源自生存素的新型强力ＭＨＣ　Ⅱ类肽制造技术

本发明专利技术涉及用于免疫治疗方法的肽、核酸和细胞。特别是，本发明专利技术涉及癌症的免疫疗法。本发明专利技术进一步涉及源自生存素的肿瘤相关细胞毒性Ｔ辅助细胞（ＣＴＬ）肽表位，为单独或与作为刺激抗肿瘤免疫反应的疫苗组合物的活性药物成分的其它肿瘤相关肽组合在一起。本发明专利技术特别涉及三种新型肽序列及其变体，其源自可用于引发抗肿瘤免疫反应的疫苗组合物中的人肿瘤ＨＬＡ　Ｉ类和ＩＩ类分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】源自生存素的新型强力MHC I I类肽本专利技术涉及用于免疫治疗方法的肽、核酸和细胞。尤其是，本专利技术涉及癌症的 免疫疗法。本专利技术进一步涉及源自生存素的肿瘤相关细胞毒性T辅助细胞(CTL)肽表 位，为单独或结合其它作为刺激抗肿瘤免疫反应疫苗复合物的活性药物成分的肿瘤相关 肽。本专利技术尤其涉及三种新型肽序列及其变体，系源自可用于引发抗肿瘤免疫反应的疫 苗组合物中的人肿瘤HLAI类和II类分子。专利技术背景神经胶质瘤是源自神经系统胶质细胞的脑肿瘤。神经胶质细胞(Glial cell)，通 常称为神经胶质(neuroglia)或简单地称为胶质(glia)，是提供支持和营养、保持动态平 衡、形成髓鞘和参与神经系统信号传输的非神经元细胞。神经胶质瘤的两个最重要的亚 群为星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤，根据其来源的正常胶质细胞类型(分别为星形胶质 细胞和少突胶质细胞)而得名。多形性胶质母细胞瘤(以下简称胶质母细胞瘤)属于星形 细胞瘤的亚群，是成人中最常见的恶性脑肿瘤，约占所有恶性脑肿瘤的40%，约占胶质 瘤的50% (CBTRUS，2006)。它对中枢神经系统有很强的侵袭性，是所有胶质瘤中恶性 水平最高(IV级)的肿瘤。由于神经影像学、显微外科学、各种治疗方案(如替莫唑胺 或放射)的进步，在该疾病的治疗方法上已经取得了稳步发展，虽然如此，胶质母细胞 瘤仍无法治愈(Macdonald，2001 ； Burton and Prados, 2000 ； Prados and Levin, 2000)。 该类型的脑肿瘤致死率非常高自首次确诊后的预期平均存活时间为9至12个月。在 1986年到1990年的观察期，其5年存活率为8.0%。截至目前，侵入性治疗，包括肿瘤全 切除，治疗后五年存活率仍然不足 10% (Burton and Prados, 2000 ； Nieder et al.，2000 ； Napolitano et al.，1999 ； Dazzi et al.，2000)。因此，医学上对替代性的有效治疗方法有 着强烈的需求。胶质母细胞瘤的肿瘤细胞是脑肿瘤中分化最低的肿瘤细胞，所以，肿瘤细胞很 可能迁移和增殖，并且具有高度的浸润性，从而导致预后非常差。由于胶质母细胞瘤在 大脑中呈快速、侵袭性及浸润性生长，因此会导致死亡。浸润性生长模式导致这些肿瘤 具有不可切除的特性。同时，胶质母细胞瘤对放疗、化疗也具有相对的抗性，因此，治 疗后复发率高。此外，在手术切除和放疗后，肿瘤细胞的免疫反应对彻底消除肿瘤细胞 无效(Roth and Weller，1999 ； Dix et al., 1999 ； Sablotzki et al.，2000)。胶质母细胞瘤分为原发性胶质母细胞瘤(新肿瘤)和继发性胶质母细胞瘤，这取 决于在未分化星形胶质细胞或胶质前体细胞的恶性转化期间基因机制上的差异。继发性 胶质母细胞瘤发生在最大年龄为45岁的较年轻的人群中。平均在4到5年期间，继发 性胶质母细胞瘤从低级别的星形细胞瘤发展为未分化的星形细胞瘤。相比之下，原发性 胶质母细胞瘤主要发生在较年长的人群中，平均年龄为55岁。一般来说，原发性胶质 母细胞瘤作为暴发性胶质母细胞瘤而发生，特点是在3个月内就可从无任何临床或病理 异常状态进展为胶质母细胞瘤(Pathology and Genetics of the Nervous Systems.29-39 (IARC Press, Lyon, France, 2000))。胶质母细胞瘤沿有髓神经迁移并在中枢神经系统中广泛扩散。对于大多数病例，手术治疗只显示出有限的可持续疗效(Neurol.Med.Chir.(Tokyo)34，91-94，1994 ； Neurol.Med.Chir. (Tokyo) 33，425-458，1993 ； Neuropathology 17, 186-188，1997) (Macdonald, 2001 ； Prados and Levin, 2000)。恶性胶质瘤细胞通过产生会削弱T细胞增殖的免疫抑制物以及产生免疫刺激因 子IL-2，而逃开宿主免疫系统的侦测(Dix et al.，1999)。颅内肿瘤可发生于CNS的任何结构或细胞类型，包括脑、脑膜、脑垂体、头 骨、甚至残留的胚胎组织。在美国，原发性脑肿瘤的总体年发病率是每10万人中有14 例。最常见的原发性脑肿瘤为脑膜瘤，占所有原发性脑肿瘤的27%，以及胶质母细胞 瘤，占所有原发性脑肿瘤的23% (而成人中，胶质母细胞瘤占恶性脑瘤的40%)。这些 肿瘤中，很多都具有侵袭性，并且级别高。原发性脑肿瘤是儿童中最常见的实体瘤，在 儿童中，是仅次于白血病的第二位最常见癌症死亡原因。如今，对胶质母细胞瘤患者有效治疗方法的探究工作仍在进行。已有研究对抗 这些肿瘤细胞的免疫疗法或通过征募免疫系统的治疗方法。首先，在人类的免疫治疗研 究中，Northwest Therapeutics使用“DCVaxBrdn”(脑癌疫苗)治疗胶质母细胞瘤获得 了令人鼓舞的成果，其可诱导抗原特异性CTL反应，与正在采用的标准治疗相比，延长 了中位存活时间，同时最大限度地降低了毒性(Heimbergeretal.，2006)。结直肠癌根据美国癌症协会的报道，在美国，结直肠癌(CRC)是位于第三位的最常见癌 症，受罪的新患者每年超过175,000名。在美国、日本、法国、德国、意大利、西班牙和 英国，每年有超过480,000例患者罹患该疾病。它是发达国家癌症死亡的最常见原因之 一。结直肠癌患者的1年和5年相对存活率分别为84%和64%。确诊5年后存活率继 续下降，10年时下降至57%。如果结直肠癌在早期未扩散阶段被发现，则5年存活率为 90%；但是只有39%的结直肠癌患者会在此阶段得到确诊，主要原因是筛查率低。当癌 细胞已发生区域扩散而累及邻近器官或淋巴结后，5年存活率下降至68%。有远处转移 的患者5年存活率仅为10%。研究表明，结直肠癌的发病是遗传和环境因素之间相互作用的结果。在大多数 病例中，结直肠肿瘤似乎由腺瘤息肉演变而来；但是这个演变过程可能需要很多年。结 直肠癌的主要风险因素是年龄，90%的病例在50岁之后诊断患有此病。根据美国癌症协 会的报道，结直肠癌的其它风险因素包括饮酒、高脂肪和/或红色肉类饮食、水果和蔬 菜的摄取量不足。结直肠癌的发病率继续上升，特别是日本等地区，这些地区接受西化 饮食，摄入过多的脂肪和肉类而纤维摄入量减少，这些因素可能是罪魁祸首。但是发病 率的上升速度比不上以前，这可能是由于进行了更多的筛查和息肉切除从而防止了息肉 发展成为癌症。和大多数实体肿瘤的治疗一样，一线治疗为手术治疗，然而，手术受益者仍仅 限于早期患者，但有很大一部分患者在确诊时已是晚期。基于氟尿嘧啶的化疗方案是晚 期结直肠癌的标准治疗。这些治疗方案的大多数为所谓的FOLFOX方案(输注5-FU/亚 叶酸+奥沙利钼)和FOLFIRI (伊立替康、亚叶酸，团注和连续输注5-FU)方案。第三代细胞毒素类药物的引入，如伊立替康和奥沙利钼，增加了显著改善疗效 的希望，但预后仍较差，转移癌的存活率一般仍只有大约20个月，因此，治疗该疾病的5需求仍远未满足。最近出现了新一代本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肽包含选自ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１至ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．３的组的一个序列或该序列的与ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１至ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．３具有９５％同源性的一种变体，或该序列的诱导与所述变异肽发生Ｔ细胞交叉反应的一种变体；其中，所述肽不是人类生存素的全长多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2008-5-14 08008944.4;US 2008-5-14 61/053,1821.一种肽包含选自SEQ ID No.l至SEQ ID No.3的组的一个序列或该序列的与SEQ ID No.l至SEQ ID No.3具有95%同源性的一种变体，或该序列的诱导与所述变异肽发生T 细胞交叉反应的一种变体；其中，所述肽不是人类生存素的全长多肽。2.根据权利要求1的肽或其变体，其中所述肽或其变体保持着与人类主要组织相容性 复合体(major histocompatibility complex, MHC) I类或II类分子相结合的能力，并且其中 所述肽优选能够刺激CD4或CD8T细胞。3.根据权利要求1或2的肽，其中所述肽选自具有选自HLA-DR和HLA_A*02的组 的一种特异性HLA亚型的一种肽，并且其中所述肽优选包含其特异性锚氨基酸基序。4.根据权利要求1至3任一项所述的肽，其中所述肽或其变体的总长度为8至100个 氨基酸，优选为8至30个氨基酸，更优选为8至16个氨基酸，最优选为该肽是由或基本 由根据SEQ ID No.l至SEQ ID No.3的任一氨基酸序列组成。5.根据权利要求1至4任一项所述的肽，其中所述肽为融合蛋白，尤其包含HLA-DR 抗原相关不变链(Ii)的N_端氨基酸。6.根据权利要求1至5任一项所述的一种编码肽的核酸或一种能表达所述核酸的表达 载体。7.根据权利要求1至5任一项所述的肽、或根据权利要求6所述的药用核酸或表达载体。8.—种宿主细胞包含根据权利要求6所述的核酸或表达载体，其中所述宿主细胞优选 为抗原提呈细胞，尤其是树突状细胞或抗原提呈细胞。9.一种制备根据权利要求1至7任一项所述的肽的方法，该方法包括培养根据权利要 求11所述的表达权利要求8所述核酸的宿主细胞或根据权利要求9的表达载体，以及从 该宿主细胞或其培养基中分离出肽。10.—种体外制备激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的方法，包括将CTL与载有抗原 的人类I或II类MHC分子进行体外接触，该等分子在合适的抗原提呈细胞表面或人工模 拟构造的抗原提呈细胞表面上表达一段足够的...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬斯蒂万诺维奇，赛瑟利戈泰芬奇斯，汉斯宙戈冉曼思，托尼怀申克，彼得莱维卓尔斯奇，
申请(专利权)人：伊玛提克斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]