【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种高效递送并局部控释氧气以改善her-2阳性胃癌声动力和抗体治疗疗效的靶向纳米颗粒的制备方法和应用。
技术介绍
1、胃癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，位于所有恶性肿瘤发病率和死亡率的第五位。由于胃癌的早期症状不明显，因此在确诊时，患者大多处于中晚期。因此，临床上仍迫切需要寻找有效的胃癌治疗方法来延长胃癌患者的生存期。her-2阳性胃癌，是一种特殊类型的胃癌，它在1986年首次被发现。her-2是一种跨膜糖蛋白，属于表皮生长因子受体家族，它通过同源二聚或异源二聚，使酪氨酸激酶结构域磷酸化，诱导细胞增殖、分化、信号转导。her-2阳性胃癌细胞生长更快，侵袭性更强，患者预后更差。
2、曲妥珠单抗是一种抗her-2的单克隆抗体，是治疗her-2阳性胃癌的靶向药物。目前，曲妥珠单抗联合化疗是her-2阳性胃癌的一线治疗方法，但化疗具有明显的毒副作用，容易产生耐药性，曲妥珠单抗也可能因脱靶效应对正常组织产生毒副作用。与化疗相比，声动力治疗作为一种副作用少的微创疗法越来越受到关注。它利用超声激活声敏剂，产生活性氧杀死肿瘤细胞，具有无耐药、可重复治疗、副作用少的优点。然而声敏剂水溶性较差，难以特异性识别肿瘤细胞。因此，我们设想通过使用声动力治疗代替化疗联合曲妥珠单抗，能同时避免化疗的缺点，并提高声动力治疗效果。因此，迫切需要开发结合声动力与曲妥珠单抗的高效药物递送系统，以改善胃癌的治疗。
3、与治疗相关的另一重要问题是乏氧，这是胃癌的固有特征，促进肿瘤细胞的增殖、侵袭与转移。在乏氧条件下，
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高效递送并局部控释o2以增效声动力治疗和抗体治疗疗效的靶向纳米颗粒的制备方法和应用。本专利技术提供的靶向纳米颗粒实现声敏剂、曲妥珠单抗和o2在肿瘤的高效富集，并在超声作用下于肿瘤局部释放o2，提高声动力治疗和抗体治疗的效果。
2、为了实现上述技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、一种高效递送并局部控释o2的靶向纳米颗粒，其中纳米颗粒由脂质化声敏剂焦脱镁叶绿酸a脂质、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-nhs和全氟溴辛烷pfob构成，在纳米颗粒表面通过酰胺反应偶联曲妥珠单抗，纳米颗粒与曲妥珠单抗的质量比为2:1。焦脱镁叶绿酸a脂质、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-nhs的摩尔比为8:1:1。1毫克的纳米颗粒内含全氟溴辛烷pfob 10微升。
4、上述靶向纳米颗粒tppo nps的平均粒径约为249±3.41纳米。
5、上述靶向纳米颗粒tppo nps提高了声敏剂焦脱镁叶绿酸a与曲妥珠单抗的递送效率，并在超声的作用下，局部释放o2，提高her-2阳性胃癌肿瘤的声动力治疗与抗体治疗疗效。其中，超声作用的频率范围为1兆赫兹，0.5-2瓦/平方厘米,占空比10％-50％。
6、本专利技术还提供了高效递送并局部控释o2的靶向纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
7、步骤一：将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000溶解于无水乙醇中得到溶液a。
8、步骤二：将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-nhs溶解于无水乙醇中得到溶液b。
9、步骤三：将脂质化声敏剂(焦脱镁叶绿酸a脂质)溶解于四氢呋喃中得到溶液c。
10、步骤四：将溶液a、b、c混合，经过旋转蒸发，除去有机试剂，在水浴超声条件下加入磷酸盐缓冲液或生理盐水，使其形成含声敏剂的纳米颗粒pnps。
11、步骤五：所得的声敏剂纳米颗粒pnps与曲妥珠单抗在磷酸盐缓冲液或生理盐水中混合，避光条件下轻轻搅拌6小时，通过透析(分子量＝500kda)去除未连接的曲妥珠单抗，得到声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tpnps。
12、步骤六：在冰浴超声条件下，将全氟溴辛烷pfob装载入声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒，得到tppnps。
13、步骤七：将tpp nps分散液置于氧气室中，恒定气流饱和30分钟，得到载氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tppo nps。
14、在步骤四中，溶液a、溶液b、溶液c的摩尔比为1:1:8。
15、在步骤五中，含声敏剂的纳米颗粒pnps与曲妥珠单抗的质量比为2:1。
16、在步骤六中，每1毫克声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tpnps，加入10微升的pfob。
17、本专利技术还提供了按上述技术方案制备的靶向纳米颗粒在her-2阳性胃癌治疗中的应用。
18、在本专利技术中，用二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-nhs和焦脱镁叶绿酸a脂质制备出声敏剂纳米颗粒，然后通过酰胺反应偶联曲妥珠单抗，在探头超声条件下装载全氟溴辛烷pfob，并在恒定气流的氧气室内进行氧饱和，得到载氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tppo nps。载氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tppo nps在增强的渗透与滞留效应与曲妥珠单抗的主动靶向作用下，实现肿瘤部位的高效富集，提高声敏剂焦脱镁叶绿酸a、曲妥珠单抗与o2的递送效率。在超声的作用下，载氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tppo nps在肿瘤局部释放出o2，改善肿瘤乏氧，同时提高声动力与曲妥珠单抗的治疗效果，改善her-2阳性胃癌的治疗结局。
19、本专利技术的有益效果是：
20、本专利技术通过使用脂质化声敏剂、曲妥珠单抗制备出的靶向纳米颗粒，有效避免了游离声敏剂水溶性差、声敏剂与曲妥珠单抗提前泄露带来的毒副作用，提高了两者的生物利用度。利用全氟溴辛烷pfob的氧亲和力，提高o2的递送效率，并在外源性超声的作用下于肿瘤局部释放出o2，改善肿瘤乏氧，同步提高声动力与曲妥珠单抗的治疗效果，显著改善her-2阳性胃癌的治疗结局。
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1.一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒，其中，所述靶向纳米颗粒的载体由脂质化声敏剂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-NHS制备得到声敏剂纳米颗粒PNPs，通过酰胺反应将曲妥珠单抗偶联到纳米颗粒上得到声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒TP NPs，所述声敏剂纳米颗粒P NPs与曲妥珠单抗的质量比为2:1。然后通过探头超声将O2载体液态氟碳包载进TP NPs，得到TPP NPs。
2.如权利要求1所述的一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒含氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒TPPO NPs，其特征在于，所述脂质化声敏剂中的声敏剂选自焦脱镁叶绿酸a，O2的载体液态氟碳选自全氟溴辛烷PFOB。
3.如权利要求2所述的一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒含氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒TPPO NPs，其特征在于，所述脂质化声敏剂为焦脱镁叶绿酸a脂质，其结构式如下：
4.如权利要求2所述的一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒含氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒TPPO
5.如权利要求1所述的一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒含氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒TPPO NPs，其特征在于，所述纳米颗粒的平均水合粒径为249±3.41nm。
6.如权利要求1所述的一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒含氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒TPPO NPs，其特征在于，在超声作用下，靶向纳米颗粒一方面可控释放O2,另一方面发挥声动力治疗的作用。
7.如权利要求1～6任一所述的一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
8.如权利要求7所述的一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤3)中的脂质化声敏剂为焦脱镁叶绿酸a脂质；在步骤4)中，溶液A、溶液B、溶液C的摩尔比为1:1:8；在步骤5)中，声敏剂纳米颗粒P NPs与曲妥珠单抗的质量比为2:1；在步骤6)中，1毫克的声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒TP NPs中加入10微升的PFOB。
9.如权利要求1-8任一所述的一种同时递送声敏剂、O2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒在诊断和治疗HER-2阳性胃癌中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种同时递送声敏剂、o2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒，其中，所述靶向纳米颗粒的载体由脂质化声敏剂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-nhs制备得到声敏剂纳米颗粒pnps，通过酰胺反应将曲妥珠单抗偶联到纳米颗粒上得到声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tp nps，所述声敏剂纳米颗粒p nps与曲妥珠单抗的质量比为2:1。然后通过探头超声将o2载体液态氟碳包载进tp nps，得到tpp nps。
2.如权利要求1所述的一种同时递送声敏剂、o2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒含氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tppo nps，其特征在于，所述脂质化声敏剂中的声敏剂选自焦脱镁叶绿酸a，o2的载体液态氟碳选自全氟溴辛烷pfob。
3.如权利要求2所述的一种同时递送声敏剂、o2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒含氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tppo nps，其特征在于，所述脂质化声敏剂为焦脱镁叶绿酸a脂质，其结构式如下：
4.如权利要求2所述的一种同时递送声敏剂、o2和曲妥珠单抗的靶向纳米颗粒含氧声敏剂-曲妥珠单抗纳米颗粒tppo nps，其特征在于，所述o2的载体为全氟溴辛烷pfob，...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔立刚，梁晓龙，解欣欣，张进霞，孙利红，王昊楠，
申请(专利权)人：北京大学第三医院北京大学第三临床医学院，
类型：发明
国别省市：
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