一种全液相依替巴肽(Eptifibatide)的合成方法技术

技术编号:4889991 阅读:575 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术属生物化学技术领域,特别涉及了一种新的依替巴肽(Eptifibatide)的液相合成方法。技术方案是:1.采用Trt-Mpa-OH和H-Lys(Fmoc)-OMe为原料合成二肽,脱去Fmoc保护基后运用金属有机催化方法与Boc-保护的硫脲进行胍基化反应后水解得到的二肽偶联物Trt-Mpa Harg(Boc)2-OH;2.按照Fmoc氮端保护策略液相多肽合成H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(P1)-NH2片段,其中P1为Trt-及Acm-保护基;3.将Trt-Mpa-Har(Boc)2-OH和H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(P1)-NH2片段缩合得到全保护肽Trt-Mpa-Har(Boc)2-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(P1)-NH2;4.全保护七肽脱去各侧链保护基团后氧化成环得到依替巴肽(Eptifibatide)粗品;6.依替巴肽(Eptifibatide)粗品经纯化后冻干制得纯品依替巴肽(Eptifibatide)。本发明专利技术的方法操作简便,解决了片段胍基化的合成困难问题,提高了收率,改善了二肽偶联物的稳定性;全液相肽合成的应用解决了固相合成成本高的缺陷,大幅度降低了成本。

【技术实现步骤摘要】

该专利技术名称是‘’,属 于生物化学
,涉及应用金属化合物络合催化得到二肽偶联物后液相合成依替巴肽 (Eptifibatide)的反应流程。
技术介绍
依替巴肽,英文名为Eptifibatide,分子式为C35H49N11O9S2,分子结构式为

【技术保护点】
一种液相合成依替巴肽(Eptifibatide)的方法,包括以下五个主要阶段:(1).本专利技术采用过渡金属盐络合催化胍基化液相制备Trt-Mpa-Harg(Boc)↓[2]-OH;(2).为防止消旋,本专利技术应用DIC/HOCt,DCC/HOAt或HOBt的混合搭配,于液相中,C->N方向合成Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH↓[2],Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH↓[2],然后将它们与Trt-Mpa-Harg(BOC)↓[2]-OH聚合,于液相中得七肽片断Trt-Mpa-Harg(...

【技术特征摘要】
一种液相合成依替巴肽(Eptifibatide)的方法,包括以下五个主要阶段(1).本发明采用过渡金属盐络合催化胍基化液相制备Trt Mpa Harg(Boc)2 OH;(2).为防止消旋,本发明应用DIC/HOCt,DCC/HOAt或HOBt的混合搭配,于液相中,C >N方向合成Fmoc Gly Asp(OtBu) Trp(Boc) Pro Cys(Acm) NH2,Fmoc Gly Asp(OtBu) Trp(Boc) Pro Cys(Trt) NH2,然后将它们与Trt Mpa Harg(BOC)2 OH聚合,于液相中得七肽片断Trt Mpa Harg(BOC)2 Gly Asp(OtBu) Trp(Boc) Pro Cys(Acm) NH2Trt Mpa Harg(BOC)2 Gly Asp(OtBu) Trp(Boc) Pro Cys(Trt) NH2;(3).试剂 三氟乙酸/三异丙基硅烷/苯甲醚/茴香硫醚/水95∶2.5∶2.5∶2.5∶2.5去保护基;(4).用乙醚沉淀出线性七肽Mpa Harg Gly Asp Trp Pro Cys(Acm) NH2,Mpa Harg Gly Asp Trp Pro Cys NH2;(5).线性七肽Mpa Harg Gly Asp Trp Pro Cys(Acm) NH2,Mpa Harg Gly Asp Trp Pro Cys NH2用80 100mM酸性碘/乙醇溶液氧化成环得依替巴肽(Eptifibatide)。2.根据权利要求1所概括的阶段,其特征在于本发明包括以下二十二个具体步骤(1).Trt-Mpa-Lys (Fmoc) -OMe 的制备。由 Trt-Mpa-OH 与 H-Lys ((Fmoc) -OMe 偶合得来; 反应体系中偶合试剂为DIC/HOCt ;溶剂为DMF ;反应温度为0_35°C ; H-Lys ((Fmoc)-OMe,Trt-Mpa-OH,偶合试剂的摩尔数均等同; 冰乙醚沉淀出反应产物。(2).Trt-Mpa-Lys-OMe 的制备。由 Trt-Mpa-Lys (Fmoc) -OMe 去 Fmoc 保护基而得;反应 体系中去Fmoc试剂为25%六氢吡啶/DCM ;反应持续一个小时。(3).Trt-Mpa-Harg (Boc) 2_0Me 的制备。由 Trt-Mpa_Lys-OMe 与 Boc-NH-C (S) -NH-Boc 在有机碱存在条件下,金属盐络合剂催化回流反应而得;反应体系中反应溶剂为DMF ;回流反应温度为40°C ;Boc-NH-C (S) -NH-Boc 的摩尔数是 Trt-Mpa-Lys-OMe 的摩尔数的 2 倍;过渡金属盐络合剂的摩尔数与B0c-NH-C(S)-NH-B0c的摩尔数等同;过渡金属盐络合剂包括锰盐,铁盐,钴盐,镍盐,铜盐,银盐,汞盐,镉盐,锌盐以及铅盐有机碱包括吡啶,三乙胺等叔胺; 冰乙醚沉淀出反应产物。(4).Fmoc-Pro-Cys (Acm) -NH2 的制备。由 Fmoc-Pro-OH 与 H-Cys (Acm) -NH2 聚合而得; 反应体系中偶合试剂为DIC与HOCt ;反应溶剂为DMF ’反应温度0_35°C ; Fmoc-Pro-OH, H-Cys (Acm)-NH2,偶合试剂的摩尔数均等同; 冰乙醚沉淀出反应产物。(5).H-Pro-Cys (Acm) -NH2 的制备。由 Fmoc-Pro-Cys (Acm) -NH2 去 Fmoc 保护基而得;反应体系中去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM ;反应持续一个小时。(6).Fmoc-Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2 的制备。 由 H-Pro-Cys (Acm) _NH2 与 Fmoc-Trp (Boc) -OH 偶合而得;反应体系中偶合试剂为DCC与HOBt ;反应溶剂为DMF ;反应温度为0_35°C ; Fmoc-Trp (Boc) -OH, H-Pro-Cys (Acm) _NH2,偶合试剂的摩尔数均等同; 冰乙醚沉淀出反应产物。(7).H-Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) _NH2 的制备。由 Fmoc—Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) _NH2 去 Fmoc保护基而得;反应体系中去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM ;反应持续一个小时。(8).Fmoc-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) _NH2 的制备。由 H-Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2 与 Fmoc-Asp (OtBu) -OH 偶合而得; 反应体系中偶合试剂为DCC与HOAt ;反应溶剂为DMF ;反应温度为0_35°C ;Fmoc-Asp (OtBu) -OH, H-Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;冰乙醚沉淀出反应产物。(9).H-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2 的制备。由 Fmoc-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) _NH2 去 Fmoc 保护基而得; 反应体系中去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM ;反应持续一个小时。(10).Fmoc-Gly-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2 的制备。由 H-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2 与 Fmoc-Gly-OH 聚合而来; 反应体系中偶合试剂为DCC与HOAt ;反应溶剂为DMF ;反应温度为0_35°C ;Fmoc-Gly-OH, H-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2,偶合试剂的摩尔数均等同;冰乙醚沉淀出反应产物。(11).H-Gly-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2 的制备。由 Fmoc-Gly-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) _NH2 去 Fmoc 保护基而得; 反应体系中去Fmoc保护基试剂为25%六氢吡啶/DCM ;反应持续一个小时。(12).Trt-Mpa-Harg (Boc) -Gly-Asp (OtBu) -Trp (Boc) -Pro-Cys (Acm) -NH2 的制备。由 H -Gly-Asp (OtBu) -Trp...

【专利技术属性】
技术研发人员:阮小丽
申请(专利权)人:杭州诺泰制药技术有限公司
类型:发明
国别省市:86[中国|杭州]

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