【技术实现步骤摘要】
本申请涉及合成生物学领域，特别是终止密码子通读和蛋白质工程领域。特别地，本申请提供了一种在转录组和翻译组内、序列特异性解码假尿嘧啶修饰密码子的突变型trna。此外，本申请还提供了包含所述突变型trna的翻译系统，以及基于所述突变型trna响应所述假尿嘧啶修饰密码子，从而实现位点特异性氨基酸插入的方法。进一步，本申请还提供了基于所述突变型trna的rna修饰辅助的密码子拓展(rce)技术。
技术介绍
1、终止密码子是绝大多数细胞中通用的翻译终止信号，在多种生命体内参与各种各样的蛋白质翻译终止，因此终止密码子的功能履行过程十分保守且严格，否则会使得细胞生命活动的主要执行者蛋白质获得更高的翻译错误概率。其中，一种情况下，具有生理意义的基因编码区出现提前终止密码子(ptc,premature termination codon)，使得生命活动的必要蛋白不能正常加工和折叠；另一种情况下，则是指挥基因翻译终止的终止密码子出现通读现象(scr,stop codon read-through)，产生蛋白羧基端延长序列，从而调控蛋白的定位及功能。因此，对...
【技术保护点】
1.tRNA突变体，其相比于野生型tRNA，包含在选自以下一个或多个位置的核苷酸置换突变：
2.权利要求1的tRNA突变体，其相比于野生型tRNA，包含选自以下的一个或多个突变：
3.权利要求1或2的tRNA突变体，其相比于野生型tRNA，包含选自以下的突变：
4.权利要求1-3任一项的tRNA突变体，其中，所述野生型tRNA选自：来源于Methanosarcina mazei(马氏甲烷八叠球菌)的tRNA(例如，MmtRNAPyl、MmtRNATet)、来源于Methanosarcina spelaei Spe(洞穴甲烷八叠球菌)...
【技术特征摘要】
1.trna突变体，其相比于野生型trna，包含在选自以下一个或多个位置的核苷酸置换突变：
2.权利要求1的trna突变体，其相比于野生型trna，包含选自以下的一个或多个突变：
3.权利要求1或2的trna突变体，其相比于野生型trna，包含选自以下的突变：
4.权利要求1-3任一项的trna突变体，其中，所述野生型trna选自：来源于methanosarcina mazei(马氏甲烷八叠球菌)的trna(例如，mmtrnapyl、mmtrnatet)、来源于methanosarcina spelaei spe(洞穴甲烷八叠球菌)的trna(例如，spetrnapyl)、来源于methanomethylophilus alvus(阿尔维斯嗜甲烷甲基菌)的trna(例如，alvtrnapyl)、来源于methanomassiliicoccus intestinalis(肠道种甲烷八叠球菌)的trna(例如，inttrnapyl)。
5.权利要求1-4任一项的trna突变体，其相比于来源于methanosarcina mazei的野生型trna(例如，mmtrnapyl、mmtrnatet)，包含选自以下的一个或多个突变：
6.权利要求5的trna突变体，其包含反密码子cua；
7.权利要求5的trna突变体，其包含反密码子uca；
8.权利要求5的trna突变体，其包含反密码子uua；
9.权利要求1-4任一项的trna突变体，其相比于来源于methanomethylophilus alvus的野生型trna(例如，alvtrnapyl)，包含选自以下的一个或多个突变：
10.权利要求9的trna突变体，其包含反密码子cua；
11.权利要求9的trna突变体，其包含反密码子uca；
12.权利要求9的trna突变体，其包含反密码子uua；
13.权利要求1-4任一项的trna突变体，其相比于来源于methanomassiliicoccusintestinalis的野生型trna(例如，inttrnapyl)，包含选自以下的一个或多个突变：
14.权利要求13的trna突变体，其包含反密码子cua；
15.权利要求13的trna突变体，其包含反密码子uca；
16.权利要求13的trna突变体，其包含反密码子uua；
17.权利要求1-4任一项的trna突变体，其相比于来源于methanosarcina spelaei spe的野生型trna(例如，spetrnapyl)，包含突变：37g；
18.权利要求17的trna突变体，其包含反密码子uca；
19.核酸分子，其编码权利要求1-18任一项的...
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