乳铁蛋白在制备防治人轮状病毒所致疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了乳铁蛋白在制备防治人轮状病毒所致疾病的药物中的应用。所述乳铁蛋白的半数有效剂量为２７８．４５±１２．８８μｇ／ｍＬ。药物治疗指数为１７．９８。本发明专利技术提供了一种来源广泛、成本低廉、对ＨＲＶ有较好防治效果的物质，为新药筛选提供了基础。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及乳铁蛋白在制备防治人轮状病毒所致疾病的药物中的应用。(二) 背景4支术乳铁蛋白(Lactoferrin, LF ) 1960年首先由Groves从牛乳中分离获 得，因与铁结合而呈红色，故称之为红蛋白。在发现之初，LF被认为 是一种与铁的转运和存储有关的蛋白质，所以又称乳转铁蛋白。进一步研 究表明，LF是一种分子量为70 80kD的糖蛋白，广泛存在于乳汁、唾液、 泪液等外分泌液或血浆、中性粒细胞中。乳汁，尤其是初乳中LF的含量 很高，如牛初乳中.的LF质量浓度为lg/L。深入研究发现，LF是一种具 有多种生物学功能的蛋白质，它不仅参与铁的转运，而且具有抗菌、抑菌、 抗病毒、抗氧化、调节机体免疫和提高肠道对铁离子的吸收等作用，被认 为是一种新型的抗菌、抗癌药物和极具开发潜力的食品和饲料添加剂。还有报道乳铁蛋白具有抗病毒作用乳铁蛋白通过抑制病毒进入细胞， 减轻对人体肝细胞的损害。肝细胞病毒C(HCV)是一种有嚢膜的单链RNA 病毒，它可以引起慢性肝炎、肝硬化、肝癌。LF可通过结合在肝细胞病 毒C的嚢膜蛋白上阻止病毒与靶细胞结合。但没能报道以实验表明LF对 轮状病毒有抑制或抵抗作用。人轮状病毒(HRV )是引起全世界婴幼儿严重胃肠炎和脱水的最主要 病因，几乎所有儿童在出生后3~5年都感染过HRV。在发展中国家和 发达国家中HRV感染情况相似，公共卫生条件的改善不能够减少轮状病毒腹泻的发病率。HRV感染是世界范围的，几乎每个儿童在5岁前都感 染过HRV,在发展中国家和发达国家都是一个重要的健康和公共卫生问 题，因此迫切需要研制一种成本低廉、对HRV有较好防治效果，可大范 围推广使用的药物。
技术实现思路
本专利技术既是为了提供一种成本低廉、对HRV有较好防治效果的物质， 为新药筛选提供了基础。为达到专利技术目的本专利技术采用的技术方案是本专利技术提示:乳铁蛋白在制备防治人轮状病毒所致疾病的药物中的应用。所述乳铁蛋白的半数有效剂量为278.45士12.88fig/mL。药物治疗指数 为17.98。本专利技术通过实验证明，乳铁蛋白不仅具有直接抗人轮状病毒的作用， 还可提高细胞的抗人轮状病毒作用，并且还具有抑制人轮状病毒增殖的作 用，另外也具有直接抗人轮状病毒和提高细胞的抗人轮状病毒的联合作 用。因此，乳铁蛋白可用于制备抗人轮状病毒的药物、提高细胞抗人轮状 病毒作用的药物中、以及抑制人轮状病毒增殖的药物，也可作为疫苗应用 于人轮状病毒所致相关疾病的防疫。特别的，乳铁蛋白可用于制备预防和 治疗人轮状病毒引起的婴幼儿腹泻。所述的药物制成分散片时，每200片配方如下乳铁蛋白50g、微晶 纤维素30g、甘露醇10 g 、 PVPP10g、 PVP适量。所述的药物制成咀嚼片时，每1000片配方如下乳4失蛋白100 g,甘 露醇40 g，聚唯酮10g,硬脂酸4^适量。本专利技术的有益效果主要体现在提供了一种来源广泛、成本低廉、对 HRV有较好防治效果的物质，为新药筛选提供了基础。 具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围 并不仅限于此实施例1:乳铁蛋白抗人轮状病毒作用 材料与方法1、 细胞采用MA-104细胞，在EagleMEM培养基营养液(0.05°/。谷氨 酰胺，10%新生牛血清，双抗)培养成单层，形态良好；2、 病毒采用人轮状病毒Wa林，为浙江大学医学院微生物研究室保存林；3、 药物乳铁蛋白由浙江省中医药研究院提供，以EagleMEM培养基 稀释到实验浓度；4、 病毒滴定采用空斑滴定法；5、 乳铁蛋白抗人轮状病毒作用采用不同浓度的乳铁蛋白分别处理病毒、 细胞和加入维持液，即直接抗病毒、提高细胞抗病毒能力和抑制病毒增殖 三个作用环节，100空斑形成单位的人轮状病毒经10U/mL的胰蛋白酶(Sigma )37。C处理30分钟，感染形态良好MA-104细胞单层，37。C吸附 30分钟，去除未吸附的病毒，加含1U/mL的胰蛋白酶的EagleMEM培 养基维持液(0.05%谷氨酰胺，无新生牛血清，双抗)，37。C培养48小时 后，覆盖含中性红的EagleMEM培养基维持琼脂，37。C培养48小时后计 数病毒空斑；6、 药物治疗指数(TI):按TI-TD50/IC50进行计算，TI值愈大，表明 药物的安全范围愈大。实验结果1、 乳铁蛋白直接抗人轮状病毒作用浓度为5000、 2500、 1000、 500、 250、 100、 50、 10、 5、 1和0ug/mL的乳铁蛋白37。C处理人轮病毒30分 钟，结果病毒空斑抑制率平均(n = 6)分别为66.8、 53.4、 41.2、 33.5、 21.1、 15.4、 0.8、 0.2、 0、 0和0%;2、 乳铁蛋白提高细胞人轮状抗病毒作用浓度为5000、 2500、 1000、 500、 250、 100、 50、 10、 5、 1和Oug/mL的乳铁蛋白37。C处理细胞30分钟， 结果病毒空斑抑制率平均(n = 6)分别为42.8、 38.4、 36.2、 31.5、 27.1、 16.4、 8.3、 1.8、 0、 0和0%;3、 乳铁蛋白抑制人轮状病毒增殖作用浓度为5000、 2500、 1000、 500、 250、 100、 50、 10、 5、 1和Oug/mL的乳铁蛋白加入维持液，结果病毒空 斑抑制率平均(n = 6)分别为33.2、 28.3、 19.6、 5.6、 0、 0、 0、 0、 0、 0 和0%;4、 乳铁蛋白直接抗人轮状病毒和提高细胞人轮状抗病毒的联合作用浓 度为5000、 2500、 1000、 500、 250、 100、 50、 10、 5、 1和Oug/mL的乳 铁蛋白37。C处理细胞30分钟和37。C处理细胞30分钟，结果病毒空斑抑 制率平均(n = 6)分别为70.2、 68.4、 59.6、 51.3、 48.7、 40.6、 30.5、 22.6、 12.3、 6.6、 1.1%;5、 药物半数有效剂量为278.45±12.88pg/mL。 药物治疗指数为17.98。实施例2:牛乳铁蛋白(bLf)对轮状病毒感染的腹泻的治疗作用为了解牛乳铁蛋白(bLf)对轮状病毒感染的腹泻的治疗作用，建立 了树駒感染轮状病毒的模型，用不同剂量bLf的对腹泻树駒进行治疗， 用电镜法观察粪便中的轮状病毒，同时计算轮状病毒的抗原检出率及抗 原滴度及动物死亡率、平均死亡日、延长生命率。 1、材料l.l试验动物成年树駒(健康无腹泻)，雌雄各半，由昆明中医学院动物 中心提供；1.2 bLf，浙江省中医药研究院提供；1.3人轮状病毒粪液,昆明市儿童医院收集，经(RV — Ag)检测为轮状病毒 强阳性1.4轮状病毒的处理收集多例经(RV-Ag)检测为轮状病毒阳性的儿童粪便 600g，用PBS液1: l稀释，经3000r/min, 30'离心收集上清400ml加青 霉素80万，链霉素800mg搅拌均匀置4。C冰箱。24h内送电镜检查，调 整病毒含量至106/ml,同时镜检无其它细菌。待用。 1.5树駒自制饲料的配方是(按每kg百分比含量)1. 米粉20% ( 200g) 2.玉米粉20% ( 200g) 3.麦夫10% ( 100 g) 4.本文档来自技高网...

【技术保护点】
乳铁蛋白在制备防治人轮状病毒所致疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.乳铁蛋白在制备防治人轮状病毒所致疾病的药物中的应用。2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于所述乳铁蛋白的半数有效剂 量为278.45 ± 12.88 |ug/mL。3. 如权利要求1或2所述的应用，其特征在于乳铁蛋白在制备抗人轮 状病毒的药物中的应用。4. 如权利要求1或...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱婉萍，孔繁智，黄飞华，陈小囡，
申请(专利权)人：浙江省中医药研究院，
类型：发明
国别省市：86[]