一种能源植物小桐子基因组ＤＮＡ提取方法技术

本发明专利技术涉及基因组ＤＮＡ提取方法，具体为一种能源植物小桐子基因组ＤＮＡ提取方法。一种能源植物小桐子基因组ＤＮＡ提取方法，其特征在于包括以下步骤：ａ）ＤＮＡ的提取；ｂ）ＤＮＡ的纯化；ｃ）于－２０℃下保存备用；ｄ）用紫外分光光度计在２６０ｎｍ、２８０ｎｍ和２３０ｎｍ下对ＤＮＡ进行纯度和浓度检测。通过一种能源植物小桐子基因组ＤＮＡ提取方法可提取高质量的能源植物小桐子基因组ＤＮＡ，并能用于小桐子的种群遗传学、系统进化、分子标记辅助育种等研究。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种能源植物小桐子基因组ＤＮＡ提取方法，其特征在于：包括以下步骤：ａ）ＤＮＡ的提取：先采集小桐子新鲜的嫩叶片，用蒸馏水清洗干净，将叶片表面水分擦净；将叶片０．１－０．２克在研钵中加液氮磨成粉末，研磨的时候加入约１０ｍｇ聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ－４０）；再将研磨的粉末转移到２ｍＬ离心管，加入０．５ｍｌ　６５℃预热的４×ＣＴＡＢ抽提缓冲液（４％ＣＴＡＢ，２０ｍＭ　ＥＤＴＡ，３．５Ｍ　ＮａＣｌ，１００ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ　８．０和２％β－巯基乙醇），充分摇匀，再于６５℃水浴９０分钟，每５分钟缓慢摇动一次；待混合物冷至室温后加入等体积的氯仿／异戊醇（２４∶１，Ｖ　Ｖ↑［－１］）轻柔混匀并抽提，每次抽提时间为５分钟；以８０００转／分钟高速离心８分钟后取上层液体；用氯仿／异戊醇（２４∶１，Ｖ　Ｖ↑［－１］）重复抽提一次；定量移取上层清液于新的２ｍｌ离心管中，再加入５Ｍ　ＮａＣｌ（在混合液中达到终浓度为２Ｍ）和０．６倍体积的异丙醇，室温孵育１小时；移取上清液，加入２倍体积８０％乙醇，并在室温放置１０分钟，以使ＤＮＡ沉淀；以１０，０００转／分钟高速离心１５分钟；弃上层液体，获得ＤＮＡ沉淀，并用７０％乙醇漂洗２次后，室温或通气风干ＤＮＡ，用２００ｕＬＴＥ溶液溶解。ｂ）ＤＮＡ的纯化：在粗ＤＮＡ的ＴＥ溶液中加入２０ｕＬ　１０ｍｇ／ｍＬ的ＲＮＡ酶，于３７℃处理３０分钟以去除ＲＮＡ；加入等体积的Ｔｒｉｓ饱和酚，混合均匀直至形成乳白状混合物；以１０，０００转／分钟高速离心５分钟；将上清液移至新的２ｍＬ离心管；再用氯仿／异戊醇（２４∶１，Ｖ　Ｖ↑［－１］）抽提两次；移取的上清液用０．６倍体积的异丙醇（ＮａＣｌ终浓度为２．０Ｍ）孵育１０分钟；移取上清液，加入２０ｕＬ醋酸钠和１倍体积的８０％乙醇，静置３０分钟，以１０，０００转／分钟高速离心１５分钟，收获ＤＮＡ沉淀；沉淀的ＤＮＡ用７０％乙醇洗涤２次，风干后用５０ｕＬ　ＴＥ溶液溶解。ｃ）于－２０℃下保存备用。ｄ）用紫外分光光度计在２６０ｎｍ、２８０ｎｍ和２３０ｎｍ下对ＤＮＡ进行纯度和浓度检测。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈珂，尹春英，胡尚连，阮莉萍，焦娟玉，
申请(专利权)人：陈珂，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]