一种基于级联反应的质粒消除模块制造技术

本发明专利技术涉及基因工程领域，特别是针对一种基于级联反应的质粒消除模块，包括三类相互独立的表达区域，其中一类区域为反义RNA表达区域，包括反义RNA、反义RNA的启动子及终止子构成；所述反义RNA为代谢关键基因mRNA的反义RNA，能与代谢关键基因mRNA结合阻碍代谢关键基因mRNA翻译；一类区域为反义中和RNA表达区域，包括反义中和RNA、反义中和RNA的诱导型启动子及终止子构成；最后一类区域为转录因子区域，由转录因子片段自带的组成型启动子，其包括RNA聚合酶结合位点及转录起始位点、核糖体结合位点、转录因子翻译区、终止子构成；所述反义中和RNA是与反义RNA序列互补，能结合反义RNA使之无法与代谢关键基因mRNA结合并抑制反义RNA对代谢关键基因mRNA产生翻译阻碍的RNA片段。本发明专利技术消除效率高，可根据需要自由设置消除对象，可实现多种质粒的选择性或同步消除。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，特别是针对一种基于级联反应的质粒消除模块。

技术介绍

1、游离型质粒是动植物、微生物细胞遗传操作的通用平台，可用于基因组编辑、异源蛋白表达、基因电路搭建等目的。但当使用基因组编辑或基因电路质粒实现基因组编辑或基因电路设计目的后，搭载在质粒上的基因组编辑工具或基因电路就成了细胞基因组的不稳定因素，此时需要对质粒进行消除，以获得无质粒细胞。现行的质粒消除技术主要分为3种，分别是温敏复制子质粒消除、sacb质粒消除以及crispr蛋白相关质粒消除技术。

2、温敏复制子质粒消除效率偏低，常用于低拷贝质粒消除，对于中高拷贝质粒消除效果不佳。且同个细胞内同种复制子一般只能同时服务一种质粒，若用温敏复制子服务多种质粒则可能加剧质粒的自发丢失，不利于相关实验或生产工作的开展；

3、基于sacb基因质粒消除能同时服务于多个质粒，但当多种质粒存在细胞内时，基于sacb基因的质粒消除方法无法准确的消除特定种类的质粒，且其对突变的耐受能力较弱，容易出现失效的情况；

4、crispr蛋白相关质粒消除。基于crispr蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于级联反应的质粒消除模块，其特征在于，包括三类相互独立的表达区域，其中一类区域为反义RNA表达区域，包括反义RNA、反义RNA的启动子及终止子构成；所述反义RNA为代谢关键基因mRNA的反义RNA，能与代谢关键基因mRNA结合阻碍代谢关键基因mRNA翻译的RNA片段；一类区域为反义中和RNA表达区域，包括反义中和RNA、反义中和RNA的诱导型启动子及终止子构成；最后一类区域为转录因子区域，由转录因子片段自带的组成型启动子，其包括RNA聚合酶结合位点及转录起始位点、核糖体结合位点、转录因子翻译区、终止子构成；所述反义中和RNA是与反义RNA序列互补，能结合反义RNA使之无法与代谢...

【技术特征摘要】

1.一种基于级联反应的质粒消除模块，其特征在于，包括三类相互独立的表达区域，其中一类区域为反义rna表达区域，包括反义rna、反义rna的启动子及终止子构成；所述反义rna为代谢关键基因mrna的反义rna，能与代谢关键基因mrna结合阻碍代谢关键基因mrna翻译的rna片段；一类区域为反义中和rna表达区域，包括反义中和rna、反义中和rna的诱导型启动子及终止子构成；最后一类区域为转录因子区域，由转录因子片段自带的组成型启动子，其包括rna聚合酶结合位点及转录起始位点、核糖体结合位点、转录因子翻译区、终止子构成；所述反义中和rna是与反义rna序列互补，能结合反义rna使之无法与代谢关键基因mrna结合并抑制反义rna对代谢关键基因mrna产生翻译阻碍的rna片段。

2.根据权利要求1所述的质粒消除模块，其特征在于，所述的转录因子为能与特定化合物结合后，诱导结合位点下游基因转录的蛋白质；或未与特定化合物结合前能诱导下游基因转录，与特定化合物结合后无法诱导结合位点下游基因转录的蛋白质。

3.根据权利要求2所述的质粒消除模块，其特征在于，所述的转录因子为阿拉伯糖转录因子。

4.根据权利要求1所述的质粒消除模块，其特征在于，所述的转录因子片段自带的组成型启动子为阿拉伯糖转录因子自带组成型启动子。

5.根据权利要求1所述的质粒消除模块，其特征在于，所述的反义rna启动子包括j23119启动子、t7、tet、trc、trp、tac以及谷氨酸杆菌常用抗生素氯霉素、卡那霉素、青霉素抗性基因相关的的组成型启...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：杭州元腾生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：