一种载血管内皮生长因子和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂及其制备方法技术

一种载血管内皮生长因子和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂及其制备方法，属于药物缓释微球技术领域。本发明专利技术以乳化交联法制备的海藻酸钙为核心球，外层利用层层自组装原理依次包覆壳聚糖、海藻酸钠和壳聚糖形成粒径为十微米级的多层核壳型载药微球，其中核心的海藻酸钙负载血管内皮生长因子(VEGF)，外层的壳聚糖负载万古霉素，兼具促进血管生成和抗感染两种潜能。本发明专利技术所述微球呈圆球状，分散性好，粒径分布范围较窄，为30～80μm，平均约56μm，适用于骨修复支架材料；VEGF和万古霉素包封率分别可达49.63％和14.55％，体外累积释放时间分别可达16.5d和12.5d，累积释放率可达80％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物缓释微球
，具体涉及一种以海藻酸盐和壳聚糖为载体，同时载有血管内皮生长因子(VEGF)和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂及其制备方法。
技术介绍
组织工程骨修复骨缺损时，促进血管生成和控制感染是关键。血管内皮生长因子(VEGF)能够促进局部血管再生，但其在体内半衰期短，若首次大剂量给药则易形成血管瘤；万古霉素是治疗骨感染的常用抗生素，常规口服或静脉给药用药量大、易引发副作用，且在血管少、血流慢的部位难以奏效。因此，联合应用VEGF和万古霉素并实现其可控释放，降低毒副作用，发挥协同持久的治疗效果，对于骨缺损修复具有重要意义。中国专利ZL201410405976.7公开了一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂、制备方法及应用。其亦为负载VEGF和万古霉素两种药物的以海藻酸盐和壳聚糖为载体的多层核壳型缓释微球，制备工艺简单，缓释效果良好。由于其核心球使用滴注交联法制备导致粒径较大，达500μm以上，故在应用上受到组织工程骨支架材料孔隙大小的限制。乳化交联法是在乳化体系下进行交联以形成高分子凝胶微球的一种方法，可以通过调节油、水比及各组分的浓度来控制生成微球的大小。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术制备的载VEGF和万古霉素的多层缓释微粒径较大的不足，提供一种粒径较小、能更好地适用于骨修复支架材料的一种载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂。本专利技术的另一目的在于提供一种上述缓释微球制剂的制备方法。本专利技术通过以下技术方案实现：以乳化交联法制备的海藻酸钙为核心球，外层利用层层自组装原理依次包覆壳聚糖、海藻酸钠和壳聚糖形成粒径为30～80μm的多层核壳型载药微球，其中核心的海藻酸钙负载血管内皮生长因子(VEGF)，外层的壳聚糖负载万古霉素，兼具促进血管生成和抗感染两种潜能。本专利技术的载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂的制备方法，其步骤如下：(1)利用乳化法制备负载VEGF的海藻酸钙核心球：将VEGF溶于海藻酸钠水溶液中，VEGF的浓度范围为0.01～0.1μg/mL；海藻酸钠水溶液中，海藻酸钠纯品的黏度为20mPa·s，海藻酸钠的浓度范围为0.01～0.015g/mL；将司盘80溶于异辛烷中，司盘80的浓度范围为0.02～0.04g/mL；800～1200r/min搅拌下，将20mL溶有VEGF的海藻酸钠水溶液缓慢加入到司盘80的异辛烷溶液中，司盘80的异辛烷溶液与海藻酸钠水溶液的体积比范围为3～1：1；10～20min后滴加2mL吐温80的水溶液，司盘80与吐温80的质量比为5.3：1，使得溶液的HLB值达6；继续乳化5～10min后，滴加20mL、浓度范围为0.06～0.08g/mL的CaCl2水溶液，搅拌固化10～20min后交联形成海藻酸钙微球溶液，离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤离心产物，得到负载VEGF的海藻酸钙核心球，粒径为5～25μm；(2)将50mg万古霉素溶于30mL、浓度为0.01～0.02g/mL的壳聚糖溶液，该壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于体积分数为2％的醋酸溶液中制得，在搅拌条件下，加入步骤(1)制备得到的全部海藻酸钙核心球，300～500r/min转速下搅拌10～20min，4000～6000r/min转速下离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤得到海藻酸钙-壳聚糖微球；(3)将0.15g海藻酸钠(海藻酸钠纯品黏度为5mPa·s)溶于30mL蒸馏水，将步骤(2)得到的全部海藻酸钙-壳聚糖微球加入到该海藻酸钠溶液中，300～500r/min搅拌10～20min，4000～6000r/min转速下离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤得到海藻酸钙-壳聚糖-海藻酸钠微球；(4)将50mg万古霉素溶于30mL、浓度为0.01～0.02g/mL的壳聚糖溶液，该壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于体积分数为2％的醋酸溶液中制得，在搅拌条件下，将步骤(3)得到的全部海藻酸钙-壳聚糖-海藻酸钠微球加入，300～500r/min搅拌10～20min，4000～6000r/min离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤得到海藻酸钙-壳聚糖-海藻酸钠-壳聚糖微球，真空冷冻干燥得到本专利技术所述的载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球。本专利技术所述的载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球的制备方法中，当步骤(1)中海藻酸钠水溶液中海藻酸钠浓度为0.01g/mL，CaCl2水溶液中CaCl2的浓度为0.08g/mL，司盘80异辛烷溶液与海藻酸钠水溶液体积比为3：1，司盘80异辛烷溶液的浓度为0.02g/mL时为优选条件，此时VEGF和万古霉素的包封率均较高。本专利技术的制得的载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球呈圆球状，分散性较好，粒径分布范围较窄，为30～80μm，平均约56μm左右；如实施例2所述，VEGF和万古霉素包封率分别可达49.63％和14.55％，体外累积释放时间分别可达16.5d和12.5d，累积释放率可达80％以上。附图说明图1为本专利技术实施例2所述的载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂的扫描电子显微镜照片。图2为本专利技术实施例2所述的载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂的粒径分布直方图。图3为本专利技术实施例2所述的载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂的VEGF累积释放曲线。图4为本专利技术实施例2所述的载VEGF和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂的万古霉素累积释放曲线。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细说明。实施例1(1)利用乳化法制备负载VEGF的海藻酸钙核心球：将0.8μgVEGF溶于20mL海藻酸钠水溶液中，VEGF的浓度为0.04μg/mL；海藻酸钠水溶液中，海藻酸钠纯品黏度为20mPa·s，海藻酸钠的浓度为0.01g/mL；将0.8g司盘80溶于20mL异辛烷中，司盘80的异辛烷溶液浓度为0.04g/mL；1000r/min搅拌下，将溶有VEGF的海藻酸钠水溶液缓慢加入到司盘80异辛烷溶液中，10min后滴加2mL浓度为0.075g/mL的吐温80水溶液，使得HLB值达6，继续乳化5min后，滴加20mL浓度为0.08g/mL的CaCl2水溶液，搅拌固化10min交联形成海藻酸钙微球溶液，离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤，得到负载VEGF的海藻酸钙核心球，粒径为5～25μm；(2)将50mg万古霉素溶于30mL、浓度为0.015g/mL的壳聚糖溶液，该壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于体积分数为2％的醋酸溶液中制得，在搅拌条件下，加入步骤(1)制备得到的全部海藻酸钙核心球，400r/min搅拌10min，5000r/min转速下离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤得到海藻酸钙-壳聚糖微球；(3)将0.15g海藻酸钠(海藻酸钠纯品黏度为5mPa·s)溶于30mL蒸馏水，将步骤(2)得到的全部海藻酸钙-壳聚糖微球加入到该海藻酸钠溶液中，400r/min搅拌10min，5000r/min转速下离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤得到海藻酸钙-壳聚糖-海藻酸钠微球；(4)将50mg万古霉素溶于30mL浓度为0.015g/mL的壳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种载血管内皮生长因子和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂的制备方法，其步骤如下：(1)利用乳化法制备负载血管内皮生长因子的海藻酸钙核心球：将血管内皮生长因子溶于海藻酸钠水溶液中，血管内皮生长因子的浓度范围为0.01～0.1μg/mL；海藻酸钠水溶液中，海藻酸钠纯品的黏度为20mPa·s，海藻酸钠的浓度范围为0.01～0.015g/mL；将司盘80溶于异辛烷中，司盘80的浓度范围为0.02～0.04g/mL；800～1200r/min搅拌下，将20mL溶有血管内皮生长因子的海藻酸钠水溶液缓慢加入到司盘80的异辛烷溶液中，司盘80的异辛烷溶液与海藻酸钠水溶液的体积比范围为3～1：1；10～20min后滴加2mL吐温80的水溶液，司盘80与吐温80的质量比为5.3：1，使得溶液的HLB值达6；继续乳化5～10min后，滴加20mL、浓度范围为0.06～0.08g/mL的CaCl2水溶液，搅拌固化10～20min后交联形成海藻酸钙微球溶液，离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤离心产物，得到负载血管内皮生长因子的海藻酸钙核心球，粒径为5～25μm；(2)将50mg万古霉素溶于30mL、浓度为0.01～0.02g/mL的壳聚糖溶液，该壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于体积分数为2％的醋酸溶液中制得，在搅拌条件下，加入步骤(1)制备得到的全部海藻酸钙核心球，300～500r/min转速下搅拌10～20min，4000～6000r/min转速下离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤得到海藻酸钙‑壳聚糖微球；(3)将0.15g海藻酸钠溶于30mL蒸馏水，海藻酸钠纯品黏度为5mPa·s，将步骤(2)得到的全部海藻酸钙‑壳聚糖微球加入到该海藻酸钠溶液中，300～500r/min搅拌10～20min，4000～6000r/min转速下离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤得到海藻酸钙‑壳聚糖‑海藻酸钠微球；(4)将50mg万古霉素溶于30mL、浓度为0.01～0.02g/mL的壳聚糖溶液，该壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于体积分数为2％的醋酸溶液中制得，在搅拌条件下，将步骤(3)得到的全部海藻酸钙‑壳聚糖‑海藻酸钠微球加入，300～500r/min搅拌10～20min，4000～6000r/min离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤得到海藻酸钙‑壳聚糖‑海藻酸钠‑壳聚糖微球，真空冷冻干燥得到载血管内皮生长因子和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球，粒径为30～80μm。...

【技术特征摘要】
1.一种载血管内皮生长因子和万古霉素的十微米级多层核壳型缓释微球制剂的制备方法，其步骤如下：(1)利用乳化法制备负载血管内皮生长因子的海藻酸钙核心球：将血管内皮生长因子溶于海藻酸钠水溶液中，血管内皮生长因子的浓度范围为0.01～0.1μg/mL；海藻酸钠水溶液中，海藻酸钠纯品的黏度为20mPa·s，海藻酸钠的浓度范围为0.01～0.015g/mL；将司盘80溶于异辛烷中，司盘80的浓度范围为0.02～0.04g/mL；800～1200r/min搅拌下，将20mL溶有血管内皮生长因子的海藻酸钠水溶液缓慢加入到司盘80的异辛烷溶液中，司盘80的异辛烷溶液与海藻酸钠水溶液的体积比范围为3～1：1；10～20min后滴加2mL吐温80的水溶液，司盘80与吐温80的质量比为5.3：1，使得溶液的HLB值达6；继续乳化5～10min后，滴加20mL、浓度范围为0.06～0.08g/mL的CaCl2水溶液，搅拌固化10～20min后交联形成海藻酸钙微球溶液，离心并用无水乙醇、蒸馏水依次洗涤离心产物，得到负载血管内皮生长因子的海藻酸钙核心球，粒径为5～25μm；(2)将50mg万古霉素溶于30mL、浓度为0.01～0.02g/mL的壳聚糖溶液，该壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于体积分数为2％的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志辉，杨军星，王博蔚，朱镇，宋立杰，张冰，徐一驰，赵楚翘，金鑫，王瑶，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22