载玻片沉积小室制造技术

一种细胞沉积小室和一种使用该小室将生物样品沉积到显微镜载 玻片上的方法。小室可拆卸地密封到载玻片上的样品接纳区域，且具 有可密封的开口以允许从载玻片表面吸出样品。小室设置成能够通过 吸液管吸取载玻片表面的所有区域，且当倒置时小室完全排空。小室 可装配有一次性衬里以使小室可再使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及将生物材料沉积到显微镜载玻片上。更具体地，本发 明涉及使用沉积小室(deposition chamber)来将各种材料沉积到显微 镜载玻片上的设备和方法。小室可以是一次性的，或非一次性的即可 再用的，如在本专利技术的实施例中所公开的。
技术介绍
在实验室进行的诊断过程一般首先从患者身上收集生物材料样 本。样本可包括但不限于血液、唾液、尿、上皮涂片、精液等。存在 多种从悬浮液中以固定的细胞或细胞核的形式将这些样本沉积在显微 镜载玻片上的方法，以便免疫细胞化学染色、免疫荧光染色或FISH (荧光原位杂交)染色和随后的显微分析。沉积方法根据用途而改变。例如，涂抹方法可用于在载玻片上沉积血液样品以用于显微分析。 涂抹可能需要将一滴几微升抗凝剂处理的血液放置在载玻片的一端 上，且使用另一个干净的载玻片以一个动作涂抹血液。被正确执行后， 涂抹形成了覆盖大部分载玻片表面的相对均匀的单层血细胞。然后， 使载玻片在环境条件下变干燥。干燥过程主要是将细胞附着到玻璃载 玻片上。制备血液涂片是与使用者密切相关的一个过程。涂抹可用于 制备全血载玻片。使该过程自动化的尝试是极其不成功的。另一种方法涉及"滴落(dropping)"方法。滴落是由各种来源的 细胞制备用于FISH分析的固定核的普通方法，这些来源包括羊水、 血液和骨髓吸出物。这些细胞可以是来自样品的原发细胞或培养细胞。5样品可悬浮在有机溶剂中，例如卡诺(Carnoy)固定液(3: 1，甲醇 乙酸)。固定核悬浮液可从预定高度(通常为15-20cm)以单滴的形式滴 在玻璃载玻片上。由于液滴在载玻片上撞击的结果，悬浮液可按同心 方式扩展以覆盖载玻片的宽度，取决于悬浮液被滴落的高度。然后， 允许溶液挥发，如果玻璃是干净的且被适当处理，这导致细胞核附着 到载玻片上。然而，沉积的模式和位置是不可预测的，且只可部分地 控制所沉积的样品的数量。载玻片上细胞的分布和最后得到的密度通 常是不可预测的。然而，如果不要求细胞核的量化和系统化的扫描， 那么这种方法在大多数情况下是适当的。为了获得对沉积模式的更好控制且使样品沉积过程自动化，开发 了使用离心力将细胞或细胞核放置在载玻片上的方法。通过使用可调 节的力在载玻片上放置细胞的离心法还允许附着一些不能附着到载玻 片表面的样品类型。设计成在专用离心机中的显微镜载玻片上沉积材 料的被称为细胞离心机(Cytospin)的离心装置由Shandon公司制造 并显示在图1中。细胞离心机IO包括小室20，小室20接纳载玻片30且可安装到 保持架/托架40上，如图1所示。小室的位置设置成使载玻片稍微倾 斜且样品悬浮液借助于吸液管60穿过开口或端口 50被装入(图2a)。 悬浮液70包含悬浮细胞75。悬浮细胞以可通过著名的斯托克(Stoke) 方程的变形预测的沉淀速度立即开始沉淀。因此，如图2a所示，包括 细胞75的初始颗粒在细胞离心机小室的底部形成，初始颗粒的尺寸与 装入小室和开始离心动作之间的时间成比例。整个细胞离心机组件10 (小室20-载玻片30-保持架40)紧接着置于离心机中(未显示)。当离 心机加速且在离心力80的作用下时，液体70逐渐升高到如图2b所示 竖直位置。在离心期间，悬浮液对着载玻片30被压缩且细胞被压到载 玻片上，如图2c所示。然后，当离心机停止时，细胞75被留下来附 着到载玻片30上，剩余的浮于上层的悬浮液70流回其在小室20内的 原始位置，如图2d所示。W. J. Hayes在美国专利5，942，129中描述了一种设备和方法，其 使用离心机将处理液如固定剂施加到进行离心分析的样本上。该专利 提供了带有与显微镜载玻片接合的安装凸缘的离心机样品小室，以便 样本材料被离心到载玻片用于检验。样品小室具有由流体通道连接的上部空腔和下部样本保持部分。样本保持部分包括下部空腔，下部支 腿从下部空腔向下延伸，以在离心之前保持样本。与上部空腔连通的 上部中空支腿保持处理液，同时小室在离心之前处于静止状态。离心 机的启动使小室倾斜以倾斜上部支腿和下部支腿，以便处理液流入上 部空腔且由离心力保持在其中。离心力同时使样本流出下部支腿，穿 过下部空腔并穿过排放口，到达显微镜载玻片。当离心机停止时，重 力使小室倾斜而回到静止位置，使处理液通过重力从上部空腔落下穿 过通道并进入下部支腿。离心机的重新启动使小室再次倾斜以倾斜下 部支腿，且离心力致使处理液流出下部支腿，并穿过排放口以离心施 加到显微镜载玻片上的样本中。用于在离心力的作用下将固体物质放置在载玻片玻璃上的另一装 置由M.Toya在美国专利4,853,188中提供。该装置在离心分离器中旋 转。根据该专利，离心分离器因此通过易于处理的合成树脂的模压成 形来整体地形成。形成该装置的一部分的基板具有弹力，以便与设置 在保持架上的套环接合，基板固定在保持架中。在一种不同方法中，A. E. Lorincz在美国专利6，567，214中描述了 为生物流体和组织样品中细胞的现场搜集、染色和观察设计的显微镜 载玻片。根据该专利，载玻片允许在大约数分钟内现场检验(point-of care screening)任何生物流体或组织样品中传染病原体的存在，其后， 载玻片可被运送到中心实验室用于培养和/或最后的鉴定。在本说明书中引用的所有参考文献中所教给的适当的附加或可选 的细节、特征、和/或技术背景，在这里通过引用被并入。可以理解， 用于将材料样本沉积到显微镜载玻片上的各种现有方法都存在缺陷。 尽管涂片方法常用于临床血液学中的细胞化学染色和细胞分类计数， 但是很难使其自动化。对于大多数普通滴落方法而言，载玻片上细胞7的分布和最后得到的密度是不可预测的。使用以上所描述的细胞离心机技术，载玻片30上沉积物周围的上清液(图2a-2d的70)的初始 沉淀和运动可阻碍同质层的形成，这是不希望有的。此外，上清液70 的运动可从载玻片表面冲走附着不牢固的细胞。为了避免细胞离心机的不规则沉淀问题，还有一种Cytobucket 技术。Cytobucket技术通常仅仅用于在载玻片上沉积固定细胞或细胞 核的研究环境中(例如，见Krider等人的美国专利5，985，595)。它由 离心载体(centrifuge carrier)组成，离心载体制造成配合特别的通 用离心机和可再用的小室。使用者选择的规则载玻片完成组装且形成 小室的底部。载体安装有摆动(Swing-out)式转子。样品装入在水平 位置的组件中(小室-载玻片-保持架)，且细胞悬浮液直接分配在载玻 片上的沉积区域上。细胞开始的沉淀模式可反映出在离心作用开始之 前在零参考重力时细胞在分配的悬浮液中的分布。如果初始悬浮液分 布通过适当的混合而呈随机分布，则在载玻片上可实现随机的细胞分 布。当组件被加速时，由于离心力的原因，栽体逐渐旋转成竖直状。 只要横向加速度不高，细胞就通常保持附着到它们最初到达的地方。 此外，只要载体液体的弯月面不大，那么当离心机减速时，弯月面不 会搅动和移除细胞。因此，Cytobucket技术有可能最佳地沉积细胞用 于自动扫描；然而，其具有补救的缺陷，如在本专利技术的实施例中进一 步描述的。
技术实现思路
本专利技术涉及一种用于在定制的显微镜载玻片上沉积材料的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：安迪·塞波，特里安塔菲洛斯·P·塔法斯，迈克尔·W·基尔帕特里克，
申请(专利权)人：艾可尼西斯公司，
类型：发明
国别省市：