品质，增强抗逆性，因此可以在黄瓜种植区大面积推广应用。 本专利技术的复合抗重茬微生态制剂高效、无毒、无污染，不仅可以防治病害提高产量，而且可以减少化学农药的用量和在农产品上的残毒，对保护人体健康和防止环境污染都极为重要。所以本专利技术的复合抗重茬微生态制剂具有重大的现实意义及有广阔的发展前景。具体实施例方式实施例1、复合抗重茬微生态制剂的制备 1.控制黄瓜重茬病的菌株的获得从黄瓜重茬重病田的健康植株体内和根内分离筛选获得2株控制黄瓜重茬病的高 效菌株——哈茨木霉(7y/c力oo^7Z7a力arw'朋腳)编号是KTF002和多粘类芽孢杆菌 (pae/nT aci2i〃s pW7/ 7^3)编号是KTB002。控制黄瓜重茬病的高效菌株——哈茨木霉(7^'c力oofer/M力am'a/7鹏)KTF002和 多粘类芽孢杆菌(paew7 acj77ws po77/bjm) KTB002的分离和筛选方法如下 (1)分离哈茨木霉分离平板培养基马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，加水1000ml， 丙酸钠lg。然后分装克氏瓶或试管，置于灭菌锅内，在O. llMPa压力，121'C下灭菌 30min，冷却后制成斜面备用。多粘类芽孢杆菌分离平板培养基(牛肉膏蛋白胨琼脂培养基)牛肉膏 0. 3g/100ml，蛋白胨O. 5 g/100ml， NaCl 0.5 g/100ml，琼脂2 g/100ml。将琼脂加 热溶化后用Na0H或Hcl调pH值至7.0-7.2，然后分装克氏瓶或试管，置于灭菌锅内， 在0. llMPa压力下灭菌30rain，冷却后制成斜面备用。在黄瓜重茬重病田选择健康植株的根、茎、叶等组织，用蒸馏水冲洗干净，用70% 的酒精浸30s，然后用1 g/100ml NaC10处理15min，无菌水冲洗3次，最后一次无 菌水冲洗液涂营养琼脂(NA)平板，28 。C培养3-5d，检测表面灭菌是否彻底，每处 理3次重复。取经检验表面灭菌彻底的材料剪碎，取lg加适量无菌水研碎，将上清 液稀释到10—、振荡均匀(用于分离多粘类芽孢杆菌的上清液放入80。C的水中处理20 分钟)稀释到10—2，取0. lml分别接种到哈茨木霉分离平板培养基和多粘类芽孢杆菌分离平板培养基上，涂布均匀，置于26-28T恒温箱中培养3-5d，待单菌落长出后， 纯化，转管，保存。 (2)筛选分别接种黄瓜重茬病原菌(立枯猝倒病、霜霉病、枯萎病、灰霉病、根腐病的病 原菌)于PDA平板中央，将待测木霉和芽孢杆菌接种于平板四周，每皿在4个方位各 接种1株，重复3次，进行初筛；取拮抗性明显的菌株，再进行单株与病原菌对峙培 养，采取一边接木霉或芽孢杆菌， 一边接病原菌的对峙培养法进行复筛。结果得到2 株对黄瓜重茬病原菌具有拮抗作用的菌株，命名哈茨木霉KTF002和多粘类芽孢杆菌 KTB002。哈茨木霉KTF002在PSA平板上，菌落暗绿色，中部为密实产孢区，外缘也产孢， 菌丝较少，分生孢子梗丛束疏松，环状排列，主分枝呈树状，其上有众多次级分枝， 常2-3个一组，直角伸出，瓶梗短，基部变细，中间膨大，以大角度伸出，终极瓶梗 长而细，5个以内的瓶梗近似轮枝排列，产孢细胞大小为长7.50-12.50微米，宽 2.00-3.75微米，分生孢子呈球形或倒卵圆形，大小为(2.50-3.75) X (2.50-3.00) 微米，经形态学鉴定哈茨木霉KTF002为哈茨木霉(7yic力o^er/H3力3J^'朋咖)。提取多粘类芽孢杆菌KTB002的基因组DNA，分别以530F和1494R， 67F和1387R 为引物对进行PCR扩增，530F: 5' GTGCCAGCMGCCGCGG 3'，1494R: 5' GGYTACCTTGTTACGACTT 3';67F: 5' CAGGCCTAACACATGCAAGTC 3'，1387R: 5' GGGCGGTGATGTACAAGGC 3'。530F/1494R扩增出约lkb的片段，67F/1387R扩增出约1. 3kb的片段，将得到 的DNA纯化后，连接到pMD-18T载体上，转化大肠杆菌DH5 a ，蓝白斑筛选，得到含 有插入片段的转化子，进行fcoR I和历'/^III酶切验证，测序，拼接所得到的序列， BLAST比对结果表明KTB002与多粘类芽孢杆菌的16本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种复合抗重茬微生态制剂，是以多粘类芽孢杆菌ＫＴＢ００２ ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２５６５和哈茨木霉ＫＴＦ００２ ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２５６３为活性成分的制剂。
【技术特征摘要】
CN 2008-6-30 200810115893.91、一种复合抗重茬微生态制剂，是以多粘类芽孢杆菌KTB002 CGMCC No.2565和哈茨木霉KTF002 CGMCC No.2563为活性成分的制剂。2、 根据权利要求1所述微生态制剂，其特征在于所述多粘类芽孢杆菌KTB002 CGMCC No. 2565和哈茨木霉KTF002 CGMCC No. 2563的集落形成单位数目比为(10-30):(1-10)。3、 根据权利要求2所述微生态制剂，其特征在于所述多粘类芽孢杆菌KTB002 CGMCC No. 2565的芽孢含量为50...
【专利技术属性】
技术研发人员：王琦，张云龙，
申请(专利权)人：康坦生物技术山东有限公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]
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