【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学，具体涉及一种外泌体长链非编码rna在肺癌治疗中的应用。
技术介绍
1、肺癌是癌症死亡主因，发病率和死亡率最高。分子生物学技术发展推动了肺癌分子机制研究，带来新诊断和治疗方法，增加患者治疗选项。肺癌分为小细胞肺癌(sclc)和非小细胞肺癌(nsclc)，其中nsclc发病率更高，且肺癌早期症状不明显，生存率较低，受多种因素影响。晚期癌症中肿瘤异质性很关键，其中肿瘤干细胞在肿瘤微环境中起重要作用。肿瘤干细胞源于正常细胞的基因突变或干化，其最初发现于急性髓系白血病中，随后在其他癌症中也分离出了肿瘤干细胞。肺癌干细胞于2008年被成功筛选分离。肿瘤干细胞通过与肿瘤微环境中的其它成分不断交流以保持一个促进肿瘤生长和进展的环境。目前，肿瘤干细胞对于非干性细胞的影响及其进一步促进肿瘤发生发展的机制仍是有待探索的全新领域。
2、外泌体其内携带包括蛋白质、脂质、dna、等小分子物质，是一种直径为40-160nm的功能性小囊泡。研究显示，外泌体中特定成分表达变化与肿瘤转移密切相关，并在转移各阶段起重要作用。肿瘤微环境(tme)中的多种基质细胞可通过外泌体传递非编码rna，与肿瘤细胞交换信息，促进肿瘤扩散。肿瘤细胞释放的外泌体中的非编码rna能直接影响肿瘤细胞，增强其迁移和侵袭力，促进肿瘤转移。2014年的一项研究表明乳腺癌细胞能通过外泌体将mir-200分子转移给转移能力较弱的乳腺癌细胞，增强后者的转移能力。
3、长链非编码rna是一类rna分子，其核苷酸达200个以上，可于表观遗传、在转录及转录后层
4、目前，关于外泌体与lncrna之间互作关系与机制研究仍是当今科研的热点。外泌体分选货物有多种机制，包括通过escrt(内体分选复合物)依赖性分选机制，该复合体协同作用于内体膜上的泛素化蛋白，促进这些蛋白分选到内体囊泡中，此外还有escrt非依赖性途径，这些途径包括黑色素体途径、鞘磷脂酶途径和atp竞速盒转运蛋白(abt)途径，以上这些途径可能也参与lncrna的分选。除此之外，rna结合蛋白(rbp)在rna的外泌体分选中具有关键功能。许多rbps都参与不同细胞模型中mirna的外泌体分选，例如，fmr1蛋白能够与mirna中的特定序列基序结合，并通过与escrt途径的相互作用，将mirna导入外泌体。此外，rna结合蛋白(rbps)也能够与lncrna上的特定序列结合形成rbps-lncrna复合物，这些复合物可能直接被装载到外泌体中，或者在rbps被泛素化后导致复合物解离，使lncrna被直接装载到外泌体中。
5、外泌体携带功能小分子物质进入受体细胞后，通过释放其内含物的方式参与调控细胞间的信号传导，继而影响受体细胞的功能和行为或改变肿瘤微环境。例如，chen等研究发现异质核糖核蛋白a2b1(hnrnpa2b1)能够直接与长链非编码rnalnmat2相互作用，促使lnmat2进入外泌体中。进入受体细胞后通过募集hnrnpa2b1，增加prox1启动子上的h3k4三甲基化水平，完成对prox1表达的上调，导致淋巴管生成和淋巴转移。yi等人研究发现lncrnah19通过由hnrnpa2b1特异性介导包装到外泌体中，分泌转移到非耐药非小细胞肺癌细胞，从而诱导吉非替尼耐药。另外，外泌体中的lncrna可以通过与mirna的竞争性结合影响基因表达。例如，lncrnah19可通过与mir-7竞争性结合，影响klf4和vegf的表达，进而调控肺腺癌细胞的迁移和侵袭。kong等人发现癌细胞来源的外泌体linc00313通过上调stat6作为mir-135a-3p海绵促进非小细胞肺癌中m2巨噬细胞分化。目前，有关肿瘤干细胞中lncrna和外泌体之间互作机制及其转运至受体非干性细胞发挥作用机制仍不确定，这将是本课题的研究重点之一。
6、cdc42蛋白是rho gtp酶家族的一员，在多种生物学过程中扮演着重要角色。cdc42在细胞黏附、细胞骨架结构形成和细胞周期调控中起重要作用，影响细胞增殖、转化和稳态，以及肿瘤形成的细胞迁移和侵袭过程。但目前关于lncrna与cdc42蛋白之间的互作关系及cdc42促进受体细胞摄取外泌体的机制研究较少，有待进一步探索。
技术实现思路
1、本专利技术通过研究长非编码rnarollcsc与蛋白质cdc42之间的互作关系，及其二者对肺癌的发生发展的影响，发现cdc42蛋白可以与长链非编码rnarollcsc直接结合，携带lncrnarollcsc进入外泌体，从肺癌干细胞(llc-sd)转移到非干性肺癌细胞(llc)中。到达llc后，lncrnarollcsc被释放，与fto结合，fto作为去甲基化酶对lncrnarollcsc进行去甲基化修饰从而增加其稳定性，这进一步的促进了llc的转移能力。此外，我们还发现lncrnarollcsc能够通过激活wnt信号通路中的转录因子myc来增强cdc42基因的转录，形成一个rollcsc/cdc42正反馈循环，进而促进肺癌细胞llc对外泌体的吸收。基于此，本专利技术保护如下技术方案：
2、本专利技术的第一方面提供lncrnarollcsc作为靶点在筛选用于治疗肺癌的药物中的应用。
3、本专利技术的第二方面提供lncrnarollcsc与cdc42作为联合靶点在筛选用于治疗肺癌的药物中的应用。
4、上述的应用技术方案中，所述lncrnarollcsc为外泌体中的lncrna。
5、上述的应用技术方案中，所示外泌体来自肺癌细胞。
6、上述的应用技术方案中，抑制lncrnarollcsc和/或cdc42，抑制肺癌细胞的转移、肿瘤的进展。
7、上述的应用技术方案中，cdc42蛋白与lncrnarollcsc直接结合，携带lncrnarollcsc进入外泌体，从肺癌干细胞转移到非干性肺癌细胞中；抑制lncrnarollcsc和/或cdc42，则抑制非干性肺癌细胞转移。
8、本专利技术的第三方面提供抑制lncrnarollcsc和/或cdc42表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。
9、所述试剂包括核酸分子、蛋白、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.lncRNAROLLCSC作为靶点在筛选用于治疗肺癌的药物中的应用。
2.lncRNAROLLCSC与CDC42作为联合靶点在筛选用于治疗肺癌的药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述lncRNAROLLCSC为外泌体中的lncRNA。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所示外泌体来自肺癌细胞。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：抑制lncRNAROLLCSC和/或CDC42，抑制肺癌细胞的转移、肿瘤的进展。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：
7.抑制lncRNA ROLLCSC和/或CDC42表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述试剂包括核酸分子、蛋白、化合物。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述核酸分子包括siRNA，抑制lncRNAROLLCSC的siRNA的序列为：AGGAGAGAAAGAGGAAGAAAGAATT；抑制CDC42的siRNA的序列为：GCAGA
10.根据权利要求1至9任一项所述的应用，其特征在于：所述lncRNA ROLLCSC的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。
...【技术特征摘要】
1.lncrnarollcsc作为靶点在筛选用于治疗肺癌的药物中的应用。
2.lncrnarollcsc与cdc42作为联合靶点在筛选用于治疗肺癌的药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述lncrnarollcsc为外泌体中的lncrna。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所示外泌体来自肺癌细胞。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：抑制lncrnarollcsc和/或cdc42，抑制肺癌细胞的转移、肿瘤的进展。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：
7.抑制lnc...
【专利技术属性】
技术研发人员：王健宇，韩雪，张予涵，谢佳成，杨思，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：
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