神经营养因子缓释微球及其制备方法技术

本发明专利技术公开了神经营养因子缓释微球及其制备方法，神经营养因子缓释微球是用下述方法制成：（１）将神经营养因子／白蛋白混合物溶于去离子水中；（２）将天然高分子囊材或半合成高分子囊材或合成高分子囊材溶于一氯甲烷中；（３）将步骤（１）制成的溶液加到步骤（２）制成的溶液中，冰浴条件，超声，制成油包水型乳液；（４）将油包水型乳液加到聚乙烯醇水溶液中，冰浴条件，搅拌，形成水包油包水型复乳液；（５）常压下，磁力搅拌，挥发有机溶剂，离心收集固化微球，水洗，干燥，制成，神经营养因子缓释微球能够维持包载的蛋白类药物在较长的时期活性不变；能够配制成注射剂，可以准确地进行脑内注射，能够持续或脉冲式释放有生物活性蛋白。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种缓释微球及其制备方法。
技术介绍
中枢神经系统疾病是指中枢神经系统的不同部位特殊类型神经元的逐渐丧失或者损伤而导致的以神经系统损害为主要临床表现的一类疾病，譬如老年性痴呆，老年性痴呆是因为基底前脑胆碱能神经元的溃变死亡导致病人出现的以进行性认知障碍和记忆能力的损害，并伴有不同程度的运动、语言和人格等多方面的异常。基底前脑胆碱能神经元为神经营养因子敏感神经元，它们的细胞膜上有P75NTF受体和TrkA受体，神经营养因子与这些受体结合后，能提高胆碱能神经元的胆碱乙酰转移酶的活性，从而提高神经细胞的存活能力，发挥正常的生理功能；将神经营养因子向侧脑室灌注，能够使溃变的胆碱能神经元存活并且促进神经元再生新的突触。此外，与帕金森病、亨廷顿病密切相关的多巴胺能神经元以及中枢神经系统其他多种类型的神经元都是神经营养因子敏感神经元。神经营养因子已在临床上成功地应用于老年性痴呆、帕金森病以及脑损伤等中枢神经系统疾病的实验性治疗。现代生物技术使大规模生产高纯度的重组生长因子成为可能，现在人们可以用各种神经营养因子用于中枢神经系统疾病的治疗。但是，神经营养因子应用于病人还有一些困难①多数神经营养因子的生物半衰期往往较短，故需要反复大剂量应用，因此增加了治疗的成本；②多数神经营养因子是大分子物质，较难透过血脑屏障，必须长期的侧脑室埋管灌注，长期的侧脑室埋管灌注能够引起病人剧烈的背痛和体重的明显减轻等副作用，并且大大增加了颅内感染的机会；③许多机体组织细胞也存在神经营养因子的受体，因此全身应用神经营养因子将引起广泛的毒性反应。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的不足，提供一种生物半衰期长、能够配制成注射液的神经营养因子缓释微球。本专利技术的第二个目的是提供一种神经营养因子缓释微球的制备方法。本专利技术的技术方案概述如下一种神经营养因子缓释微球，是用下述方法制成(1)将5mg-15mg质量比为1/2000-1/50的神经营养因子/白蛋白混合物溶于50-200μl去离子水中；(2)将50mg-300mg天然高分子囊材或半合成高分子囊材或合成高分子囊材溶于3-10ml一氯甲烷或二氯甲烷或三氯甲烷或体积比为5/1-3/2的一氯甲烷/丙酮或体积比为5/1-3/2的二氯甲烷/丙酮或体积比为5/1-3/2的三氯甲烷/丙酮中； (3)将步骤(1)制成的溶液加到步骤(2)制成的溶液中，冰浴条件，在功率为20-40W的条件下超声0.5-2min或2000-4000rpm匀速搅拌0.5-3min，制成油包水型乳液；(4)将所述油包水型乳液加到20-35ml质量百分比为1％-10％的聚乙烯醇水溶液中，冰浴条件，800-1500rpm搅拌3-10min，形成水包油包水型复乳液；(5)在常压下，磁力搅拌2-5h，挥发有机溶剂，将固化的微球通过离心收集，用去离子水清洗1-4遍，冷冻干燥20-36h，即制成一种神经营养因子缓释微球。所述神经营养因子为重组人的神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养素-3、神经营养素-4/5、神经营养素-6、睫状神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子、白细胞介素、表皮生长因子、血管内皮细胞生长因子或血小板源性生长因子之一。所述天然高分子囊材为明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠或壳聚糖之一。所述半合成高分子囊材为羧甲基纤维素钠、醋酸纤维素酞酸酯、邻苯二甲酸醋酸纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素或羟丙甲基纤维素之一。所述合成高分子囊材为聚乳酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚己内酯、聚氨基酸、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物或聚乳酸-聚乙烯醇共聚物之一，这些聚合物的分子量没什么特殊要求，可用的范围很宽。一种神经营养因子缓释微球的制备方法，是由下述步骤组成(1)将5mg-15mg质量比为1/2000-1/50的神经营养因子/白蛋白混合物溶于50-200μl去离子水中；(2)将50-300mg天然高分子囊材或半合成高分子囊材或合成高分子囊材溶于3-10ml一氯甲烷或二氯甲烷或三氯甲烷或体积比为5/1-3/2的一氯甲烷/丙酮或体积比为5/1-3/2的二氯甲烷/丙酮或体积比为5/1-3/2的三氯甲烷/丙酮中；(3)将步骤(1)制成的溶液加到步骤(2)制成的溶液中，冰浴条件，在功率为20-40W的条件下超声0.5-2min或2000-4000rpm匀速搅拌0.5-3min，制成油包水型乳液；(4)将所述油包水型乳液加到20-35ml质量百分比为1％-10％的聚乙烯醇水溶液中，冰浴条件，800-1500rpm搅拌3-10min，形成水包油包水型复乳液；(5)在常压下，磁力搅拌2-5h，挥发有机溶剂，将固化的微球通过离心收集，用去离子水清洗1-4遍，冷冻干燥20-36h，即制成一种神经营养因子缓释微球。所述神经营养因子为重组人的神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养素-3、神经营养素-4/5、神经营养素-6、睫状神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子、白细胞介素、表皮生长因子、血管内皮细胞生长因子或血小板源性生长因子之一。所述天然高分子囊材为明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠或壳聚糖之一。所述半合成高分子囊材为羧甲基纤维素钠、醋酸纤维素酞酸酯、邻苯二甲酸醋酸纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素或羟丙甲基纤维素之一。所述合成高分子囊材为聚乳酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚己内酯、聚氨基酸、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物或聚乳酸-聚乙烯醇共聚物之一。本专利技术的优点是①微球能够维持包载的蛋白类药物在较长的时期活性不变；②微球能够配制成注射剂，可以准确地进行脑内注射，避免对周围脑组织的损伤，同时起到药物的靶向给药作用，从而大大方便了临床上的应用；③微球能够持续或脉冲式释放有生物活性蛋白几周甚至几个月，避免了生物半衰期较短的蛋白药物要多次应用给病人带来的不便。因此，神经营养因子缓释微球给中枢神经系统疾病的治疗带来新的希望。附图说明图1为FITC标记的rhNGF-PLGA缓释微球在荧光显微镜下的照片(200×)；图2为FITC标记的rhNGF-PLGA缓释微球共聚焦激光显微镜下的照片；图3为实例1制备的rhNGF-PLGA微球进行体外释放实验相差显微镜下的照片，A为.培养基中加入rhNGF(30ng/ml)(200×)；B.为培养基中加入从rhNGF微球中释放的rhNGF(30ng/ml)(200×)；C为.培养基中加入不含NGF的白蛋白微球的释放释放液(400×)。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明实施例1一种神经营养因子缓释微球，是用下述方法制成(1)将10mg质量比为1/2000的重组人的神经生长因子(rhNGF)/白蛋白混合物溶于100μl去离子水中；(2)将100mg聚乳酸-聚乙烯醇共聚物(PLGA)溶于4ml体积比为3∶1的二氯甲烷/丙酮中；(3)将步骤(1)制成的溶液加到步骤(2)制成的溶液中，冰浴条件，在功率为20W的条件下超声1min，制成油包水型乳液；(4)将所述油包水型乳液加到25ml质量百分比为1％的聚乙烯醇水溶液中，冰浴条件，1000rpm搅拌5min，形成水包油包水型复乳液；(5)在常压下，磁力搅拌3h，挥发有机溶剂，将固化的微球通过离心(1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种神经营养因子缓释微球，其特征是用下述方法制成：（１）将５ｍｇ－１５ｍｇ质量比为１／２０００－１／５０的神经营养因子／白蛋白混合物溶于５０－２００μｌ去离子水中；（２）将５０ｍｇ－３００ｍｇ天然高分子囊材或半合成高分子囊材 或合成高分子囊材溶于３－１０ｍｌ一氯甲烷或二氯甲烷或三氯甲烷或体积比为５／１－３／２的一氯甲烷／丙酮或体积比为５／１－３／２的二氯甲烷／丙酮或体积比为５／１－３／２的三氯甲烷／丙酮中；（３）将步骤（１）制成的溶液加到步骤（２）制成的 溶液中，冰浴条件，在功率为２０－４０Ｗ的条件下超声０．５－２ｍｉｎ或２０００－４０００ｒｐｍ匀速搅拌０．５－３ｍｉｎ，制成油包水型乳液；（４）将所述油包水型乳液加到２０－３５ｍｌ质量百分比为１％－１０％的聚乙烯醇水溶液中，冰浴条件， ８００－１５００ｒｐｍ搅拌３－１０ｍｉｎ，形成水包油包水型复乳液；（５）在常压下，磁力搅拌２－５ｈ，挥发有机溶剂，将固化的微球通过离心收集，用去离子水清洗１－４遍，冷冻干燥２０－３６ｈ，即制成一种神经营养因子缓释微球。

【技术特征摘要】
1.一种神经营养因子缓释微球，其特征是用下述方法制成(1)将5mg-15mg质量比为1/2000-1/50的神经营养因子/白蛋白混合物溶于50-200μl去离子水中；(2)将50mg-300mg天然高分子囊材或半合成高分子囊材或合成高分子囊材溶于3-10ml一氯甲烷或二氯甲烷或三氯甲烷或体积比为5/1-3/2的一氯甲烷/丙酮或体积比为5/1-3/2的二氯甲烷/丙酮或体积比为5/1-3/2的三氯甲烷/丙酮中；(3)将步骤(1)制成的溶液加到步骤(2)制成的溶液中，冰浴条件，在功率为20-40W的条件下超声0.5-2min或2000-4000rpm匀速搅拌0.5-3min，制成油包水型乳液；(4)将所述油包水型乳液加到20-35ml质量百分比为1％-10％的聚乙烯醇水溶液中，冰浴条件，800-1500rpm搅拌3-10min，形成水包油包水型复乳液；(5)在常压下，磁力搅拌2-5h，挥发有机溶剂，将固化的微球通过离心收集，用去离子水清洗1-4遍，冷冻干燥20-36h，即制成一种神经营养因子缓释微球。2.根据权利要求1所述的神经营养因子缓释微球，其特征是所述神经营养因子为重组人的神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养素-3、神经营养素-4/5、神经营养素-6、睫状神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子、白细胞介素、表皮生长因子、血管内皮细胞生长因子或血小板源性生长因子之一。3.根据权利要求1所述的一种神经营养因子缓释微球，其特征是所述天然高分子囊材为明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠或壳聚糖之一。4.根据权利要求1所述的一种神经营养因子缓释微球，其特征是所述半合成高分子囊材为羧甲基纤维素钠、醋酸纤维素酞酸酯、邻苯二甲酸醋酸纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素或羟丙甲基纤维素之一。5.根据权利要求1所述的一种神经营养因子缓释微球，其特征是所述合成高分子囊材为聚乳酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚己内酯、聚氨基酸、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物或聚乳酸-聚乙烯醇共聚物之一。6.一种神经营养因...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋存先，谷海刚，
申请(专利权)人：中国医学科学院生物医学工程研究所，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]