【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域，特别是针对一种基于多重输入级联反应的质粒消除模块。
技术介绍
1、游离型质粒当使用基因组编辑或基因电路质粒实现基因组编辑或基因电路设计目的后，搭载在质粒上的基因组编辑工具或基因电路就成了细胞基因组的不稳定因素，此时需要对质粒进行消除。
2、温敏复制子质粒消除效率偏低，服务多种质粒则可能加剧质粒的自发丢失，不利于相关实验或生产工作的开展；基于sacb基因质粒消除能同时服务于多个质粒，无法准确的消除特定种类的质粒，且其对突变的耐受能力较弱，容易出现失效的情况；crispr蛋白相关质粒消除。基于crispr蛋白的质粒消除技术存在crispr蛋白基因突变失效或crispr蛋白切割脱靶的风险，且crispr相关蛋白元件基因序列较长，不利于在难以转入大质粒的底盘微生物中使用。当底盘细胞内无天然crispr蛋白可利用时，需要额外的转入带有crispr蛋白的质粒，而带crispr蛋白的质粒自靶向消除失败率较高。
技术实现思路
1、本专利技术提出了一种基于反义rna的...
【技术保护点】
1.一种基于多重输入级联反应的质粒消除模块，其特征在于，包括四类相互独立的表达区域，第一类区域为反义RNA表达区域，包括反义RNA、反义RNA的组成型启动子及终止子；所述反义RNA为代谢关键基因mRNA的反义RNA，能与代谢关键基因mRNA结合阻碍代谢关键基因mRNA翻译的RNA片段；第二类区域为第一反义中和RNA表达区域，包括第一反义中和RNA的诱导型启动子或含有组成型启动子与阻遏蛋白结合位点的片段、第一反义中和RNA序列、第一接头序列及终止子；第三类区域为第二反义中和RNA表达区域，包括第二反义中和RNA的诱导型启动子或含有组成型启动子与阻遏蛋白结合位点的片段、第...
【技术特征摘要】
1.一种基于多重输入级联反应的质粒消除模块，其特征在于，包括四类相互独立的表达区域，第一类区域为反义rna表达区域，包括反义rna、反义rna的组成型启动子及终止子；所述反义rna为代谢关键基因mrna的反义rna，能与代谢关键基因mrna结合阻碍代谢关键基因mrna翻译的rna片段；第二类区域为第一反义中和rna表达区域，包括第一反义中和rna的诱导型启动子或含有组成型启动子与阻遏蛋白结合位点的片段、第一反义中和rna序列、第一接头序列及终止子；第三类区域为第二反义中和rna表达区域，包括第二反义中和rna的诱导型启动子或含有组成型启动子与阻遏蛋白结合位点的片段、第二接头序列、第二反义中和rna序列以及终止子；所述第一反义中和rna和第二反义中和rna是能通过接头实现非共价链接形成完整的反义中和rna并能结合反义rna，使之无法与代谢关键基因mrna结合并抑制反义rna对代谢关键基因mrna产生翻译阻碍的rna片段；第四类区域为阻遏蛋白基因/转录因子表达区域，包括阻遏蛋白基因自带的组成型启动子，其包括rna聚合酶结合位点及转录起始位点、核糖体结合位点、阻遏蛋白翻译区/转录因子自带的组成型启动子，其包括rna聚合酶结合位点及转录起始位点、核糖体结合位点转录因子翻译区、终止子。
2.根据权利要求1所述的质粒消除模块，其特征在于，所述的反义rna使用组成型启动子进行转录；组成型启动子包括t7、tet、trc、trp、j23119启动子、tac以及谷氨酸杆菌常用抗生素氯霉素、卡那霉素抗性基因相关的的组成型启动子；终止子为rrnb t1、rrnb t2或cyc1终止子。
3.根据权利要求1所述的质粒消除模块，其特征在于，所述的诱导转录因子为能与特定化合物结合后，诱导结合位点下游基因转录的蛋白质；或未与特定化合物结合前能诱导下游基因转录，与特定化合物结合后无法诱导结合位点下游基因转录的蛋白质。
4.根据权利要求1所述的质粒消除模块，其特征在于，所述反义中和rna诱导型启动子的片段为阿拉伯糖转录因子以及阿拉伯糖转录因子启动子，其包括阿拉伯糖转录因子启动子与阿拉伯糖转录因子结合...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：杭州元腾生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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