一种脾提取物、其制备方法及其用途技术

本发明专利技术公开了一种从除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取制备的脾提取物，将哺乳动物脾脏组织经去脂肪、匀浆、冻融破碎、沉淀、超滤等步骤制得脾提取物，含有如下组分：多肽、游离氨基酸、核酸、总糖，所有组分分子量均小于１００００道尔顿；所述脾提取物在制备治疗原发性和继发性细胞免疫缺陷病（如湿疹、血小板减少、多次感染综合症等）、呼吸道及肺部感染、习惯性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、复发性口疮等疾病，在制备治疗放化疗引起的白细胞减少症，白血病、再生性障碍贫血、淋巴瘤及其他恶性肿瘤、改善肿瘤患者恶变质、病毒感染、改善术后或重症患者身体虚弱时辅助用药等药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种脾提取物、其制备方法及其用途，具体地说，涉及一种由从除人以外的哺乳动物脾脏组织中经提取分离制备的脾提取物、其制备方法及用途，属于药物制剂领域。
技术介绍
众所周知，哺乳动物体内有不少人体所需的各种营养成分及活性成分，进而有不少针对从哺乳动物的心脏、肝脏及肌肉组织中提取活性多肽的报道。而脾脏是哺乳动物的外周免疫器官，也是动物体内代谢最为旺盛的器官之一，由于其中含有丰富的细胞基本营养成分及细胞因子，特别是促进细胞代谢的活性成分如多肽类物质、游离氨基酸、核酸、各种糖类，因而受到研究者的广泛关注。国外对脾提取物的研究工作较早，目前已有用于化妆品的商品，如crydermine及增强免疫功能的保健品，如spleenP.M.G、IM-Encap、Gold-speen 500等。申请号03133572.1，专利技术名称为复合生物活性胶囊及其制备方法，公开了一种复合生物活性胶囊，选用新生牛为初生十四小时之内的小牛，取其脑、胸腺、肝、脾；选用怀孕二个月左右的绵羊，取其胚胎及胎盘，采用现代生物工程技术，从其中提取脑蛋白水解物、胸腺肽、转移因子、胎盘肽、促肝细胞生成素等有效成份进行科学配伍。该专利技术采用多种原料分别提取的生物活性成份，可根据不同对象按不同配料比例复合成胶囊或片剂；专利技术所述的复合生物活性胶囊，能调解人体生理机能，提高免疫力，延缓衰老，提高记忆力，抗疲劳，美容养颜，又能治疗和预防肝、脾、肾及心脏血管疾病的发生。《肉类工业》2002年2期的“猪脾多肽的制备工艺研究”公开了猪脾脏的制备工艺，工艺流程为脾脏--＞去脂肪--＞匀浆--＞脱脂--＞酶解--＞终止反应--＞过滤--＞吸附脱色--＞凝胶层析--＞真空干燥--＞成品。具体工艺为取一定量的新鲜猪脾脏，去掉大块的外表脂肪、表皮及皮下筋膜，加1∶1的10℃蒸溜水，用组织捣碎机匀浆，按4∶1的比例加正已烷或乙醚在常温下密闭抽提2h脱脂，分离得到脱脂的脾脏匀浆；将400ml脾匀浆液，置于恒温水浴锅中，调节温度至(50±2)℃，以Ca(OH)2乳液调节溶液至酶最适pH值，加入30g酶，反应一段时间后，以1∶1HCl调pH至中性，同时升温至80℃保持15min，使酶钝化中止反应，沙布过滤，滤液加5％的活性炭吸附脱色，抽滤，过G-15萄聚糖凝胶柱，收集范围的溶液，50℃真空浓缩干燥，得脾脏多肽成品。该工艺采用的是酶解法，通过酶解脾脏中蛋白质来获得多肽，所得多肽成分组成易变动，且并非原来天然存在的多肽。目前，困扰人类健康的疾病多是由于机体免疫机能下降造成的，所以应不断研究和开发一些能提高人体免疫能力的药物；以提高和改善机体免疫功能，激活和增强机体非特异性免疫功能，提高人体的抗疾病能力。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种脾提取物，所述脾提取物是由除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取制备的。本专利技术的另一目的在于提供上述脾提取物的制备方法。本专利技术的再一目的是提供上述脾提取物在制备治疗原发性和继发性细胞免疫缺陷病(如湿疹、血小板减少、多次感染综合症等)、呼吸道及肺部感染、习惯性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、复发性口疮等疾病治疗药物方面的用途，以及在制备治疗放化疗引起的白细胞减少症，自血病、再生性障碍贫血、淋巴瘤及其他恶性肿瘤、改善肿瘤患者恶变质、病毒感染、改善术后或重症患者身体虚弱时辅助使用药物方面的用途。本专利技术所述的脾提取物，为从除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取而成，如下重量份比的组分多肽10～100份、游离氨基酸20～80份、核酸1～30份、总糖0～4份，所有组分分子量均小于10000道尔；该提取物与磺基水杨酸反应，混匀，不发生混浊；与双缩脲反应，显蓝紫色至紫红色；与茚三酮反应，显蓝紫色；在260～270nm波长处有吸收；苯酚—硫酸试剂反应为阳性。本专利技术所述的脾提取物优选含有如下重量份比的组分多肽20～80份、游离氨基酸30～60份、核酸5～20份、总糖1～4份，所有组分分子量均小于8000道尔顿；最优选含有多肽32～48份、游离氨基酸40～60份、核酸8～12份、总糖1～3份，所有组分分子量均小于6000道尔顿。本专利技术所述的脾提取物中游离氨基酸经测定有下述氨基酸门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、精氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸等。本专利技术所述的哺乳动物可为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔等。从猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔等新鲜健康脾脏组织中均可提取本专利技术所述的脾提取物。从生产成本、生产工艺、产品质量稳定性、临床疗效等因素考虑，上述哺乳动物脑组织优选小牛脾脏组织作为脾提取物的生产原料。本专利技术所述的脾提取物为从除人以外的哺乳动物脾脏组织通过去脂肪、匀浆、冻融破碎、沉淀、超滤等步骤制得脾提取物，其分子量可通过选用截留分子量为10000或10000以下不同截留分子量的超滤膜来控制。本专利技术所述的脾提取物的制备方法，包括如下步骤A)取经过预处理的哺乳动物脾脏，加水或生理盐水匀浆，调节pH值，反复冻融后经1-3次离心，取上清液过滤得清液I；B)清液I调节pH值；或者清液I调节pH值后加热；然后进行离心，取上清液过滤，得清液II；C)清液II冷冻融化后再过滤，取清夜超滤得脾提取物。其中，所述的预处理是将新鲜的健康脾脏的杂质、脂肪、表皮及皮下筋膜预先处理掉。匀浆后调pH值至3.0～5.0，冻融次数为1～9次，通过反复冻融使细胞破碎，使细胞内活性多肽、游离氨基酸、核酸、总糖等充分释放。本专利技术的制备方法中采用冻融方法，快速简便地从脑组织中提取多肽、氨基酸、核酸，该方法具有收率高，操作时间短，成本低的特点。离心条件为3000～4000转/分，离心时间为15～30分钟。离心过滤后，调pH值为6.0～7.5。为了达到更好的离心效果，在一次离心过滤后，还可进行一次加热冷却，再离心过滤。具体地说，本专利技术所述的脾提取物的制备方法，包括如下步骤A)取新鲜健康脾脏，剔除杂质及脂肪组织，加0.5～2.5倍脾脏重量的注射用水或生理盐水，匀浆，调节pH值3.0～5.0，反复冻融1～9次，最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为3000～4000转/分，离心时间为15～30分钟，取上清液过滤，得清液I；B)清液I调节pH值6.0～7.5后离心；或者调节pH值6.0～7.5并加热，然后冷却至常温后离心，离心条件为3000～4000转/分，离心时间为15～30分钟，取上清液过滤，得清液II；C)清液II冷冻后融化，过滤，清液用超滤膜超滤1～2次，超滤液为脾提取物。所述的冻融为在-15℃以下冷冻，冻实后在10～40℃下融化。上述B)步骤中，离心过滤后，加热至50℃～90℃，加热时间为15～30分钟；冷却至10～40℃。更为优选的，本专利技术所述的脾提取物的制备方法，包括如下步骤A)取新鲜健康脾脏，剔除杂质及脂肪组织，加1～2倍脾脏重量注射用水或生理盐水，匀浆，调节pH值3.8～4.2，在-15℃～-25℃冷冻，冻实后在10～40℃下融化，重复冻融2～4次；最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为3500～4000转/分，离心时间为15～20分钟，取上清液过滤，得清液I；B)清液I调节pH值6.5～7.0后离心或调节pH值6.0～7.5并加热，加热60℃～80℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脾提取物，其特征在于，所述的脾提取物为从除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取而成，含有如下重量份比的组分：多肽１０～１００份、游离氨基酸２０～８０份、核酸１～３０份、总糖０～４份，所有组分分子量均小于１００００道尔顿。

【技术特征摘要】
CN 2005-2-2 20051000530711.一种脾提取物，其特征在于，所述的脾提取物为从除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取而成，含有如下重量份比的组分多肽10～100份、游离氨基酸20～80份、核酸1～30份、总糖0～4份，所有组分分子量均小于10000道尔顿。2.根据权利要求1所述的脾提取物，其特征在于，所述的脾提取物含有如下重量份比的组分多肽20～80份、游离氨基酸30～60份、核酸5～20份、总糖1～4份，所有组分分子量均小于8000道尔顿；所述的脾提取物优选含有如下组分多肽32～48份、游离氨基酸40～60份、核酸8～12份、总糖1～3份，所有组分分子量均小于6000道尔顿。3.根据权利要求1或2所述的脾提取物，其特征在于，所述的脾提取物为从除人以外的哺乳动物脾脏组织通过去脂肪、匀浆、冻融破碎、沉淀、超滤等步骤提取而成。4.根据权利要求1或2所述的脾提取物，其特征在于，所述的哺乳动物为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔中任意一种。5.权利要求1～4所述的脾提取物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤A)取经过预处理的哺乳动物脾脏，加水或生理盐水匀浆，调节pH值，反复冻融后经1-3次离心，取上清液过滤得清液I；B)清液I调节pH值离心，取上清液过滤得清液II；或者清液I调节pH值后加热，离心，取上清液过滤得清液II；C)清液II冷冻融化后再过滤，取清液超滤得脾提取物。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述方法中A步骤的匀浆后调pH值至3.0～5.0，冻融次数为1～9次，离心条件为3000～4000转/分，离心时间为15～30分钟；B步骤的调pH值为6.0～7.5，离心条件为3000～4000转/分，离心时间为15～30分钟；C步骤中用截留分子量10000以下的超滤膜超滤。7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤A)取新鲜健康脾脏，剔除杂质及脂肪组织，加0.5～2.5倍脾脏重量的注射用水或生...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭智华，
申请(专利权)人：多布瑞菲医药有限公司，
类型：发明
国别省市：22[中国|吉林]