一种破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡及其制备方法和应用。本发明专利技术采用一步法克隆试剂盒构建pClyA‑DC‑STAMP重组质粒；再转化到EcN中并采用两步温度法进行二级预培养物的培养，促进EcN高效表达和分泌膜表面穿插DC‑STAMP蛋白的外囊泡；最后进行分离纯化，制备获取工程化益生菌外囊泡BEV‑DCS。所述BEV‑DCS可高效装载具有抑制破骨细胞分化的功能多肽，提高其体内稳定性和增强其前体破骨细胞胞内递送效率，进而改善其抑制破骨细胞分化作用。在卵巢切除小鼠骨质疏松模型中，展示出了显著的骨靶向能力和骨质疏松治疗效果，且无明显毒副作用。本发明专利技术提供了一种安全高效的破骨细胞靶向递送药物载体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡及其制备方法和应用，属于生物工程。

技术介绍

1、骨质疏松症(osteoporosis，op)是在中老年人群中常见的骨骼疾病，其主要临床表现包括骨密度降低、骨微结构破坏以及骨强度减弱。骨质疏松症的发生主要是由于成骨细胞和破骨细胞调节的骨形成与骨吸收过程失衡所致。针对这一发生机制，目前临床上使用的药物主要包括促进骨生成的甲状旁腺素及其类似物特立帕肽，以及抑制破骨细胞功能的双膦酸盐和降钙素等。然而，这些传统治疗药物往往存在治疗效果不佳和毒副作用显著的问题。因此，研发新的治疗药物更加安全有效地治疗op仍迫在眉睫。

2、鉴于特立帕肽和降钙素的广泛使用，功能性多肽类药物正在大量研发用于更加安全有效的op预防与治疗。这些功能多肽可以精准地调控与破骨细胞或成骨细胞分化相关的信号通路，从而特异性地调节骨的形成与吸收。frattide(frat)是一种来源于与糖原合成酶激酶-3β(gsk3β)相互作用的蛋白，可以抑制gsk3β的磷酸化。我们的前期研究显示，frat能够通过抑制nfatc1介导的破骨细胞分化，减少卵巢本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡BEV-DCS，其特征在于，所述益生菌为大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coliNissle 1917，EcN)，所述益生菌外囊泡膜表面表达破骨细胞靶向融合蛋白DC-STAMP；

2.根据权利要求1所述的破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡BEV-DCS，其特征在于，所述重组质粒表达序列如SEQ ID NO：1所示的基因片段。

3.一种权利要求1或2所述的破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡BEV-DCS的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的...

【技术特征摘要】

1.一种破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡bev-dcs，其特征在于，所述益生菌为大肠杆菌nissle 1917(escherichia colinissle 1917，ecn)，所述益生菌外囊泡膜表面表达破骨细胞靶向融合蛋白dc-stamp；

2.根据权利要求1所述的破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡bev-dcs，其特征在于，所述重组质粒表达序列如seq id no：1所示的基因片段。

3.一种权利要求1或2所述的破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡bev-dcs的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的培养包括：首先将益生菌在37℃摇床中一级培养生长12～24小时，然后在37℃下二级培养生长至od600约为0.6左右；所述诱导dc-stamp蛋白表达包括：在16℃下添加iptg诱导dc-stamp蛋白表达。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3中采用超速离心法提取细菌外囊泡包括：依次将益生菌发酵液10000～20000g下低速离心去除菌体沉淀获得上清液，上清液过滤后通过两次70～120分钟的1×105～1.5×105g超速离心收集获得膜上表达dc-stamp蛋白的外囊泡。

6.权利要求1或2所述的破骨细胞靶向融合的益生菌外囊泡bev-dcs在装载抑制破骨细胞分化的药物和制备靶向递送抑制破骨细胞分化的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑制破骨...

【专利技术属性】
技术研发人员：石业娇，刘晗，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：