一种生产bFGF的重组表达载体和细胞及生产方法技术

本发明专利技术公开了一种生产bFGF的重组表达载体和细胞及生产方法，涉及生物蛋白生产技术领域。本发明专利技术在pGEX‑6P‑1商业化载体的基础上改进从而制备高表达bFGF的重组表达载体，并利用其转化大肠杆菌细胞得到重组大肠杆菌细胞，进而利用重组大肠杆菌细胞得到高产量、高纯度的bFGF生产方法。本发明专利技术通过对表达载体的启动子改造、融合表达单元设计及内含肽突变优化，显著解决了现有重组bFGF生产中存在的表达效率低、纯化工艺复杂、成本高、载体适应性差等技术瓶颈。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物蛋白生产，具体涉及一种生产bfgf的重组表达载体和细胞及生产方法。

技术介绍

1、碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)是一种具有广泛生物学活性的细胞因子，在创伤修复、神经再生、组织工程等领域具有重要应用价值。目前，重组bfgf的生产主要依赖大肠杆菌表达系统，其具有物料成本低、工艺成熟度高、规模化潜力大等优势。然而，现有技术中大肠杆菌表达bfgf仍面临多重技术瓶颈，导致产业化效率受限：

2、1.表达效率与可溶性不足

3、常规表达体系中，bfgf因密码子偏好性差异、分子伴侣缺失及氧化折叠环境不足，超过50％的产物以无活性包涵体形式沉积。未优化的bfgf产量通常低于2mg/l，需通过梯度透析、氧化还原缓冲液处理等繁琐复性步骤恢复活性，过程损失率高达60-80％。

4、2.纯化工艺复杂且成本高昂

5、传统方法需通过镍亲和层析、离子交换、分子筛等多步(6-8步)纯化工艺，不仅操作繁琐、设备投入大，还导致产物回收率低。例如，采用pet28a等基础载体时，bfgf综合生产成本高达5000-6000元/微克，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产bFGF的重组表达载体，包括CBD-MxeGyrA(C1A)-bFGF-his融合表达单元，其特征在于，还包括pGEX-6P-1载体的pGEX-LacUV5改造载体，所述pGEX-LacUV5改造载体由pGEX-6P-1载体的tac启动子通过克隆技术替换为LacUV5启动子而得，所述CB D-MxeGyrA(C1A)-bFGF-his融合表达单元装载至pGEX-LacUV5改造载体中。

2.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述LacUV5启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述C...

【技术特征摘要】

1.一种生产bfgf的重组表达载体，包括cbd-mxegyra(c1a)-bfgf-his融合表达单元，其特征在于，还包括pgex-6p-1载体的pgex-lacuv5改造载体，所述pgex-lacuv5改造载体由pgex-6p-1载体的tac启动子通过克隆技术替换为lacuv5启动子而得，所述cb d-mxegyra(c1a)-bfgf-his融合表达单元装载至pgex-lacuv5改造载体中。

2.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述lacuv5启动子的核苷酸序列如seq id no:1所示。

3.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述cbd...

【专利技术属性】
技术研发人员：王昊，刘有彬，
申请(专利权)人：青岛引物生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：