利用CRISPR-Cas9系统敲除甘蓝型油菜BnaFAH基因的方法和应用技术方案

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体地涉及一种利用CRISPR‑Cas9系统敲除甘蓝型油菜BnaFAH基因的方法和应用。利用CRISPR‑Cas9系统定点敲除甘蓝型油菜BnaFAH基因的两个拷贝，在甘蓝型油菜BnaFAH基因两个拷贝的第四和第六个外显子保守区域选取2个靶标片段并分别构建BnaFAH‑Cas9植物表达载体，通过农杆菌侵染的方法导入到甘蓝型油菜下胚轴愈伤并再生成苗，在两种sgRNA和Cas9核酸酶的共同作用下，对BnaFAH基因两个拷贝进行双链剪切，通过细胞自身修复功能，最终实现靶标基因片段上的随机缺失，完成了基因敲除，并获得突变体植株，经验证BnaFAH基因经敲除后获得的突变植株增强了对小菜蛾的抗性，说明该基因是调控甘蓝型油菜抗虫性的关键基因，对选育新的甘蓝型油菜抗虫性品种具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体地涉及一种利用crispr-cas9系统敲除甘蓝型油菜bnafah基因的方法和应用。

技术介绍

1、甘蓝型油菜( brassica napus l.)属于十字花科芸薹属，是全球最重要的大宗油料作物之一。虫害是造成甘蓝型油菜减产的重要原因之一，过量使用农药使得害虫产生了极高的抗药性，并引起了严重的环境污染和食品安全隐患等问题。因此提高作物自身对虫害的抗性是有效抑制农作物虫害以及减少农药施用的理想途径，深入探究植物抗虫机制对作物抗虫育种及农业可持续性发展具有重要意义。

2、近年来，菜蛾 plutella xylostella(l.)（鳞翅目：菜蛾科）已成为十字花科作物（包括油菜）最具破坏性的害虫之一。其幼虫取食寄主植物叶片，导致严重的作物损失。目前，化学防治仍是控制菜蛾的主要手段。由于每个生长季需要频繁施药才能达到满意的防治效果，害虫已对大多数登记杀虫剂产生抗药性。此外，农药使用对人类健康和环境产生了负面影响，为避免此类不良后果，许多科学家将研本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.两种特异性靶向甘蓝型油菜BnaFAH基因的sgRNA，其特征在于，sgRNA-1的核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示，sgRNA-2的核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示。

2.利用CRISPR-Cas9系统敲除甘蓝型油菜BnaFAH基因的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，根据sgRNA-1设计的寡核苷酸序列如SEQID NO.3-4所示，根据sgRNA-2设计的寡核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，用于检测A06染色体中B...

【技术特征摘要】

1.两种特异性靶向甘蓝型油菜bnafah基因的sgrna，其特征在于，sgrna-1的核苷酸序列如seq id no .1所示，sgrna-2的核苷酸序列如seq id no .2所示。

2.利用crispr-cas9系统敲除甘蓝型油菜bnafah基因的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，根据sgrna-1设计的寡核苷酸序列如seqid no.3-4所示，根据sgrna-2设计的寡核苷酸序列如seq id no.5-6所示。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，用于检测a06染色体中bnafah...

【专利技术属性】
技术研发人员：支添添，周舟，陈纪鹏，陈刚，
申请(专利权)人：宜春学院，
类型：发明
国别省市：