一种SPF鸡肠道微生态制剂及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种SPF鸡肠道微生态制剂，活性成分含有：梭杆菌108CFU/g、真杆菌108CFU/g、消化球菌109CFU/g、双歧杆菌109CFU/g、乳酸杆菌109CFU/g、类杆菌108CFU/g和肠球菌109CFU/g。本发明专利技术同时还提供了上述微生态制剂的制备方法及应用，采集SPF鸡的肠道菌群，制备SPF鸡肠道微生态制剂，通过严格的环境净化技术保证菌群在SPF原种鸡肠道保真发酵，来改良祖代、父母代种鸡微生态体，结合环境控制与净化，达到提高鸡苗质量，达到少发病，少用药，用药就敏感奏效的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于畜禽微生物
，涉及一种复合微生物活性添加剂，具体涉及一种微生态制剂，还涉及所述微生态制剂的制备方法及应用。
技术介绍
随着畜牧业的迅猛发展，微生物产品的生产规模也迅速扩大，出现一定程度的产能过剩和过度使用，对粮食、能源、人工消耗过大，污染环境、威胁公共卫生等严重问题，在畜牧业向质量转型期亟待统筹解决。抗生素一度作为防治人畜细菌感染的法宝，大剂量滥用导致普遍而严重的抗药性、残留、毒副作用。我国从1990年代才在养殖业大规模使用抗生素，以“大复方”的“特效药”为特征，剂量不足和剂量过大并存；众多兽药企业产能过剩，恶性竞争，加之养殖场缺乏必要的病原学诊断和药敏试验，导致高抗药性和多重抗药性普遍存在，以肉鸡最为严重。随着《畜禽养殖污染防治条例》和《兽药处方化管理》的颁布实施，养殖场进一步规模化、规范化，兽药使用也归一到单药制剂的处方使用，加上传染病、食品药残一直以来的高压控制，各方的唯一出路就是——如何将目前的高抗药性、多重抗药性降低下来，与国际接轨，并兼顾疫病综合防控。主要方式主要有三种：1、调控抗生素的使用：根据抗药性机制，通过区域性抗药性监测，选择敏感药物统一同步轮换使用，可逐步降低各种抗生素的抗药性，由于不同抗药性机制回复敏感的难度不同，可能需要较长时期；2、使用抗生素替代产品：植酸酶和木聚糖酶是公认最为成熟的饲料用酶，用于弥补减少抗生素用药量造成的生产损失，保障动物正常生产性能；3、改造肠道菌群：消化道的各种共生微生物对于动物的消化道发育、免疫系统建立至关重要，以至于康白建议将宿主动物及其携带的微生物组构成的综合体称为“微生态体”，作为微生态学研究与应用的逻辑起点。微生态制剂，也叫活菌制剂或生菌剂，是指运用微生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经特殊工艺制成的制剂。目前微生态制剂己被应用于饲料、农业、医药保健和食品等各领域中。在饲料工业中广泛应用的有植物乳杆菌、枯草芽抱杆菌等，在食品中广泛应用的有乳酸菌、双歧杆菌、肠球菌和酵母菌等。近几年来，家禽家畜养殖业中微生态制剂已经在逐步地取代传统的添加剂。在未来，微生态制剂作为遵循生态环境自然循环法则的无公害制剂，将是添加剂行业的一种发展趋势。目前，微生态制剂基本等同于益生菌或少数益生菌组合，加之农业部对益生菌目录的限制，基本上局限于芽孢杆菌、乳酸菌和酵母菌，功能泛泛而谈，主要功夫下在扩大产能和提高发酵效率上了，微生态制剂存在主客不匹配、功能泛化、菌株过标准化的问题。
技术实现思路
针对现有技术中微生态制剂存在的上述益生菌种类少，功能泛化等问题，本专利技术提供了一种SPF鸡肠道微生态制剂，同时还提供了本专利技术微生态制剂的制备方法及应用。由于我国基本上自德国EW集团引进种鸡，考虑到德国肉鸡菌群对抗生素敏感性高及其与宿主鸡的匹配性，及SPF鸡的高安全性，本专利技术通过从德国引进SPF原种鸡，并在国内建立SPF原种鸡场，采集SPF鸡的肠道菌群，制备SPF鸡肠道微生态制剂，通过严格的环境净化技术保证菌群在SPF原种鸡肠道保真发酵，来改良祖代、父母代种鸡微生态体，结合环境控制与净化，达到提高鸡苗质量，达到少发病，少用药，用药就敏感奏效的目的。本专利技术一种SPF鸡肠道微生态制剂，活性成分含有：梭杆菌2×106～6×109CFU/g、真杆菌1×106～4×109CFU/g、消化球菌2×107～6×1010CFU/g、双歧杆菌2×107～8×1010CFU/g、乳酸杆菌1×107～8×1010CFU/g、类杆菌2×106～6×1010CFU/g和肠球菌3×107～8×1010CFU/g。其中，优选活性成分为：梭杆菌1×107～6×109CFU/g、真杆菌1×107～4×109CFU/g、消化球菌1×108～6×1010CFU/g、双歧杆菌1×108～8×1010CFU/g、乳酸杆菌1×108～8×1010CFU/g、类杆菌1×107～9×109CFU/g和肠球菌1×108～8×1010CFU/g。最优活性成分为：选梭杆菌1×108CFU/g、真杆菌1×108CFU/g、消化球菌1×109CFU/g、双歧杆菌1×109CFU/g、乳酸杆菌1×109CFU/g、类杆菌1×108CFU/g和肠球菌1×109CFU/g。上述SPF鸡肠道微生态制剂的制备方法为：将SPF鸡的肠道菌群快速过滤后，取滤液上层悬液，加入经过灭菌的培养基中，根据菌群中各菌种培养特性，分别在35～37℃培养24～72小时，测定其OD600值达到1.0以上，将各菌种培养液混合，再按比例加入复合包囊材料，充分搅拌，即得SPF鸡肠道微生态制剂。所述的各培养液菌数计数，分别达到107～1010CFU/g。所述的各菌种培养液混合时，菌数比例为：梭杆菌1份、真杆菌1份、消化球菌10份、双歧杆菌10份、乳酸杆菌10份、类杆菌1份和肠球菌10份。所述的复合包囊材料为按质量比1：1混合的明胶和阿拉伯胶。所述的SPF鸡为100日龄以上。本专利技术SPF鸡肠道微生态制剂的制备方法，具体包括以下步骤：1）采集SPF鸡肠道菌群：将100日龄以上健康SPF鸡的十二指肠、空肠、回肠和盲肠称重，加入5～10倍灭菌生理盐水，用无菌剪刀剪碎，混匀后无菌过滤，滤液静置10～60秒，取上层悬液；所述的步骤1）中过滤时采用2～10层无菌纱布过滤。2）菌群培养：a）配制分别用于选择性培养SPF鸡的肠道菌群中各菌种的培养基：梭杆菌（拉丁学名Clostridium）培养，采用FS培养基：EG琼脂1000ml，FS添加液10ml；所述的FS添加液制备方法为：结晶紫7mg，万古霉素5mg，硫酸新霉素30mg，溶于弱碱性水中，总量为10ml。真杆菌（拉丁学名Eubacterium）培养，采用ES培养基：EG琼脂1000ml，ES溶液50ml；所述的ES溶液制备方法为：丙酸钠15g，装入灭菌的烧瓶内，加入灭菌蒸馏水40ml，溶解后加入新霉素0.2g，粘杆菌素10mg，硫酸链霉素0.5g，灭菌的蒸馏水加至50ml。消化球菌（拉丁学名Peptococcus）培养，采用采用PS培养基：EG琼脂1000ml，苯乙醇2ml，PS溶液10ml；所述的PS溶液制备方法为：结晶紫7mg，粘杆菌素10mg，醋酸砣0.2g，混合，灭菌蒸馏水加至10ml。双歧杆菌（拉丁学名Bifidobacterium）培养，采用BDS培养基：EG琼脂1000ml，BDS添加液50ml；所述的BDS添加液制备方法为：牛黄胆酸钠2.5g，加入40ml的温水中使之溶解，然后加0.5%煌绿水溶液0.5ml，新霉素0.5g，再以10%NaOH调pH使液体呈透明的绿色为止，最后用精制水加至50ml。乳酸杆菌（拉丁学名Lactobacillus）培养，采用BLB培养基：NaCl5g，蛋白胨10g，琼脂20g，牛肝浸液940ml，葡萄糖1g，50%的蛋白胨水4ml，1%的苯胺蓝3ml，半胱氨酸500mg，羊血60ml。类杆菌（拉丁学名Bacteroides）培养，采用MRS培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉浸膏8g，酵母浸膏5g，K2HPO42g，MgSO4·7H2O2g,MnSO4·4H2O0.05g，柠檬酸铵2g，乙酸钠5g，吐本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种SPF鸡肠道微生态制剂，其特征在于，活性成分含有：梭杆菌2×106～6×109CFU/g、真杆菌1×106～4×109CFU/g、消化球菌2×107～6×1010CFU/g、双歧杆菌2×107～8×1010CFU/g、乳酸杆菌1×107～8×1010CFU/g、类杆菌2×106～6×1010CFU/g和肠球菌3×107～8×1010CFU/g。

【技术特征摘要】
1.一种SPF鸡肠道微生态制剂，其特征在于，活性成分含有：梭杆菌2×106～6×109CFU/g、真杆菌1×106～4×109CFU/g、消化球菌2×107～6×1010CFU/g、双歧杆菌2×107～8×1010CFU/g、乳酸杆菌1×107～8×1010CFU/g、类杆菌2×106～6×1010CFU/g和肠球菌3×107～8×1010CFU/g。2.根据权利要求1所述的SPF鸡肠道微生态制剂，其特征在于，所述的活性成分含有：梭杆菌1×108CFU/g、真杆菌1×108CFU/g、消化球菌1×109CFU/g、双歧杆菌1×109CFU/g、乳酸杆菌1×109CFU/g、类杆菌1×108CFU/g和肠球菌1×109CFU/g。3.一种权利要求1所述的SPF鸡肠道微生态制剂的制备方法，其特征在于：将SPF鸡的肠道菌群快速过滤后，取滤液上层悬液，加入经过灭菌的培养基中，根据菌群中各菌种培养特性，分别在35～37℃培养24～72小时，测定其OD600值达到1.0以上，将各菌种培养液混合，再按比例加入复合包囊材料，充分搅拌，即得SPF鸡肠道微生态制剂。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的各培养液混合时，菌数比例为梭杆菌1份、真杆菌1份、消化球菌10份、双歧杆菌10份、乳酸杆菌10份、类杆菌1份和肠球菌10份。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的复合包囊材料为按质量比1：1混合的明胶和阿拉伯胶；所述的SPF鸡为100日龄以上。6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤包括：1）采集SPF鸡肠道菌群：将100日龄以上的健康SPF鸡的十二指肠、空肠、回肠和盲肠，称重，加入5～10倍灭菌生理盐水，用无菌剪刀剪碎，混匀后无菌过滤，滤液静置10～60秒，取上层悬液；2）菌群培养：a）配制分别用于选择性培养SPF鸡的肠道菌群中各菌种的培养基；b）菌种培养：将步骤1）采集的上层悬液中含有的SPF鸡肠道菌群的菌种活化后，按占培养基1%的接种量加入各选择性培养基中,将滴种好的不同培养基分别在35～37℃培养24～72小时，测定其OD600值达到1.0以上，得各不同菌种的选择性培养液；3）制备微生态制剂：将上步各选择性培养液按比例混合，混合后培养液与明胶等复合包囊材料按质...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆延波，刘玉庆，黄保华，胡明，李璐璐，齐静，张庆，张印，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37