喷雾流行性感冒疫苗组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种喷雾流行性感冒疫苗组合物的制备方法，所述的组合物含有流感病毒抗原以及药物可接受的载体，所述载体选自：干扰素、离子交换树脂、人血白蛋白或磷酸盐缓冲液。

【技术实现步骤摘要】
喷雾流行性感冒疫苗组合物及其制备方法喷雾流行性感冒疫苗组合物及其制备方法
-本专利技术涉及一种喷雾流行性感冒疫苗组合物的制备方法，属于生物药物制剂 领域。
技术介绍
流行性感冒简称流感(inf luenza)，主要是由甲(A)、乙(B) 二型流感病毒分别 引起的急性呼吸道传染疾病。甲型流感病毒常以流行形式出现，引起世界性流感 大流行，乙型流感病毒常常引起流感局部爆发，不引起世界性流感大流行。目前 临床上仍缺乏有效的药物对流感患者进行治疗，流感病毒疫苗是防止流感疾病发 生和流行最有效的一种手段。流感病毒属正粘病毒科(Orthomyxovindae)、流感病毒属。典型的流感病毒 颗粒为球型，直径80 120nm。流感病毒基因组是分多节段的单链、负链的RNA 基因组，由相对分子质量不等的8个节段组成，丙型7个。易发生基因重配。其 中甲型流感病毒抗原经常发生变异。其毒粒表面有血凝素(HA)蛋白、神经氨酸 酶(NA)和M2三种结构蛋白，血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)这两种蛋白的 变化是流感病毒抗原发生抗原漂移的主要原因。如果抗原HA和NA中氨基酸序 列出现一系列的点突变，使NA和HA抗原决定簇发生某些改变，可引起中、小 型流行，称抗原漂移；如果抗原变异幅度较大，形成一个新的亚型，称抗原转变， 常常引起较大的流行，甚至引起世界流感大流行。核蛋白(NP)是可溶性蛋白， 其抗原性稳定。膜蛋白(MP)是毒粒的主要蛋白，也是特异性抗原，它们是流感 病毒分型的主要依据，但它们的抗体不能中和流感病毒，所以没有保护作用。由 于流感病毒经常发生变异，因此人的一生中要经历多次不同型、亚型和变种的病 毒反复感染。流感病毒的变异产生了新的流行毒株，所以疫苗的毒株也必须改变， 来应对新的流行毒株。为此，WHO的专家委员会每年二月推荐在北半球的冬天(ll 月 下年4月)流感流行的病毒毒株，每年九月推荐在南半球的下一个冬天(5 月 10月)流感流行的病毒毒株。目前流感疫苗包括三个主要亚型A(H1N1)，A(H3N2)和B型。1937年鸡胚培养流感病毒获得成功，使大量生产流感疫苗成为可能。流感全 病毒灭活疫苗于1941年在美国首次被批准使用，并证实有效。1945年在美国被 广泛使用，这种收获的鸡胚尿囊液经红细胞吸附和释放有限的纯化疫苗，属早期 粗制疫苗，接种人体后局部和全身的不良反应都很强。上世纪60年代末，超速 离心机和层析色谱技术的应用，大大提高了病毒纯化质量，制成了全病毒灭活疫 苗。它包含病毒所有蛋白、脂质和核酸。该疫苗的制作方法是将9 11日受精鸡 胚尿囊腔接种流感病毒，培养、收获、纯化和灭活而得。此类疫苗免疫效果好， 但儿童使用时出现了不良反应。其主要原因之一是由于毒粒本身的细胞毒性造成 的。1968年在美国首次被批准使用裂解纯化流感疫苗。流感裂解疫苗含有血凝 素(HA)和神经氨酸酶(NA)表面抗原和其他抗原。先提纯病毒，后加入裂解剂， 如乙醚、3-N- 丁基磷酸盐(tri-N-butylphosphate )、聚山梨酸酯 80(polysorbate80)、脱氧胆酸钠(deoxycholate sodium)、三硝基甲苯(Triton x-100)等裂解剂。去除病毒的脂质后制得，病毒的胞膜己被破坏，从而得到具 有高度免疫原性的病毒蛋白混合物。虽然能够获得高度免疫原性的病毒蛋白混合 物，但始终是注射剂型，注射接种免疫副反应较重，不利于大范围尤其是儿童、 老人和体弱者接种，而鼻腔喷雾接种具有良好的耐受性，较低的副反应，可以用 于儿童、成人和老年人，而且使用方便，可以自行接种，可以大面积人群中应用， 是目前流感疫苗改进的方向。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种喷雾流行性感冒疫苗组合物及其制备方法。 本专利技术提供一种流行性感冒疫苗组合物，该疫苗是喷雾剂型，所述的组合物 含有流感病毒抗原以及药物可接受的载体。所述载体选自干扰素、离子交换树 脂、人血白蛋白或磷酸盐缓冲液。所述的干扰素是IFN-a 、 IFN-e或IFN-Y; 离子交换树脂是聚苯乙烯磺酸钠，所述的磷酸盐缓冲液是pH是7. 0的磷酸盐缓 冲液。所述的流感病毒抗原为全病毒抗原、裂解病毒抗原或亚单位抗原。本专利技术优选的配方组成如下:<table>table see original document page 5</column></row><table><table>table see original document page 6</column></row><table>其余由PBS磷酸盐缓冲液补足到100% (体积百分比)流感病毒抗原配成2. 15mg/ml(l份) (纯化)<table>table see original document page 6</column></row><table> 或其中所述聚苯乙烯磺酸钠粒径为20 40Wn。本专利技术的制备方法包括以下步骤(1) 获取细胞(2) 细胞制备(3) 接种病毒(4) 收获病毒液(5) 病毒液的灭活(6) 澄清过滤、浓縮(7) 纯化(8) 裂解再纯化(9) 过滤去除Triton x-100(10) 配制本专利技术使用的细胞为肾细胞，包括地鼠肾细胞和Vero细胞，优选Vero细胞， 首先建立Vero细胞工作库，并对细胞库进行全面检定，合格后方可作为细胞库。 在制备流感疫苗之前，需先进行细胞的复苏、培养和扩增，以达到生产批量的需 要。各种用于制备疫苗的哺乳动物细胞均为附着依赖性细胞，细胞在一定的载体 上生长，本工艺中细胞的培养方式为转瓶培养。培养过程中，细胞分种率根据生 产批量的需要确定，当细胞长成致密单层后，即可接种流感病毒，各个型别分别 接种，甲型46小时左右开始收获，乙型70小时左右开始收获，收获的病毒液血凝效价可达1:256。收获的病毒液用甲醛溶液灭活得到单型病毒收获液。收获液经合并后为单价 病毒合并液。单价病毒合并液体需要进行浓缩提纯制备成疫苗制品，本工艺中选用工艺采 用GE公司切向流过滤系统对病毒收获液进行澄清，病毒浓缩应用750KD分子量 超滤柱超滤浓縮，使纯化的病毒纯度更高，提高了疫苗的有效性和降低了副反应 发生，S印harose6FF柱层析对流感浓縮液进行纯化，裂解纯化采用Triton x-100 对纯化流感病毒进行裂解，去除Triton x-100采用分子量为10000的过滤器， 进行过滤去除裂解剂，经过四步的澄清、浓縮、纯化、裂解纯化，疫苗总蛋白含 量减少了约99%以上。本专利技术采用GE公司切向流过滤系统对病毒收获液进行澄清，替代了常规离 心法。优点操作简单，单位时间处理量是离心法的2 3倍，可达到澄清除菌 双重效果。由于收获后立即除菌，可最大程度减少热源质。病毒浓縮应用750KD 分子量超滤柱，替代了目前国内普遍使用的100KD和300KD超滤膜包。超滤同一 批病毒收获液工期可縮短1 2倍，并且得到的浓縮液去除了大部分杂蛋白，为 纯化提供了前期保证，延长了纯化用凝胶寿命。使纯化的病毒纯度更高，提高了 疫苗的有效性和降低了副反应发生。我们用柱层析纯化法代本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种喷雾流行性感冒疫苗组合物，其特征在于：所述的组合物含有流感病毒抗原以及药物可接受的载体。

【技术特征摘要】
1、一种喷雾流行性感冒疫苗组合物，其特征在于所述的组合物含有流感病毒抗原以及药物可接受的载体。2、 根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述载体选自干扰素、 离子交换树脂、人血白蛋白或磷酸盐缓冲液。3、 根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的干扰素是IFN-a、IFN-e或IFN-y;离子交换树脂是聚苯乙烯磺酸钠，所述的磷酸盐缓冲液是 pH是7. 0的磷酸盐缓冲液。4、 根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的流感病毒抗原为全 病毒抗原、裂解病毒抗原或亚单位抗原。5、 根据权利要求1-4任何一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述组合物配方为<table>table see original document page 2</column></row><table><table>table see original document page 2</column></row><table>6、 根据权利要求5所述的疫苗...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔栋，
申请(专利权)人：崔栋，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]