改进的免疫组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种抗原组合物及其用于使非人类哺乳动物对马链球菌马亚种和／或兽疫亚种免疫的用途，所述抗原组合物包含至少一种抗原，所述抗原包含至少一种抗原表位或抗原决定簇，所述抗原表位或抗原决定簇衍生自马链球菌马亚种和兽疫亚种之一或两者中存在的蛋白。本发明专利技术还公开了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含作为免疫组分的上述抗原组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改进的免疫组合物专利技术背景 1.专利
本专利技术总体涉及抗原或免疫原组合物及其用于使非人类哺乳动物如马对马链球 菌免疫的用途。2.
技术介绍
马内链球菌感染主要由马链球菌(Streptococcus equi)引起，所述马链球菌分类 为兰氏C族链球菌并包含分别命名马亚种(subsp.equi)和兽疫亚种(subsp.Zooepidemicus)的两个亚种。马链球菌马亚种，实质上限于马，是窒息病(strangles)的病原体，所述窒息病 是遍及全球且高度传染的马科动物上呼吸道严重疾病。窒息病是全球报道最频繁的马科 疾病之一，其特征在于发热、流鼻涕及在咽后和颚淋巴结内形成脓肿。一些情况下，这 种疾病表现出体内转移过程，即所谓的“联合窒息病”。这种疾病遍及全球且导致巨大 经济损失。此外，由于窒息病是高度传染的疾病，不仅受感染的动物而且例如患病马群 的所有其它成员必须被隔离长达三个月之久。马链球菌兽疫亚种被认为是在健康马上呼吸道内经常产生的机会致病性共生 体。然而，在压力或病毒感染后，它能引起继发感染，这会产生窒息病样症状。此外， 兽疫亚种不仅感染马还感染大量的其它动物，如猪、狗、猫和牛。甚至还报道了人由于 兽疫亚种而感染的病例。这种亚种还被暗示为如子宫内膜炎、子宫颈炎、流产、乳腺 炎、肺炎、脓肿和关节感染等病症的原发病源体。尽管采用抗生素如青霉素、四环素或庆大霉素可能治疗和治愈这些链球菌感 染，仍希望有一种能防止这种感染爆发并避免或减少与抗生素治疗有关的抗性株形成风 险的有效预防剂。3.相关技术描述然而，尽管进行了大量努力来开发预防剂如抵抗马链球菌的疫苗，目前既没有 针对马亚种也没有针对兽疫亚种的有效疫苗或免疫制剂。抵抗窒息病的现有疫苗是基于马链球菌马亚种的灭活株如加热灭活株或减毒株 或马链球菌产生的富M-蛋白即免疫原蛋白的酸提取物/变溶菌素。以M样蛋白为基础 的抗马链球菌兽疫亚种疫苗已在US-A-5,583,014中描述。W087/00436中，公开了用作 抗马链球菌疫苗的马链球菌的无毒株，所述疫苗在给药至马后刺激鼻咽粘膜内的抗体应答。最近，在英国(2004年11月)推出了一种抗窒息病疫苗商品，产自 IntervetVET, UK的Equilis StrepE，所述疫苗也在全欧洲、南非和南美广泛使用。然而，这种疫苗(其以马链球菌马亚种的减毒(活的、缺失突变)株为基础)的安全性和有效性 可受到质疑。由于已开发的疫苗或免疫制剂受到副作用的阻碍，此外，提供的保护不够，所4以需要抵抗马链球菌感染和/或预防其传播而不产生不需要的副作用的有效且安全的预 防剂如疫苗。众所周知，附着到真核细胞表面是细菌性病源体感染和建群的必需步骤。从 而，与宿主细胞的胞外基质(ECM)或血浆蛋白的不同组分相互作用和/或结合到其上的 链球菌表面蛋白是免疫用活性组分的潜在候选对象。这通过以上述M样蛋白为基础的疫苗或文献例如WO 98/01561中公开的疫苗得 以说明。纤维蛋白原和补体因子H结合到M-蛋白对链球菌抵抗吞噬作用的能力被认为很重要。链球菌附着到宿主细胞所用的另一机理包括与ECM组分纤连蛋白(Fn)结合(参 考文献21，22)。Fn-结合细菌细胞表面蛋白和固定化Fn之间的结合促进上皮细胞将链球 菌内化(参考文献2，23，24)。纤连蛋白是在血浆和胞外基质中发现的二聚糖蛋白，当 在胞外基质中时为纤维状。Fn的主要作用是介导真核细胞的底物粘附，所述粘附包括特 定的细胞表面受体与Fn分子的某些结构域结合。此外，它还与几种其它大分子如DNA、 肝素、纤维蛋白和胶原蛋白相互作用。因此，之前已对不同链球菌种的Fn-结合蛋白进行克隆和测序。例如，对马链 球菌的一种Fn-结合蛋白进行了克隆和表征，所述Fn-结合蛋白是兽疫亚种的Fn_结合细 胞表面蛋白，已命名为FNZ (Lindmark等人，1996，参考文献9)。Lindmark和Guss已 对马链球菌马亚种的另一结合蛋白进行了克隆和表征(1999)(参考文献12)。该命名为 SFS的后述蛋白及其在用于保护马抵抗窒息病的疫苗中作为活性组分的潜在用途已在WO 00/37496中公开。Jonsson等人(1995)(参考文献8)中，对马链球菌兽疫亚种的命名为ZAG的蛋 白进行了克隆和表征，其介导与血浆蛋白酶抑制剂a 2M的结合。其中推测这种蛋白在功 能上类似于链球菌M蛋白。这种ZAG蛋白也已在WO 95/07296中公开，其中指出了它结合特性。然而，其中未公开其免疫原特性或其在用于保护例如马抵抗窒息病 的疫苗中作为活性组分的潜在用途。编码ZAG的基因zag也已在这些文献中公开。Lindmark等人(1999)(参考文献11)和Lindmark (1999)(参考文献13)已对类似 于上述马链球菌兽疫亚种的zag基因但存在于马亚种中的基因进行描述。这种基因在下 文中称为eag并编码命名为EAG的蛋白。WO 2004/032957 A1公开了抗原组合物，所述抗原组合物包含至少一种来源于 命名为EAG蛋白的抗原，所述蛋白存在于马链球菌中，且所述组合物合适地包含至少一 种选自存在于马链球菌中并分别命名为FNZ、SFS、SEC和ScIC的一组蛋白的其它抗原。WO 2007/115059 A2公开了免疫原或疫苗组合物亚单位，所述组合物包含至少 一种马链球菌多肽或其类似物或其片段，所述多肽具有所述公开物所附序列表中所示的 特定氨基酸序列，所述片段是所述多肽的一部分并包含至少一个表位。然而，该文件中 没有提供任何关于免疫马抵抗窒息病的结果。Lannergard, J., Frykberg, L.和 Guss，B. (2003)FEMS Microbiol Lett 222 69-74，(参考文献28)报道的研究中，分离了一种命名为cne的新基因并对相应的蛋白 CNE进行了表征。5Flock, M., Jacobsson, K., Frykberg, L., Hirst, T., R., Franklin, A., Guss，B.和 Flock，J-I. (2004) Infect Immun 72 3228-3236 (参考文献 5)中报道马窒息病的小鼠模型中，采用分别命名为FNZ、SFS和EAG的蛋白的部分来使小鼠免疫。FNZ 和EAG被认为是开发安全而有效的抗窒息病疫苗的有希望的候选物。Lannergard, J.和 Guss，B. (2006) FEMS Microbiol Lett 262 230-235，(参考文 献26)中对分别来自马链球菌马亚种和兽疫亚种的两种新蛋白IdeE和IdeZ的酶活性进行 了表征。Vaccine(Timoney等人；2007)中报道马链球菌的大量重组胞外蛋白，包括 CNE(也称为SEC)和Se 44.2 (也称为IdeE2)作为疫苗组分是无效的。其中推测在小鼠上获得的SEC/CNE早期结果不适用于马。因此，表面蛋白的重组体并不必需是疫苗组 分的可能候选物。Waller, A., Flock, M., Smith, K., Robinson, C, Mitchell, Z., Karlstrom, A., Lannergard, J.，Bergman, R., Guss本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗原组合物，所述抗原组合物包含至少一种抗原，其中所述至少一种抗原包含马链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｑｕｉ）马亚种（ｓｕｂｓｐ．ｅｑｕｉ）或兽疫亚种（ｓｕｂｓｐ．Ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）的至少部分蛋白或多肽且所述至少部分蛋白或多肽包含至少一种马链球菌抗原表位或抗原决定簇，且其中所述蛋白或多肽选自如下蛋白或多肽或其类似物或片段：命名为ＥＡＧ并具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３中所示氨基酸序列的蛋白或多肽；　　命名为ＩｄｅＥ并具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０中所示氨基酸序列的蛋白或多肽；　　命名为ＩｄｅＥ２并具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１中所示氨基酸序列的蛋白或多肽；　　命名为Ｅｑ５并具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３中所示氨基酸序列的蛋白或多肽；　　命名为Ｅｑ８并具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５中所示氨基酸序列的蛋白或多肽；命名为ＩｄｅＺ２并具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７中所示氨基酸序列的蛋白或多肽；　　命名为Ｅｑｚ５并具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８中所示氨基酸序列的蛋白或多肽；和　　命名为Ｅｑｚ８并具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９中所示氨基酸序列的蛋白或多肽；　　且其中包含ＥＡＧ的组合物包含至少一种其它抗原，所述其它抗原为选自如下的蛋白或多肽：ＩｄｅＥ、ＩｄｅＥ２、Ｅｑ５、Ｅｑ８、ＩｄｅＺ２、Ｅｑｚ５和Ｅｑｚ８。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：B古斯，JI弗洛克，L弗里克伯格，M弗洛克，
申请(专利权)人：英特瓦克公司，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]